Navegando por Autor "Leite, Elaine Amaral"
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Item Avaliação da citotoxicidade e da atividade in vitro de sistemas autonanoemulsionáveis contendo fármacos anti-Trypanosoma cruzi.(2016) Castro, Kelly Christyne Miranda Pereira de; Bahia, Maria Terezinha; Mosqueira, Vanessa Carla Furtado; Bahia, Maria Terezinha; Leite, Elaine Amaral; Silva, Glenda Nicioli daPara melhorar a eficácia de fármacos como nifurtimox, benznidazol e ravuconazol pode-se utilizar sistemas autonanoemulsionáveis para entrega de fármacos (SNEDDS). O estudo teve como objetivos: (i) avaliar a toxicidade dos SNEDDS e dos respectivos excipientes utilizados no preparo dos SNEDDS Nfx 1 e 2, SNEDDS Bz 3 e SNEDDS Rv 4 em células H9c2, uma linhagem de cardiomiócitos de ratos neonatos, e Hep G2, uma linhagem de hepatócitos de carcinoma humano; e (ii) avaliar a atividade anti-Trypanosoma cruzi dos SNEDDS Nfx 2 e SNEDDS Rv 4 in vitro, utilizando como modelo experimental células H9c2 infectadas pelas cepas Y e Colombiana do T. cruzi. Os excipientes usados no preparo dos SNEDDS não induziram diminuição da viabilidade das células H9c2 e Hep G2 nas mesmas concentrações usadas nas formulações nas doses efetivas de tratamento (5 e 10 μM, para nifurtimox; e 2nM, para ravuconazol). No entanto, o Tween 80 usado no preparo das formulações SNEDDS Nfx 1 e SNEDDS Bz 3, mostrou-se tóxico nos testes de citotoxicidade em células Hep G2, nas concentrações entre 0,065% e 0,26% v/v, reduzindo a viabilidade em mais de 40%. Os SNEDDS Nfx 1 e SNEDDS Bz 3 foram tóxicos a partir da concentração de 25 μM referente ao fármaco livre, por isso não foram realizados os testes de atividade com estes SNEDDS. O SNEDDS Nfx 2 apresentou menor toxicidade em relação ao SNEDDS Nfx 1, apresentando toxicidade a partir da concentração de 50 μM; e o SNEDDS Rv 4 não apresentou toxicidade significativa. Com isso, os SNEDDS Nfx 2 e SNEDDS Rv 4 foram utilizados nos testes de atividade in vitro e apresentaram efeito inibitório superior aos respectivos fármacos livres sobre formas amastigotas das cepas Y e Colombiana do T. cruzi. Este estudo in vitro evidenciou que os SNEDDS podem ser formulações seguras e potencialmente mais ativas contra as formas amastigotas do parasito.Item Avaliação in vivo da eficácia antimalárica, toxicidade cardiovascular e neurocomportamental do arteméter por via oral veiculado em nanocápsulas.(2017) Souza, Ana Carolina Moreira; Guimarães, Andrea Grabe; Mosqueira, Vanessa Carla Furtado; Richard, Sylvain; Guimarães, Andrea Grabe; Fagundes, Elaine Maria de Souza; Leite, Elaine Amaral; Bahia, Maria Terezinha; Isoldi, Mauro CésarO arteméter (ATM) é um antimalárico utilizado clinicamente em combinação (ATC) com outros antimaláricos (WHO, 2016). Apresenta meia vida plasmática curta, baixa biodisponibilidade por via oral e toxicidade cardiovascular e neurológica, entre outros efeitos adversos. Nanocápsulas de poly-ε-caprolactona veiculando ATM (ATM-NC) foram desenvolvidas e caracterizadas anteriormente. O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficácia antimalárica in vivo e os efeitos cardiovasculares e neurocomportamentais de ATM-NC administrado por via oral em comparação ao ATM em sua forma livre. Foram utilizados camundongos C57BL6 fêmeas previamente infectados por Plasmodium berghei para a avaliação da eficácia antimalárica e machos para a avaliação dos efeitos cardiovasculares e neurocomportamentais. Os animais foram tratados por via oral, duas vezes ao dia por 4 dias com veículo (sorbitol/carboximetilcelulose) ou NC branca, ATM livre ou ATM-NC, nas doses de 40, 80 e 120 mg/kg. ATM-NC (120 mg/kg) aboliram a parasitemia e promoveram a sobrevida de 100 %. Para avaliar a cardiotoxicidade foram realizados: 1) eletrocardiograma (ECG) na derivação periférica II antes e após o tratamento em camundongos anestesiados, não infectados e infectados. O ATM livre induziu cardiotoxicidade evidenciado pelo prolongamento dos intervalos QT e QTc. Para a maior dose estudada (120ºmg/kg), em camundongos não infectados, ATM-NC impediu estes prolongamentos em 34 % e 30 %, respectivamente, comparado ao ATM livre. Nos camundongos infectados, ATM-NC também reduziu o prolongamento dos intervalos QT e QTc em 28 % e 27 %, respectivamente. 