PPCBIOL - Programa de Pós-graduação em Ciências Biológicas

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Efeito do bloqueio do receptor de IL-10 na resposta imune contra Leishmania amazonensis.
(Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto., 2002) Amaral, Joana Ferreira do; Afonso, Luís Carlos Crocco
A avaliação do papel da IL-10 na leishmaniose é de extrema importância, pois sendo uma citocina anti-inflamatória, inibe a ação de IFN-ge NO, que têm papel importante na eliminação do parasita e no controle da lesão. O papel da IL-10na infecção por L.(L.) amazonensis foi avaliado in vivo neste trabalho tratando-se camundongos C57BL/6, suscetíveis à essa espécie de Leishmania, comanticorpos monoclonais anti-receptor de IL-10(a-IL-10R) na fase inicial da infecção. Como controle de tratamento inoculamos um grupo de animais com IgG total de rato na mesma dose usada para o anticorpoa-IL-10R(0,5mg/animal/dose) e mantivemos outro grupo sem nenhum tratamento. Os animais tratados coma-IL-10R, após 3semanas de infecção, apresentaram perfil histopatológico, produçãodeTNFequantificaçãodeparasitas semelhanteaos grupos controle, com exceção da produção de IFN-g produzido por células mononucleares de linfonodo de camundongos tratados com a-IL-10R, que apresentaram quantidades dessa citocina superiores aos animais controles. Em relação aos animais sacrificados 12 semanas após a infecção, o curso da infecção, o parasitismo e a produção de citocinas foram semelhantes para todos os grupos. Em relação à análise histológica, observamos um maior infiltrado inflamatório e um parasitismo tecidual ligeiramente mais acentuado no grupo tratado coma-IL-10 R em relação aos controles. Dessa forma, podemos concluir que outros mecanismos de escape do parasita, Que não a produção de IL-10, estejam envolvidos na infecção por L.(L.) amazonensis, já Que mesmo em presença de um aumento da produção de IFN-g a infecção permanece inalterada. A indução da produção de TGF-b por parte do parasita, assim como a resistência daL.(L.) amazonensis à ação do NO em comparação a outras espécies de Leishmania são levantados como hipótes
Localização física do BAC clone AL 619337 no genoma de Schistosoma mansoni utilizando a técnica de FISH (fluorescence in situ hybridization).
(Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto., 2004) Jeremias, Wander de Jesus; Babá, Élio Hideo
A Esquistossomose, também conhecida como “Bilharziose” ou, popularmente, “Barriga d’água” ou “Chistosa” é uma doença crônica e debilitante ou mesmo fatal em alguns casos, que afeta principalmente indivíduos em áreas rurais, sendo endêmica em países tropicais e subtropicais. È causada pelo platelminto trematódeo digenético Schistosoma mansoni. Devido a sua grande importância sócio-econômica da doença em países em desenvolvimento, foi montado um projeto para seqüenciamento e estudo do genoma de seu agente etiológico, o S. mansoni. A ênfase inicial do projeto foi dada na etapa de seqüenciamento de cDNA, devido à existência de poucos genes seqüenciados do parasita. Como parte deste projeto, iniciou-se a construção de um mapa físico do genoma do S. mansoni. E para a consolidação de tal mapa, a localização física de grandes fragmentos de DNA genômico clonados em vetores BAC e YAC no genoma do parasita por meio da técnica de FISH (“Fluorescence in situ Hybridization”) é de fundamental importância. Neste trabalho, o DNA do BAC clone AL619337, desde então denominado BAC2A, foi fisicamente localizado no genoma do S. mansoni por meio da técnica de FISH. Foi estabelecido como 28 dias o melhor tempo de infecção do caramujo hospedeiro para obtenção de maior número de células metafásicas do parasita por lâmina. Uma vez ajustada a concentração do fluoróforo PI com qual os cromossomos metafásicos do parasita foram contra corados e também do conjugado Avidina-FITC, o sinal de hibridização foi visualizado na região de transição entre eucromatina e heterocromatina do braço curto do cromossomo sexual W em todas as metáfases de fêmea observadas. Não foi observado sinal homólogo no outro cromossomo sexual Z, mostrando que o DNA localizado é específico de fêmeas de S. mansoni. Trabalhos desta natureza permitem obter informações sobre a estrutura do genoma. Tais informações associadas a outras referentes à função de determinado gene permitem responder questões determinantes na patologia causada por este importante parasita.
Utilização de DNA P36(LACK) na indução de resposta imune e na proteção contra infecção por Leishmania chagasi em camundongos BALB/C.
(Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto., 2004) Silva, Eduardo de Almeida Marques da; Resende, Simone Aparecida
A leishmaniose visceral americana no Brasil é uma zooantroponose inicialmente restrita a áreas rurais e peri-urbanas. Com a emergência de novos focos em áreas urbanas, essa doença passou a ter influências significativas na saúde pública, e a vacinação é um importante mecanismo de proteção. Vários protocolos de vacinação vêm sendo testados para as diferentes formas de leishmaniose, e o uso de vacinas de DNA é uma alternativa interessante devido à sua capacidade de indução de imunidade celular prolongada. Além disso, essas vacinas estimulam respostas humorais, auxiliares e citotóxicas, sendo as duas últimas muito importantes para a indução de uma resposta protetora em modelos murinos de leishmaniose visceral. A LACK (homóloga de Leishmania de receptores de proteína quinase C ativada) é uma proteína de 36 kDa altamente conservada entre as diferentes espécies e formas evolutivas de Leishmania, e induz proteção contra infecção cutânea por L. major por intermédio do redirecionamento da resposta patogênica (Th2) para a protetora (Th1), quando administrada como a versão reduzida de 24 kDa. Sua eficácia como antígeno em vacinações contra L. chagasi ainda não foi avaliada. Nós testamos, então, uma vacina de DNA que codifica o gen p36(LACK) (DNA p36(LACK)), administrada pela via intramuscular ou subcutânea, objetivando avaliar seu potencial imunogênico e protetor e sua capacidade de indução de resposta imune prolongada contra L. chagasi. Nossos resultados demonstraram que a vacinação com DNA p36(LACK) pela via intramuscular induz uma resposta do tipo 1 (produção de IFN-, mas não de IL-4) quando esplenócitos de camundongos vacinados, mas não desafiados, são estimulados com antígenos de L. chagasi (50, 100 ou 150 g/mL de antígeno solúvel ou 50 g/mL de antígeno particulado) ou proteína p36(LACK) recombinante (5 g/mL). Não houve produção de TNF ou de óxido nítrico por esses esplenócitos. O mesmo não foi observado quando se utilizou a via subcutânea de imunização, onde não se detectou produção de nenhuma das citocinas ou de óxido nítrico pelos esplenócitos submetidos aos mesmos estímulos. A produção significativa de IFN-por esplenócitos estimulados de camundongos vacinados pela via intramuscular e submetidos a desafio endovenoso com promastigotas de L. chagasi 4 ou 12 semanas após a dose de reforço demonstrou a capacidade da vacina de garantir resposta imune prolongada. Entretanto, não houve diminuição de carga parasitária hepática ou esplênica de camundongos vacinados em relação aos controles, demonstrando que a resposta imune induzida pela vacina foi insuficiente para proteger esses camundongos contra o desafio sistêmico, considerando-se quaisquer das vias de vacinação utilizadas. Portanto, a vacina de DNA p36(LACK) administrada pela via intramuscular se mostrou imunogênica e capaz de induzir resposta imune do tipo 1 prolongada, mas não foi capaz de induzir proteção contra desafio sistêmico por L. chagasi.
Detecção e caracterização de Rickettsia spp. circulante em foco inativo peri-urbano do município de Caratinga, MG
(Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto., 2004) Cardoso, Luciane Daniele
As riquétsias patogênicas constituem um grupo de bactérias gram-negativas, intracelulares obrigatórias responsáveis por várias doenças humanas conhecidas como riquetsioses, as quais são transmitidas ao homem através da picada de artrópodes hematófagos como carrapato, pulga e piolho. O Brasil apresenta histórico de doença riquetsial desde o final da década de 20, sendo a febre maculosa brasileira a mais severa das riquetsioses descritas, com inúmeros casos confirmados através de sorologia no sudeste do país. A introdução de técnicas da biologia molecular no estudo das riquétsias tem possibilitado a caracterização de espécies já existentes como a Rickettsia rickettsii, bem como a descrição de novas espécies tais como a Rickettsia felis. O presente trabalho teve por objetivo detectar a presença de Rickettsia spp. circulante em artrópodes vetores em um foco inativo peri–urbano do município de Caratinga, MG, através da reação em cadeia da polimerase e avaliar o nível de transmissão de riquetsioses na população animal do domicílio e peri–domicílio. 2610 ectoparasitos, em fase parasitária, foram coletados entre maio/2002 e abril/2003, taxonomicamente identificados, agrupados de acordo com estádio evolutivo e animal de origem e submetidos à extração de DNA pelo método do fenol/clorofórmio. O DNA extraído foi amplificado por meio de uma PCR duplex contendo dois pares de oligonucleotídeos iniciadores gênero específicos: citrato sintase - gltA (RpCS877p; RpCS1258n) e 17 KDa(17kDa F; 17kDa R), sendo o produto obtido reamplificado com um par de iniciadores internos do gene que codifica a proteína interna de membrana de 17kDa (full nested PCR). Os produtos amplificados foram visualizados em gel de poliacrilamida 8% corado pela prata e as amostras positivas foram clonadas, purificadas, seqüenciadas, editadas e comparadas com outras seqüências