Síntese e associação de peptídeos pré-selecionados por phage display à nanopartículas poliméricas : avaliação do potencial biomarcador em células de adenocarcinoma de cólon humano.

Abstract

O direcionamento de peptídeos ao câncer cólon-retal pode aumentar a seletividade e a especificidade no diagnóstico permitindo que esses atuem como biomarcadores. Os nanocarreadores podem proteger quimicamente e fisicamente o peptídeo de degradações químicas no trato gastrointestinal e assim possibilitar a interação com às células tumorais aumentando a seletividade e efetividade do biomarcador. O presente trabalho teve como objetivo sintetizar peptídeos pré-selecionados pela técnica de exibição de fagos (phage display) e associá-los às nanoesferas poliméricas biodegradáveis, avaliando a citotoxicidade e a interação dessas formulações com células de adenocarcinoma de cólon humano (Caco-2). Além disso, propusemos a avaliação da afinidade dos peptídeos pelos alvos moleculares proteicos. Para isso, 5 peptídeos foram sintetizados e avaliados quanto a pureza relativa e massa molecular por CLAE-UV e espectrometria de massas, respectivamente, apresentando pureza acima de 75% e massa esperada. Formulações de nanoesferas poliméricas obtidas a partir do polímero polietilenoglicol-block-poli(ácido láctico) encapsulando os peptídeos foram desenvolvidas por dois diferentes métodos: nanoprecipitação e emulsão dupla. As formulações foram caracterizadas quanto ao tamanho médio e dispersão de tamanho, potencial zeta e eficiência de encapsulamento (EE). Tamanhos de partículas entre 84 a 150 nm e EE (%) variando entre 4 a 32% foram obtidos. Não houve citotoxicidade significativa com os peptídeos livres ou encapsulados em concentrações de até 3 μM nos tempos de incubação de 6h e 24 h, indicando que como biomarcadores eles se mostraram seguros frente à linhagem Caco-2. Após marcação fluorescente dos peptideos com isotiocianato de fluoresceína a interação com célula Caco-2 mostrou que o peptídeo 1 em nanoesferas induziu maior interação com as células, onde a fluorescência se mostrou localizada no interior do citoplasma num padrão pontilhado, indicativo de internalização por vias endocíticas. Essa interação se apresentou mais intensa que no caso do peptídeo 2. A cromatografia de afinidade utilizando-se peptídeos imobilizados em colunas de sepharose evidenciouse a ligação dos peptídeos com alvos moleculares proteicos que serão futuramente identificados por análise proteômica.