2) Ecocardiograma (ECO) foi realizado em camundongos não infectados e tratados com ATM livre e ATM-NC na dose de 120 mg/kg. Para este estudo não foram encontradas diferenças significativas entre os grupos avaliados. Os cardiomiócitos de camundongos previamente tratados com a dose de 120 mg/kg foram isolados e avaliados in vitro 3) sob estimulação em campo (1 Hz) em sistema Ionoptix para o transiente de Ca2+ e contratilidade do sarcômero, 4) em sistema patch-clamp para o potencial de ação (PA) e a corrente nos canais de Ca2+. O ATM livre reduziu o transiente de Ca2+ em 41 %, o Ca2+ diastólico em 12 % e a porcentagem de encurtamento do sarcômero de 4,6 % (controle) para 3,1 %. Além disso, o ATM livre causou o prolongamento do PA comparado ao veículo (350,0 ± 49,3 ms e 137,7 ± 20,5 ms, respectivamente). 5) Cardiomiócitos de camundongos não tratados foram isolados e incubados com ATM livre nas concentrações 0,1; 1 e 10 µM. ATM livre 10 µM reproduziu os efeitos sobre Ca2+ observados nos cardiomióciotos dos camundongos tratados, assim indicando efeitos cardiotóxicos. Por outro lado, ATM-NC não causou nenhuma alteração significativa em nenhum dos parâmetros avaliados. A avaliação da neurotoxicidade foi realizada em camundongos não infectados e infectados. Para os camundongos não infectados o ATM livre (120 mg/kg) reduziu significativamente a capacidade de exploração nos braços abertos do labirinto em cruz elevado, indicando transtorno neurocomportamental como a ansiedade. Para animais infectados o tratamento com ATM livre (120 mg/kg) desencadeou comportamentos similares a ansiedade e diminui a capacidade locomotora dos camundongos, pois reduziu em 65 % e 67 % a capacidade exploratória dos braços abertos e fechados do labirinto em cruz elevado. ATM-NC impediu a manifestação dos efeitos neurocomportamentais em camundongos não infectados e reduziu os efeitos sobre os camundongos infectados. Concluímos que o ATM em NC apresentou eficácia por via oral e que NC são capazes de impedir ou minimizar os efeitos cardiotóxicos e neurocomportamentais causados pelo ATM em sua forma livre.Item Avaliação in vivo da segurança cardiovascular do antifúngico Caspofungina.(2019) Machado, Danielle Cristiane Correa de Paula; Guimarães, Andrea Grabe; Leite, Elaine Amaral; Guimarães, Andrea Grabe; Bizarro, Heloisa D'Avila da Silva; Cáu, Stêfany Bruno de Assis; Souza, Gabriela Guerra Leal de; Leite, RomuloA caspofungina é um fármaco antifúngico relativamente seguro utilizado para tratar candidíase invasiva. Entretanto, a cardiotoxicidade desse fármaco foi relatada em humanos e modelos experimentais. O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficácia experimental in vivo da caspofungina sobre a Candida albicans e avaliar sua segurança terapêutica sobre o sistema cardiovascular em camundongos Swiss fêmeas não infectados e infectados por Candida albicans através da análise do eletrocardiograma (ECG). Os animais foram infectados utilizando a imunossupreção prévia com ciclofosfamida (100 mg/kg) e administração IV do inóculo de Candida albicans (SC5314) (1 a 5x105 UFC/ml). O tratamento com veículo ou caspofungina (5 ou 10 mg/kg) por 5 dias IP foi iniciado 24 horas após a infecção confirmada pela presença de unidades formadoras de colônia (UFC) de C. albicans em amostras de coração, rim, baço ou fígado. A sobrevida foi significativamente aumentada com o tratamento com caspofungina 5 ou 10 mg/kg IP e todos os camundongos infectados tratados apenas com o veículo vieram a óbito. A dose de 10 mg/kg de caspofungina inibiu o crescimento de UFC. A susceptibilidade in vitro de C. albicans foi realizada utilizando a técnica de microdiluição em caldo com concentrações cerscentes de caspofungina, sendo a concentração inibitória mínima de caspofungina para C. albicans de 0,3 g/ml, indicando que o fungo é sensível ao fármaco. O sinal do ECG na derivação II (DII) foi obtido em camundongos conscientes em contenção: para mensurar os intervalos do ECG. O ECG por telemetria foi obtido nos animais não infectados tratados com caspofugnina 10 mg/kg durante 5 dias IP para avaliar os parâmetros da variabilidade da frequência cardíaca (VFC) nos tempos: basal, e após tratamento. A caspofungina induziu aumento significativo dos intervalos PR (18,5%) e QRS (26,6%) em comparação ao basal. Os intervalos QT (20,2 e 23,9%) e