depositadas no GenBank utilizando os programas Chromas e BLASTn. Alternativamente, produtos de PCR’s positivas foram purificados e diretamente seqüenciados. Foram também coletadas 73 amostras de soro canino e 18 amostras de soro eqüino por venocentese da cefálica e da jugular, respectivamente, sendo estas submetidas à reação de imunofluorescência indireta usando antígeno específico de R. rickettsii. A análise das seqüências obtidas de pools de pulgas do gênero Ctenocephalides e de pools de carrapatos das espécies Amblyomma cajennense e Rhipicephalus sanguineus permitiu a identificação de riquétsias com 100% de homologia com R. felis e 97% de homologia com Rickettsia honei e R. rickettsii, simultaneamente. Nenhum dos soros caninos analisados apresentou resultado positivo à RIFI enquanto 3 dos soros eqüinos (17%) apresentaram-se positivos nos título 1:64 e 1:128. Os dados obtidos mostram que o foco estudado representa uma região vulnerável com relação à transmissão de riquetsioses, fazendo-se necessário o estabelecimento de um sistema de vigilância epidemiológica no referido local.
Isolamento e caracterização de um mutante de Saccharomyces cerevisiae com características fenotípicas opostas à cepa PKC.
(Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto., 2004) Gomes, Katia das Neves; Brandão, Rogélio Lopes
Em leveduras, a proteína quinase C participa da regulação da via bioquímica responsável pela transcrição de uma subunidade da enzima glucano sintase, a qual está envolvida na síntese da parede celular. A via PKC MAP quinase consiste das enzimas Bck1, Mkk1/2 e Mpk1 que são ativadas por fosforilação. Recentemente, nós descobrimos que o mutante pkc1 D, contrariamente aos demais mutantes da cascata Map quinase, exibe dois principais defeitos no controle do metabolismo de carbono. A cepa pkc1 D apresenta um atraso na iniciação da fermentação e um defeito na desrepressão após a exaustão de glicose do meio. Estes fatos são consistentes com a hipótese de que há uma bifurcação depois de Pkc1 p, sugerindo que esta proteína quinase possui varias funções importantes em levedura. Baseados na característica que o mutante pkc1D é incapaz de crescer em glicerol, nós isolamos um novo mutante da cepa pkc1 D que apresenta um crescimento normal em glicerol. O novo mutante (LBFM335) foi transformado com uma biblioteca genômica de levedura e nós isolamos dois transformantes (LBFM342 e LBFM342) que recuperaram o fenótipo original do mutante pkc1 D (incapacidade de crescer em glicerol). Neste trabalho, nós caracterizamos um novo mutante (LBFM 335) que alivia o fenótipo repressivo de pkc1 D em Sccharomyces cerevisiae . Além disso, nós isolamos dois supressores extragênicos desta mutação, que foram identificados como a exportina nuclear Msn5 e a histona deacetilase Hos2.
Anemia, parasitoses intestinais, aleitamento materno e desnutrição proteico calórica e suas associações em crianças de 0 a 59 meses, em 1999, no município de Ouro Preto – Minas Gerais.
(Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto., 2004) Silva, Maria Luisa Coelho; Silva, Marcelo Eustáquio
O objetivo desta pesquisa foi estudar a prevalência da desnutrição protéico-calórica, da anemia ferropriva, das parasitoses intestinais, do aleitamento materno e suas associações em crianças de 0 a 59 meses, em Ouro Preto, MG. Realizou-se estudo epidemiológico do tipo transversal, realizado com 4744 crianças de 0 a 59 meses que participaram da Campanha Nacional de Multivacinação, em 1999. Foram analisados exames bioquímicos de hemoglobina e parasitológico de fezes de uma amostra das crianças desnutridas da zona urbana. Na análise antropométrica, utilizou-se o índice peso/idade (P/I) e foram consideradas desnutridas crianças com peso menor ou igual ao percentil 10 (P10). Considerou-se anêmica a criança com concentração de hemoglobina inferior a 11mg/dL. Os dados foram processados pelo software Epi Info versão 6.04. Os resultados mostraram que a prevalência da desnutrição foi de 21,86% (1037). A prevalência das parasitoses entre os desnutridos foi de 42,96% (116). O parasita mais prevalente foi Ascaris lumbricoides. A prevalência da anemia entre os desnutridos foi de 44,67% (109). A prevalência do aleitamento materno foi de 84,11% (3990) e a mediana foi de 4 meses (120 dias). Foram encontradas associações significativas entre: desnutrição e aleitamento materno; e parasitoses e anemia. Conclui-se que a prevalência da desnutrição foi inferior às estimativas nacionais e semelhante aos resultados pesquisados na região Sudeste. A prevalência das parasitoses foi inferior ao esperado e o parasita mais freqüente, assim como todas pesquisas brasileiras, foi o Ascaris lumbricoides. A prevalência da anemia assemelha-se a valores citados pela OMS e a outros pesquisadores brasileiros, sendo inferior a pesquisas na região Sudeste. A prevalência de casos graves de anemia foi muito baixa. A prevalência e a mediana do aleitamento materno assemelham-se à média nacional. Existem poucos estudos sobre associações e, as associações positivas encontradas podem servir de subsídio na elaboração de programas de saúde.