QTc (16,3 e 27,2%) aumentaram após tratamento com veículo e com caspofungina indicando que a infecção por C. albicans induziu essas alterações. No entanto, a caspofungina não induziu ao aumento adicional dos intervalos QT e QTc nem impediu o aumento induzido pela C. albicans. Não ocorreram alterações significativas nos parâmetros de VFC de animais não infectados após o tratamento com caspofungina. Concluímos que a caspofungina pode ser considerada um fármaco seguro, em relação aos seus efeitos cardíacos avaliados in vivo no presente estudo, mantendo sua eficácia antifúngica contra C. albicans.Item Cardiotoxicity reduction induced by halofantrine entrapped in nanocapsule devices.(2007) Leite, Elaine Amaral; Guimarães, Andrea Grabe; Guimarães, Homero Nogueira; Coelho, George Luiz Lins Machado; Barratt, Gillian; Mosqueira, Vanessa Carla FurtadoThe main objective of the present study was to evaluate the reduction in halofantrine (Hf) toxicity, an antimalarial drug frequently associated with QT interval prolongation in electrocardiogram, by its entrapment in poly-ε-caprolactone nanocapsules (NC). The acute lethal dose (LD100) of Hf.HCl experimentally observed was 200 mg/kg whereas the calculated LD50 was 154 mg/kg. In contrast, the LD100 for Hf-NC was 300 mg/ kg with a longer mean time to death than Hf.HCl. The calculated LD50 was 249 mg/kg for Hf-NC. The Hf entrapped in PCL NC presented a greater efficacy than PLA-PEG NC and than Hf solution in P. berghei-infected mice at 1 mg/kg. The cardiovascular parameters, ECG and arterial blood pressure, were evaluated in anaesthetized Wistar rats after the IV administration of a single, especially high dose (100 and 150 mg/kg) of halofantrine base loaded-nanocapsules (Hf-NC) or halofantrine chlorhydrate (Hf.HCl) solution. It was observed that Hf solution caused prolongation of the QT and PR intervals of the ECG; however, this effect was significantly (Pb0.001) reduced when Hf was administered entrapped in nanocapsules. The treatment with Hf.HCl induced a pronounced bradycardia and severe hypotension leading to death. The effect of Hf-NC upon heart rate was reduced from 58 to 75% for 100 and 150 mg/kg, respectively, when compared with Hf.HCl solution. These findings show that the encapsulation of halofantrine reduces the QT interval prolongation of ECG in rats and suggest that a modification of drug distribution was possible by using nanocapsules. Hf encapsulation was the main factor responsible for the significant reduction in cardiac toxicity observed.Item Caspofungin effects on electrocardiogram of mice : an evaluation of cardiac safety.(2021) Paula, Danielle Cristiane Correa de; Leite, Elaine Amaral; Araújo, Carolina Morais; Branquinho, Renata Tupinambá; Guimarães, Homero Nogueira; Guimarães, Andrea GrabeCaspofungin is an echinocandin, exhibiting efcacy against most Candida species invasive infection. Its cardiotoxicity was reported in isolated rat heart and ventricular myocytes, but in vivo and clinical studies are insufcient. Our objective was to evaluate caspofungin in vivo cardiac efects using an efcacious dose against Candida albicans. Female Swiss mice were infected with C. albicans, and treated with caspofungin, 5 or 10 mg/kg, intraperitoneal along 5 days. Survival rate and colony forming units (CFU) into vital organs were determined. For cardiac efects study, mice were treated with caspofungin 10 mg/ kg, and electrocardiogram (ECG) signal was obtained on C. albicans-infected mice, single dose-treated, and uninfected mice treated along 5 days, both groups to measure ECG intervals. Besides, ECG was also obtained by telemetry on uninfected mice to evaluate heart rate variability (HRV) parameters. The MIC for caspofungin on the wild-type C. albicans SC5314 strain was 0.3 μg/ml, indicating the susceptible. Survival rate increased signifcantly in infected mice treated with caspo fungin compared to mice treated with vehicle. None of the survived infected mice presented positive CFU after treatment with 10 mg/kg. C. albicans infection induced prolongation of QRS, QT, and QTc intervals; caspofungin did not alter this efect. Caspofungin induced increase of PR and an additional increase of QRS after 24 h of a single dose in infected mice. No signifcant alterations occurred in ECG intervals and HRV parameters of uninfected mice, after caspofungin treatment. Caspofungin showed in vivo cardiac relative safety maintaining its antifungal efcacy against C. albicans.Item Desenvolvimento e caracterização de sistemas autoemulsionáveis (SEDDS) contendo ravuconazol para o tratamento da doença de Chagas experimental.(2017) Spósito, Pollyanna Álvaro Ferreira; Mosqueira, Vanessa Carla Furtado; Bahia, Maria Terezinha; Ferreira, Lucas Antônio Miranda; Leite, Elaine Amaral; Lana, Marta de; Veloso, Vanja Maria; Mosqueira, Vanessa Carla FurtadoOs sistemas lipídicos autoemulsionáveis (SEDDS) de uso oral tem sido alvo de intensas pesquisas nos últimos anos, visando o aumento da biodisponibilidade de fármacos pouco solúveis. O ravuconazol (RAV), Classe II no sistema de classificação biofarmacêutica, atua inibindo a enzima CYP51 responsável pela principal etapa da biossíntese do ergosterol e representa um fármaco promissor para o tratamento da doença de Chagas. O presente estudo teve por objetivo desenvolver e caracterizar SEDDS contendo RAV e avaliar a eficácia em modelo experimental murino de infecção aguda pelo T. cruzi. Foram desenvolvidas formulações de SEDDS do tipo IIIA, contendo diferentes concentrações do surfactante Labrasol®, que após a emulsificação, geraram nanoemulsões com diâmetros hidrodinâmicos médios em torno de 250 nm e potencial zeta entre -45 e -57 mV, sem precipitação do RAV sob diluição e com perfil polidisperso em termos de natureza das nanoestruturas formadas quando analisados pela técnica de AF4. O SEDDS aumentou a taxa de dissolução do RAV in vitro em comparação com o fármaco livre, de forma dependente da concentração de Labrasol® no meio de liberação. O SEDDS contendo baixo teor de surfactante (10% v/v) mostrouse seguro no tratamento de animais sãos e infectados por T. cruzi por períodos de 20 a 40 dias. A formulação SEDDS melhorou significativamente a atividade in vitro anti-T. cruzi no nível de IC50 do RAV. Doses diárias de 15mg/kg de RAV-SEDDS durante 20 dias resultaram em atividade supressiva, mas não curativa frente à infecção com a cepa Y de T. cruzi. O tratamento com a dose diária de 20 mg/kg de RAV-SEEDS por 30 dias resultou em 70% de cura, contra 40% para o RAV livre e 50% para benznidazol. A administração prolongada de RAV-SEEDS e RAV livre por 40 dias curou 100% dos animais, e resultou também em 90% de cura com o benznidazol. Estes resultados estão em acordo com atividade in vitro de RAV-SEDDS, onde foi verificada a redução significativa nos valores de IC50, mas não para IC90, em relação ao RAV livre. O tratamento da infecção frente à cepa Colombiana, resistente ao benznidazol com 20 mg/kg/dia de RAV ou RAV-SEDDS por 40 dias apresentou atividade supressiva da parasitemia, com 10% e 20% de cura respectivamente, e 50% de cura para os animais tratados com benznidazol. Esses resultados mostraram que o tratamento em fase inicial da infecção por longo prazo aumenta a eficácia com ambos os fármacos, e que os SEDDS contendo RAV são um sistema promissor de baixo custo, de fácil produção e adequado para a administração oral na terapia da doença Chagas.Item Early signs of cardiac diastolic dysfunction in ovariectomized WKY and SHR female rats.(2018) Martins, Thales de Andrade; Mourad, M.; Bideaux, P.; Guimarães, Andrea Grabe; Mosqueira, Vanessa Carla Furtado; Leite, Elaine Amaral; Leite, Romulo; Sicard, P.; Richard, S.Half of patients with heart failure (HF) have diastolic dysfunction but preserved EF (> 50%; HFpEF). There is no specific treatment. Aging populations, and particularly women, are more widely concerned. Why are women more likely than men to develop HFpEF? Despite possible limitations, small animal models could provide comprehensive approaches to identify/test novel therapeutic targets.Item Efeito da variação de dose e das características de superfície de nanocápsulas sobre suas concentrações plasmáticas e hepáticas por via intravenosa.