Isolamento, propriedades bioquímicas e estudos biológicos do inibidor proteico da Macrotyloma axillare.
(Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto., 2004) Oliveira, Marcelo Eurípedes; Andrade, Milton Hércules Guerra de
Os extratos de sementes e cotilédones da Macrotyloma axillare tratados termicamente a 90OC por 30 min. seguido de precipitação por etanol frio na faixa de concentração de 60-80% resulta na purificação parcial de inibidores de protease do tipo Bowman Birk. O isolamento das isoformas com elevado teor de pureza é alcançado por meio de cromatografias de troca iônica. A análise dos cromatogramas em resinas carregadas demonstra uma redução da carga líquida negativa dos inibidores do cotilédone, confirmada pelo aumento dos tempos de retenção em HPLC e pela redução da massa molecular em espectrometria de massa. A maior potência dos inibidores do cotilédone em relação aos inibidores da semente em ensaios in vitro sugere uma possibilidade de envolvimento nos mecanismos de defesa da planta, embora ensaios comparativos “in vivo” não tenham sido realizados. A atividade dos inibidores Bowman Birk na prevenção de processos carcinogênicos induzidos está associada principalmente à sua atividade em inibir a quimotripsina. O processo de germinação de sementes da Macrotyloma axillare possibilitou a obtenção de isoformas pequenas, compreendidas entre as sete ligações dissulfeto dos inibidores BBI DE-3 e DE-4 já descritos por Joubert e cols. 1979, com atividade aumentada antiquimotripsina (oito vezes) e antitripsina (quatro vezes).
Isolamento, propriedades bioquímicas e estudos biológicos da lectina de sementes da Macrotyloma axillare (E. Meyer).
(Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto., 2004) Santana, Marcos Aurélio de; Andrade, Milton Hércules Guerra de
Duas frações de uma lectina específica para 2-N-acetil-galactosamina foram isoladas de sementes da Macrotyloma axillare (LMA) através de uma metodologia alternativa a cromatografia de afinidade. As frações ativas foram purificadas por precipitação térmica do extrato bruto a 90°C por 30 min; precipitação com etanol a frio na concentração de 20-60%, seguido de cromatografia de troca iônica em pH 8,3 procedendo-se a eluição com gradientes crescentes isocráticos de NaCl. As frações de eluição 0,2M e 0,3M de NaCl apresentaram atividade hemaglutinante sobre hemácias A1. A análise eletroforética em géis de poliacrilamida-SDS a 12% das frações revela uma banda única com massa molecular de 29 KDa. Em ensaios de estabilidade pH-dependente, foi demonstrado que a LMA 0,2M é completamente estável no intervalo de pH de 6,0-8,0 e a LMA 0,3M, de 5,0-9,0. Através de determinações de massa molecular por cromatografia de exclusão molecular em pH diferentes, demonstrou-se que ambas as isoformas 0,2M e 0,3M da LMA tendem a se comportar como tetrâmeras em pH alcalino (8,3) e como dímeras em pH ácido e neutro (5,0 e 7,0). Ensaios de atividade sobre hemácias nativas dos grupos sanguíneos A1, A2, B e O confirmaram a especificidade de ambas as frações por hemácias A1, no entanto o ensaio com hemácias tripsinizadas demonstrou que a LMA 0,3M perde sua especificidade, aglutinando hemácias de todos os grupos; a LMA 0,2M permaneceu específica para o grupo A (mas sem distinção qualitativa de A1 e A2. Estudos de aglutinação de cepas de Escherichia coli com a LMA 0,2M mostraram cerca de 8% de positividade numa amostra de 103 cepas testadas, com títulos aglutinantes diferenciados, indicando que a 2-N-acetilgalactosamina mostra-se pouco distribuída nas cepas testadas. Através de estudos de distribuição de 99mTc-LMA 0,2M em camundongos Swiss em diferentes tempos, pôdese observar que a 99mTc-LMA 0,2M se concentra predominantemente nos rins e na urina após 180 minutos, indicando uma provável ligação da lectina marcada nos rins e transporte de lectina intacta para urina desses animais. A metodologia proposta foi eficiente para o isolamento das duas frações ativas (0,2 e 0,3M) da lectina das sementes da Macrotyloma axillare.
Características clínicas, epidemiológicas e concentrações de sódio e potássio no colostro de nutrizes hipertensas e não hipertensas, atendidas em um serviço de saúde em Mariana, MG.
(Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto., 2005) Sírio, Marília Alfenas de Oliveira; Silva, Marcelo Eustáquio
O colostro, que é o primeiro leite secretado após o parto, é rico em proteínas, vitaminas e sais minerais, dentre eles o sódio e o potássio. Estes são dois nutrientes essenciais ao organismo e estão envolvidos na regulação da osmolaridade, pH e volume dos líquidos corporais. Já é bem documentado o papel do sódio na regulação da volemia e um consumo elevado de sódio, principalmente por indivíduos sal-sensíveis, é fundamental na gênese da hipertensão arterial sistêmica. O potássio exerce uma função protetora contra a hipertensão, frente a um elevado consumo de sódio. O objetivo deste estudo foi comparar as concentrações de sódio e potássio no colostro de 48 horas de 105 puérperas nutrizes, sendo 33 hipertensas e 72 não hipertensas, atendidas na SBSC – Hospital Monsenhor Horta, em Mariana-MG, de junho a novembro de 2003. Dados dessas nutrizes foram obtidos de entrevista estruturada e busca em prontuários médicos. A coleta do colostro seguiu técnica recomendada por VINHA (1987, 1994) e as determinações dos íons no colostro seguiram recomendações de KEENAN et al (1982). As nutrizes foram selecionadas para os grupos das não hipertensas (68,6 %) com média de PA de internação de 111/70 mmHg e hipertensas (31,4%) com média de PA de internação de 159/103 mmHg. As médias das concentrações de sódio e potássio obtidas no colostro de 48 horas das nutrizes não hipertensas foram, respectivamente, 87,2 (± 4,31) mmol/L e 14,45 (± 4,24) mmol/L, e no grupo das nutrizes hipertensas foram, respectivamente, 87,75 (± 11,83) mmol/L e 14,49 (± 4,24) mmol/L. Quando se testaram associações da hipertensão com os níveis de sódio e potássio no colostro, bem como com as variáveis: idade, paridade, história familiar (mãe e pai) de hipertensão arterial sistêmica, idade gestacional, peso do recém-nascido e fatores socioeconômicos, apenas a idade e a paridade associaram significativamente com a hipertensão (p≤0,05). Quando se testaram associações das concentrações de sódio e potássio com as variáveis acima citadas, encontrou-se associação significativa (p≤0,05) da variável história paterna de hipertensão com a concentração de sódio no colostro, e da variável idade com a concentração de potássio no colostro. Pelo presente estudo conclui-se que as médias das concentrações de sódio e potássio no colostro de 48 horas das nutrizes não hipertensas e hipertensas não apresentaram diferenças significativas.
Análise bioinformática de transcritos da glândula de veneno da aranha – marrom Loxosceles intermedia e construção de baculovírus recombinantes como vetores de toxinas inseticidas.
(Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto., 2005) Castro, Cibele Soares de; Castro, Ieso de Miranda
Neste trabalho, objetivando a caracterização molecular de transcritos da glândula de veneno da aranha-marrom Loxosceles intermedia para a ampliação do banco de dados de toxinas, 268 seqüências foram agrupadas em 136 singlets e 33 consensos. Estas seqüências foram submetidas à anotação gênica para que fossem identificadas por meio de buscas de similaridade contra diferentes bancos de dados. Em seguida, foram classificadas em categorias funcionais, analisadas quanto a sua função biológica e, quando possível, modeladas por homologia para que verificássemos sua provável estrutura tridimensional. Além disso, a fim de produzir bioinseticidas de alta eficiência e especificidade, trabalhamos com toxinas de atividade letal para insetos de importância agrícola. Recentemente, a partir da purificação do veneno bruto de L. intermedia e da construção de uma biblioteca de cDNA das glândulas de veneno desta aranha, nosso grupo caracterizou toxinas com forte ação inseticida em larvas de Spodoptera frugiperda, a lagarta-do-cartucho do milho. Devido às dificuldades para se obter do veneno bruto as toxinas identificadas por biologia molecular, o uso de sistemas de expressão heterólogos torna-se necessário tanto para o estudo dos genes isolados dessas toxinas quanto para a sua obtenção em grandes quantidades. Um dos sistemas heterólogos de controle a pragas mais estudados em nível nacional e internacional é aquele que utiliza baculovírus no combate a diversas pragas agrícolas. O sistema baculovírus supera em vários aspectos os sistemas tradicionais de inseticidas químicos, sendo considerado por diversos autores como seguro ao meio ambiente e ao homem e, também, apresentando potencialmente um custo final por hectare menor do que o dos inseticidas químicos. Assim, realizamos - através da subclonagem em vetores de transferência do sistema de expressão baculovírus - a inserção dos genes das toxinas inseticidas LiTx1, LiTx2 e LiD1 (previamente identificadas a partir da glândula de veneno de L. intermedia) ao genoma do baculovírus AcMNPV. O sucesso da construção dos vírus recombinantes foi verificado após infecção de células de inseto e também por PCR. A expressão das toxinas LiTx1, LiTx2 e LiD1 foi verificada por RT-PCR, SDS-PAGE e Western Blotting. Bioensaios com os vírus recombinantes LiTx1 e LiTx2 em larvas de S. frugiperda demonstraram sua eficácia inseticida, com diminuição do tempo de vida desta lagarta, quando comparada aos vírus selvagens. Acreditamos que os baculovírus recombinantes aqui gerados poderão permitir a expressão em larga escala das toxinas LiTx1, LiTx2 e LiD1 de L. intermedia. Isso possibilitará a realização de estudos de caracterização dessas toxinas inseticidas quanto aos seus mecanismos de ação e permitirá também sua utilização como ferramentas na pesquisa básica para estudos de canais iônicos e outros processos fisiológicos.
O efeito da pressão seletiva com praziquantel na diversidade genética da cepa LE de Schistosoma mansoni.
(Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto., 2005) Lage, Regina Coeli Gonçalves; Babá, Élio Hideo
A esquistossomose é uma das doenças parasitárias que causam maior impacto na saúde humana em todo o mundo. No Brasil, ela é causada pelo platelminto trematodeo digenéico Schistosoma mansoni. A medida de controle da esquistossomose mais importante é o emprego da quimioterapia específica em larga escala. Atualmente, o medicamento de escolha para o tratamento da esquistossomose causada por todas as espécies de Schistosoma é o praziquantel (PZQ). Apesar do PZQ ser eficaz e seguro, seu uso em larga escala em áreas endêmicas e tratamentos repetitivos podem causar a seleção de cepas resistentes. Isolados resistentes, ou com baixa susceptibilidade, já foram encontrados na natureza e também podem ser selecionados em laboratório. O impacto da seleção de indivíduos que apresentam o fenótipo de resistência em uma população ainda não foi estudado. Este trabalho teve como objetivo selecionar uma cepa de S. mansoni resistente ao PZQ e analisar o perfil genético da cepa selecionada em co mparação com a que a originou utilizando marcadores polimórficos do tipo microssatélites. Para induzir a resistência ao PZQ foi utilizada a cepa de S. mansoni LE. Camundongos infectados foram tratados com doses crescentes de PZQ, até a dose curativa, durante sete gerações. O DNA de vermes obtidos a cada geração foi analisado utilizando seis loci de microssatélites. Os dados parasitológicos e genéticos obtidos foram comparados com dados da mesma cepa sem indução de resistência. Após seis gerações do parasito submetido ao tratamento com PZQ foi possível obter uma cepa de S. mansoni com susceptibilidade diminuída a PZQ. Vermes fêmeas apresentaram maior susceptibilidade a PZQ que vermes machos apenas na população selecionada. A pressão seletiva com PZQ diminuiu a diversidade genética de S. mansoni. Não houve diferença significativa quanto a diversidade genética de vermes fêmeas e machos. A obtenção de uma cepa resistente a PZQ é de fundamental importância para estudos de mecanismos de resistência e será também útil para a comparação dos níveis de sensibilidade de isolados de campo.
Avaliação bioquímica, nutricional e cardiopulmonar de ratos recuperados de uma desnutrição protéica.
(Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto., 2005) Amaral, Daniela Almeida do; Chianca Júnior, Deoclécio Alves
A desnutrição é uma condição patológica que causa uma gama de modificações predispondo ao desenvolvimento de doenças crônicas não transmissíveis e alterando a regulação reflexa do sistema cardiovascular. A recuperação nutricional vai depender, em parte, do período e duração da desnutrição. Resultados do nosso Laboratório demonstraram alterações bioquímicas e nutricionais decorrentes da desnutrição protéica além de uma potenciação do Reflexo Bezold- Jarisch (RBJ). Nesse trabalho avaliamos o peso corporal, a ingestão alimentar, parâmetros bioquímicos e o RBJ de ratos recuperados de uma desnutrição protéica. Foram utilizados ratos Fisher machos divididos em 2 grupos: controle e recuperado. Após o desmame os grupos controle e desnutrido receberam dieta 17% de proteína e 6% de proteína por 35 dias. A partir daí, os grupos controle e recuperado passaram a receber dieta 17% de proteína por 35 dias. Foram analisados a ingestão de dieta, água e o peso corporal. Ao final da recuperação, analisamos parâmetros bioquímicos e o RBJ. Cateteres foram implantados na artéria e veia femorais para registros de pressão arterial (PA) e freqüência cardíaca (FC) e administração de drogas. Para estimulação do RBJ foram utilizadas injeções endovenosas em bolus de fenilbiguanida (PBG) nas doses de 0,625a ; 1,25b ; 2,5c e 5,0d g/kg administradas aleatoriamente. Os resultados foram mostrados como média ± erro-padrão. O peso corporal inicial dos animais foi de 71,63±0,83g e 73,04±1,72g. O peso após a recuperação e o ganho de peso apresentaram diferenças significativas (260,10±10,08g vs 196,30±2,08g) e (34,38±5,40g vs 126,10±2,26g). As análises bioquímicas após a recuperação não apresentaram diferenças significativas: Hemoglobina (15,53±0,24g/dl vs 15,38±0,22g/dl); Proteína total (6,94±0,19g/dl vs 6,45±0,25g/dl); Albumina (3,57±0,12g/dl vs 3,42±0,06g/dl) e Glicose (152,06±4,85mg/dl vs 155,30±9,57mg/dl). Os valores basais de pressão arterial média (PAM) e freqüência cardíaca (FC) não apresentaram diferenças significativas entre os grupos controle e recuperado (118±1,2 mmHg; 371±9,5 bpm vs 120±3,0 mmHg; 366±10,7 bpm). Com relação ao RBJ, tanto as bradicardias quanto as hipotensões decorrentes das injeções endovenosas de PBG não apresentaram diferenças significativas entre os grupos estudados (-43±17,8bpm vs -36±21,1 bpm) a ; (-121±35,9 bpm vs -111±25,8 bpm) b ; (-274±20,1 bpm vs -232±12,6 bpm) c ; (-327±14,0 bpm vs -289±26,0 bpm) d :: (-8±1,6 mmHg vs -5±0,9 mmHg) a ; (-16±5,3 mmHg vs -8±1,7 mmHg) b ; (-39±4,7 mmHg vs -33±5,7 mmHg) c ; (-63±4,3 mmHg vs -60±6,1 mmHg) d . Esses dados indicam que a recuperação nutricional proposta restabelece parcialmente os parâmetros nutricionais e normaliza os valores bioquímicos e os parâmetros cardiovasculares alterados pela desnutrição protéica.
Varredura de uma biblioteca de cDNA da aranha Lasiodora sp utilizando-se de antisoro policlonal anti-veneno total e clonagem das seqüências codificantes para LTx1 e LTx3 no vetor de expressão bacteriano pET-11a.
(Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto., 2005) Vieira, André Luiz Gomes; Castro, Ieso de Miranda
Venenos de aranhas são sistemas de multicomponentes que podem ser agrupados em 3 classes químicas principais: moléculas orgânicas de baixo peso molecular, peptídeos e proteínas de alto peso molecular. A grande maioria de toxinas de aranhas identificadas até o momento é composta de polipeptídeos com uma massa molecular de 3000-8000 Da altamente reticulados por pontes dissulfeto. A purificação de peptídeos tóxicos de venenos de aranhas nos propicia um arsenal de ferramentas moleculares para estudos eletrofisiológicos, farmacológicos e estudo de canais iônicos. Este trabalho descreve o resultado da varredura de uma biblioteca de cDNA, utilizando-se da técnica de ELISA, com o objetivo de identificar proteínas imunogênicas. A biblioteca de cDNA foi construída a partir do mRNA isolado de glândulas de veneno de Lasiodora sp. Anti-soro contra o veneno total foi usado na varredura. Os clones positivos foram caracterizados por seqüenciamento de DNA. Nossos resultados mostram que os precursores das toxinas descritas apresentam um peptídeo sinal caracterizado por um alto conteúdo de aminoácidos hidrofóbicos, um propeptídeo interposto entre a seqüência sinal e a toxina madura, e a seqüência de aminoácidos da toxina madura. Os cDNAs que codificam as toxinas LTx1 e LTx3 foram inseridos no vetor de expressão pET-11a, gerando plasmídeos com a capacidade de codificar as toxinas maduras. O sistema pET-11a-LTx1 produziu a toxina LTx1 recombinante na forma solúvel.