(2016) Paula, Mônica Auxiliadora de; Mosqueira, Vanessa Carla Furtado; Lana, Gwenaelle Elza Nathalie Pound; Mosqueira, Vanessa Carla Furtado; Lana, Gwenaelle Elza Nathalie Pound; Postacchini, Bruna Bueno; Leite, Elaine AmaralA aplicação de nanopartículas como carreadores de fármacos para o tratamento de diversas patologias tem se mostrado extremamente promissora, mas ainda encontra grandes desafios relacionados ao estabelecimento de esquemas posológicos seguros. Diferentes formulações de nanopartículas (NP), encapsuladas com o marcador fluorescente ftalocianina de cloro-alumínio (AlClPc) foram obtidas pelo método de nanoprecipitação: nanocápsulas (NC) de ácido polilático (NC PLA), NC de ácido polilático em bloco com o polietilenoglicol (NC PLAPEG) e NC PLA revestidas de quitosana em duas concentrações distintas (NC PLAQUI 0,1% e NC PLAQUI 0,25% p/v), além de uma nanoemulsão equivalente à NC PLA, exceto na presença da parede polimérica. Todas foram caracterizadas quanto as suas propriedades físico-químicas. O tamanho e índice de polidispersão foram determinados em batelada por espalhamento dinâmico de luz e após fracionamento em sistema de fracionamento por campo de fluxo assimétrico acoplado a detectores de espalhamento dinâmico de luz e espalhamento de luz em multiângulos. Desse modo foi possível também determinar o fator de forma das NP pela relação entre o raio de giração/raio hidrodinâmico. A carga de superfície foi determinada por anemometria do laser Doppler. Todas as formulações apresentaram-se monodispersas, com o diâmetro hidrodinâmico entre 133 a 297 nm e potencial zeta positivo para as formulações com quitosana (+26 mV) e negativo para as demais (entre -35 e -44 mV). Os resultados para o fator de forma próximos a 1,0 confirmaram a estrutura vesicular das nanopartículas em todas as formulações. Estudos in vivo foram conduzidos com o objetivo de avaliar o impacto das características de superfície das partículas, bem como das doses crescentes de polímero, sobre a biodistribuição e a capacidade de saturação do sistema fagocitário mononuclear (SFM), em camundongos, pela via intravenosa. O estudo in vivo mostrou que a superfície das partículas tem uma maior influência no modo como elas se distribuem pelo organismo que o tamanho. Além disso, esse estudo evidencia a possibilidade de elevadas doses de partículas saturarem o SFM, uma vez que para todas as formulações, com o aumento da dose injetada, houve uma diminuição da porcentagem da dose encontrada no fígado.Item Mechanistic insights into the intracellular release of doxorubicin from pH-sensitive liposomes.(2021) Reis, Samara Bonesso dos; Silva, Juliana de Oliveira; Fossa, Fernanda Garcia; Leite, Elaine Amaral; Souza, Angelo Malachias de; Lana, Gwenaelle Elza Nathalie Pound; Mosqueira, Vanessa Carla Furtado; Oliveira, Mônica Cristina de; Barros, André Luís Branco de; Jesus, Marcelo Bispo depH-sensitive liposomes are interesting carriers for drug-delivery, undertaking rapid bilayer destabilization in response to pH changes, allied to tumor accumulation, a desirable behavior in the treatment of cancer cells. Previously, we have shown that pH-sensitive liposomes accumulate in tumor tissues of mice, in which an acidic environment accelerates drug delivery. Ultimately, these formulations can be internalized by tumor cells and take the endosome-lysosomal route. However, the mechanism of doxorubicin release and intracellular traffic of pH-sensitive liposomes remains unclear. To investigate the molecular mechanisms underlying the intracellular release of doxorubicin from pH-sensitive liposomes, we followed HeLa cells viability, internalization, intracel lular trafficking, and doxorubicin’s intracellular delivery mechanisms from pH-sensitive (SpHL-DOX) and non pH-sensitive (nSpHL-DOX) formulations. We found that SpHL-DOX has faster internalization kinetics and intracellular release of doxorubicin, followed by strong nuclear accumulation compared to nSpHL-DOX. The increased nuclear accumulation led to the activation of cleaved caspase-3, which efficiently induced apoptosis. Remarkably, we found that chloroquine and E64d enhanced the cytotoxicity of SpHL-DOX. This knowledge is paramount to improve the efficiency of pH-sensitive liposomes or to be used as a rational strategy for developing new formulations to be applied in vivo.Item Nanocápsulas de poli-&-caprolactona contendo halofantrino : desenvolvimento, caracterização e estudo da cardiotoxicidade.(Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto., 2006) Leite, Elaine Amaral; Mosqueira, Vanessa Carla FurtadoA malária é uma das infecções parasitárias mais importantes do mundo. A malária severa é uma forma complicada de infecção pelo Plasmodium falciparum onde administração intravenosa de agentes antimaláricos é necessária. O halofantrino (Hf) poderia ser uma alternativa para o tratamento da malária porque é um fármaco ativo contra cepas de P. falciparum resistentes à cloroquina. Porém, é freqüentemente associado com o prolongamento do intervalo QT do eletrocardiograma. No presente trabalho, o Hf base foi associado a carreadores coloidais nanoestruturados, conhecidos como nanocápsulas (NCs), as quais são constituídas por um núcleo oleoso envolvido por polímero biodegradável, a poli--caprolactona. O índice de polidispersão e o diâmetro médio das partículas foram determinados por espectroscopia de correlação de fótons (PCS) e a medida do potencial zeta por mobilidade eletroforética. A morfologia e a organização estrutural foram avaliadas pela técnica de microscopia de força atômica (MFA), buscando analisar e entender possíveis alterações induzidas pela associação do fármaco a essas nanoestruturas. O principal objetivo desse trabalho foi avaliar as alterações eletrocardiográficas, principalmente o prolongamento do intervalo QT e as alterações de pressão arterial, em ratos Wistar sadios ou infectados com Plasmodium berghei, após a administração i.v. de uma dose única, especialmente alta (100 e 150 mg/kg) de halofantrino associado às nanocápsulas (NC-Hf) ou solução de cloridrato de halofantrino (Hf.HCl). O diâmetro médio das NCs brancas obtido por MFA variou de 222 a 550 nm, enquanto o diâmetro médio dessa mesma amostra determinado por PCS foi de 245 nm. O diâmetro médio das NC-Hf, determinado por MFA, foi 475 153 nm e 309 97 nm para 0,1 e 1,0 mg Hf/mL de suspensão coloidal. A análise dos dados mostrou que o diâmetro das NCs é muito maior que a altura, apresentando uma relação diâmetro/altura de aproximadamente 10. A dose aguda letal (DL 100) observada experimentalmente foi de 200 mg/kg para o grupo que recebeu Hf.HCl enquanto a DL 50 calculada foi 154 mg/kg. A DL100 para NC-Hf foi 300 mg/kg, e os animais morreram em tempos superiores quando comparados com Hf.HC e a DL 50 calculada para NC-Hf foi 249 mg/kg. Foi observado, nos experimentos de avaliação da cardiotoxicidade a curto prazo, que o Hf induziu um prolongamento dose-dependente dos intervalos QT e PR do ECG, porém, este efeito foi significativamente reduzido (P < 0,001) quando o Hf foi administrado associado às nanocápsulas. O Hf.HCl induziu uma bradicardia pronunciada, seguida por uma redução contínua da freqüência cardíaca e hipotensão severa que levaram os animais à morte. Nenhuma alteração nos parâmetros cardiovasculares foi observada nos animais que receberam as soluções controle: veículo do Hf livre ou excipientes das NCs em intervalos de tempo e volumes equivalentes. O Hf associado às NCs reduziu o prolongamento do intervalo QT de 77% e 85%, 5 min após a administração de 100 e 150 mg/kg, respectivamente. A avaliação a longo prazo demonstrou aumentos equivalentes para o intervalo QT e QTc quando Hf foi administrado como NC-Hf na dose de 150 mg/kg comparada com a mesma dose do Hf livre até 30 minutos, observando uma alteração máxima somente 2 horas depois da injeção. Entretanto, as NC-Hf induziram uma toxicidade menos pronunciada, uma vez que todos os animais sobreviveram durante todo o período experimental. Por outro lado, o Hf.HCl induziu morte em 83% dos animais, 30 min após a administração. Foi observada alteração do intervalo QT, 24 horas após a administração de NC-Hf a qual poderia ser atribuída ao Hf acumulado nas células do sistema fagocítico mononuclear. A avaliação da cardiotoxicidade em ratos infectados com Plasmodium berghei demonstrou que a NC-Hf induziu variações dos parâmetros cardiovasculares semelhante ao Hf.HCl, indicando que em animais infectados, as NC estariam disponibilizando o fármaco para interação com as células cardíacas de maneira semelhante à solução de Hf.HCl. Porém, em todos os experimentos realizados, em animais sadios ou infectados foi observado que, provavelmente, a encapsulação do Hf alterou sua distribuição no organismo, pois a resposta farmacológica foi alterada.Item Paclitaxel-loaded pH-sensitive liposome : new insights on structural and physicochemical characterization.(2018) Monteiro, Liziane Oliveira Fonseca; Souza, Angelo Malachias de; Lana, Gwenaelle Elza Nathalie Pound; Paniago, Rogerio Magalhães; Mosqueira, Vanessa Carla Furtado; Oliveira, Mônica Cristina de; Barros, André Luís Branco de; Leite, Elaine AmaralA long-circulating and pH-sensitive liposome containing paclitaxel (SpHL-PTX) was recently developed by our group. Once in an acidic environment, for example, tumors, these liposomes undergo destabilization, releasing the encapsulated drug. In this way, the aim of this study was to evaluate the molecular and supramolecular interactions between the lipid bilayer and PTX in similar biological environment conditions. High-sensitivity analyses of SpHL-PTX structures were obtained by the small-angle X-ray scattering technique combined with other techniques such as dynamic light scattering, asymmetric flow field-flow fractionation, transmission electron microscopy, and high-performance liquid chromatography. The results showed that PTX incorporation in the liposomal bilayer clearly leads to changes in supramolecular organization of dioleoylphosphatidylethanolamine (DOPE) molecules, inducing the formation of more ordered structures. Changes in supramolecular organization were observed at lower pH, indicating that pH sensitivity was preserved even in the presence of fetal bovine serum proteins. Furthermore, morphological and physicochemical characterization of SpHL-PTX evidenced the formation of nanosized dispersion suitable for intravenous administration. In conclusion, a stable nanosized dispersion of PTX was obtained at pH 7.4 with suitable parameters for intravenous administration. At lower pH conditions, the pH sensitivity of the system was clearly evidenced by changes in the supramolecular organization of DOPE molecules, which is crucial for the delivery of PTX into the cytoplasm of the targeted cells. In this way, the results obtained by different techniques confirm the feasibility of SpHL as a promising tool to PTX delivery in acidic environments, such as tumors.Item Physical and biological effects of paclitaxel encapsulation on disteraroylphosphatidylethanolamine-polyethyleneglycol polymeric micelles.(2020) Oda, Caroline Mari Ramos; Gasperini, Antonio Augusto Malfatti; Souza, Angelo Malachias de; Lana, Gwenaelle Elza Nathalie Pound; Mosqueira, Vanessa Carla Furtado; Fernandes, Renata Salgado; Oliveira, Mônica Cristina de; Barros, André Luís Branco de; Leite, Elaine AmaralSimple size observations of 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[methoxy(polyethyleneglycol)-2000] (DSPE-mPEG2000) polymeric micelles (PM) with different compositions including or not paclitaxel (PTX) are unable to evidence changes on the nanocarrier structure. In such system a detailed characterization using highly sensitive techniques such as X-ray scattering and asymmetric flow field flow fractionation coupled to multi-angle laser light scattering and dynamic light scattering (AF4-MALS-DLS) is mandatory to observe effects that take place by the addition of PTX and/or more lipid-polymer at PM, leading to complex changes on the structure of micelles, as well as in their supramolecular organization. SAXS and AF4-MALS-DLS suggested that PM can be found in the medium separately and highly organized, forming clusters of PM in the latter case. SAXS fitted parameters showed that adding the drug does not change the average PM size since the increase in core radius is compensated by the decrease in shell radius. SAXS observations indicate that PEG conformation takes place, changing from brush to mushroom depending on the PM composition. These findings directly reflect in in vivo studies of blood clearance that showed a longer circulation time of blank PM when compared to PM containing PTX.Item Poly-caprolactone nanocapsules morphological features by atomic force microscopy.(2005) Leite, Elaine Amaral; Vilela, José Mário Carneiro; Mosqueira, Vanessa Carla Furtado; Andrade, Margareth SpanglerItem Polymeric nanostructures for drug delivery : characterization by atomic force microscopy.(2005) Mosqueira, Vanessa Carla Furtado; Leite, Elaine Amaral; Barros, Cristina Maria de; Vilela, José Mário Carneiro; Andrade, Margareth SpanglerItem Síntese e associação de peptídeos pré-selecionados por phage display à nanopartículas poliméricas : avaliação do potencial biomarcador em células de adenocarcinoma de cólon humano.(2020) Souza, Aline de; Mosqueira, Vanessa Carla Furtado; Rúbio, Karina Taciana Santos; Mosqueira, Vanessa Carla Furtado; Leite, Elaine Amaral; Cota, Renata Guerra de SáO direcionamento de peptídeos ao câncer cólon-retal pode aumentar a seletividade e a especificidade no diagnóstico permitindo que esses atuem como biomarcadores. Os nanocarreadores podem proteger quimicamente e fisicamente o peptídeo de degradações químicas no trato gastrointestinal e assim possibilitar a interação com às células tumorais aumentando a seletividade e efetividade do biomarcador. O presente trabalho teve como objetivo sintetizar peptídeos pré-selecionados pela técnica de exibição de fagos (phage display) e associá-los às nanoesferas poliméricas biodegradáveis, avaliando a citotoxicidade e a interação dessas formulações com células de adenocarcinoma de cólon humano (Caco-2). Além disso, propusemos a avaliação da afinidade dos peptídeos pelos alvos moleculares proteicos. Para isso, 5 peptídeos foram sintetizados e avaliados quanto a pureza relativa e massa molecular por CLAE-UV e espectrometria de massas, respectivamente, apresentando pureza acima de 75% e massa esperada. Formulações de nanoesferas poliméricas obtidas a partir do polímero polietilenoglicol-block-poli(ácido láctico) encapsulando os peptídeos foram desenvolvidas por dois diferentes métodos: nanoprecipitação e emulsão dupla. As formulações foram caracterizadas quanto ao tamanho médio e dispersão de tamanho, potencial zeta e eficiência de encapsulamento (EE). Tamanhos de partículas entre 84 a 150 nm e EE (%) variando entre 4 a 32% foram obtidos. Não houve citotoxicidade significativa com os peptídeos livres ou encapsulados em concentrações de até 3 μM nos tempos de incubação de 6h e 24 h, indicando que como biomarcadores eles se mostraram seguros frente à linhagem Caco-2. Após marcação fluorescente dos peptideos com isotiocianato de fluoresceína a interação com célula Caco-2 mostrou que o peptídeo 1 em nanoesferas induziu maior interação com as células, onde a fluorescência se mostrou localizada no interior do citoplasma num padrão pontilhado, indicativo de internalização por vias endocíticas. Essa interação se apresentou mais intensa que no caso do peptídeo 2. A cromatografia de afinidade utilizando-se peptídeos imobilizados em colunas de sepharose evidenciouse a ligação dos peptídeos com alvos moleculares proteicos que serão futuramente identificados por análise proteômica.Item Toxicological study of a new doxorubicin-loaded pH-sensitive liposome : a preclinical approach.(2018) Silva, Juliana de Oliveira; Miranda, Sued Eustaquio Mendes; Leite, Elaine Amaral; Sabino, Adriano de Paula; Borges, Karina Braga Gomes; Cardoso, Valbert Nascimento; Cassali, Geovanni Dantas; Guimarães, Andrea Grabe; Oliveira, Mônica Cristina de; Barros, André Luís Branco deDoxorubicin (DOX) is widely used in cancer treatment, however, the use of this drug is often limited due to its cardiotoxic side effects. In order to avoid these adverse effects, the encapsulation of DOX into nanosystems has been used in the last decades. In this context, pH-sensitive liposomes have been shown promising for delivering cytotoxic agents into tumor cells, however, the lack of information about in vivo toxicity of this nanocarrier has impaired translational studies. Therefore, the aim of this work was to investigate the acute toxicity and cardiotoxicity of DOX-loading pH-sensitive liposomes (SpHL-DOX). To achieve this, female BALB/c mice, after intravenous administration, were monitored by means of clinical, laboratory, histopathological and electrocardiographic (ECG) analyses. Results indicate that SpHL was able to prevent renal toxicity and the hepatic injury was less extensive than free DOX. In addition, lower body weight loss was associated with less ECG QT interval prolongation to animals receiving SpHL-DOX (14.6 ± 5.2%) compared to animals receiving free DOX (35.7 ± 4.0%) or non-pH-sensitive liposomes (nSpHL-DOX) (47.0 ± 9.8%). These results corroborate with SpHL-DOX biodistribution studies published by our group. In conclusion, the SpHL-DOX showed less toxic effects on mice compared to free DOX or nSpHL-DOX indicating that SpHL-DOX is a promising strategy to reduce the serious cardiotoxic effects of DOX.