Seleção e caracterização de cepas de Saccharomyces cerevisiae utilizadas na produção de cachaça de alambique no Estado de Minas Gerais.
(Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto., 2005) Oliveira, Valdinéia Aparecida de; Brandão, Rogélio Lopes
Cachaça é a mais popular bebida destilada produzida no Brasil. Em Minas Gerais a atividade se encontra em expansão, com uma produção anual de cerca de 230 milhões de litros, sendo uma grande atividade econômica com boas perspectivas para o mercado externo. Usualmente o processo de fermentação do caldo de cana é conduzido por uma sucessão de cepas de leveduras, sendo que a espécie de levedura predominante é a Saccharomyces cerevisiae. O aroma e o sabor são características que influenciam, identificam e oferecem qualidade às bebidas fermentadas. Na cachaça, e em outras bebidas como o vinho, tem sido incorporado o uso de cepas selecionadas no processo fermentativo para melhorar as características das bebidas e gerar um produto de melhor qualidade. Neste trabalho, isolamos cepas de S. cerevisiae de diferentes regiões do estado de Minas Gerais, usando a nova metodologia (INPI-MG Protocolo-315) que seleciona leveduras com características desejáveis para a produção de cachaça. Assim, as cepas foram selecionadas seguindo critérios relevantes para a produção da bebida, como: não produção de H 2 S, tolerância a etanol e a temperaturas elevadas, capacidade fermentativa, floculação e produção de micocinas. As leveduras foram também expostas a drogas como TFL e cerulenina para identificar aquelas maiores produtoras de álcoois superiores e ésteres. As cepas selecionadas foram identificadas como S. cerevisiae pela análise com enzimas de restrição da região ITS (internal transcribed spacer region). Nos últimos anos, várias metodologias baseadas na análise do polimorfismo do DNA têm sido utilizadas para permitir a discriminação entre cepas inoculadas de cepas remanescentes presentes na flora indígena envolvidas no processo fermentativo. Em nossos resultados demonstramos que o RAPD-PCR utilizando primers baseados no sítio de splicing de introns e PCR utilizando primers complementares a região do gene COXI não são suficientes para permitir uma boa diferenciação entre as cepas selecionadas, porém estas técnicas permitiram a distinção entre diferentes espécies de leveduras pertencentes ao grupo Saccharomyces sensu stricto. Por outro lado, o uso da cariotipagem para diferenciação das cepas com base no perfil cromossomal, permitiu uma nítida distinção entre todas as cepas analisadas. Apesar do grande polimorfismo molecular encontrado não observamos correlação entre diversidade genética e localização geográfica. Posteriormente as cepas foram analisadas quanto a produção de álcoois superiores e ésteres através de cromatografia gasosa, demonstrando que as cepas produzem elevada quantidade de álcool isoamílico e caproato de etila. Os resultados demonstram que a metodologia utilizada é apropriada para a seleção de cepas com características adequadas para serem utilizadas na produção de cachaça de alambique. E que a utilização de cepas selecionadas como fermento iniciador requer o uso combinado de métodos bioquímicos e moleculares que possibilitem caracterizar e analisar a dinâmica das cepas selecionadas durante todo o processo fermentativo .
Impacto de infecções mistas por clones de Trypanosoma cruzi pertencentes aos grupos genéticos principais sobre propriedades biológicas do parasito em camundongos BALB/C.
(Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto., 2005) Martins, Helen Rodrigues; Lana, Marta de
Oito estoques clonais de Trypanosoma cruzi, dois de cada umdos genótipos principais 19 e 20 (T. cruzi I), 39 (híbrido) e 32 (T. cruziII) foramcombinados em24 infecções mistas diferentes e estudadas emcamundongos BALB/c. Emcada uma das infecções mistas, os animais foraminoculados com5.000 tripomastigotas sanguíneos de cada clone por animal e comparados coma corresponde infecção monoclonal cujo inóculo foi de 10.000 tripomastigotas do clonepor animal. Foramanalisados oito parâmetros: percentual de infectividade, percentual de mortalidade e percentual de positividade da hemocultura, período pré-patente, período patente, pico máximode parasitemia, dia do pico máximode parasitemia e parasitemia. Três comparações foram realizadas: (a) infecção monoclonal x infecçãomista baseada nos valores esperados (b) infecção monoclonal x infecção mista baseada nos valores observados (c) valores esperados x valores observados para as infecções mistas. Ocorreramdiferenças significativas na maioira dos parâmetros estudados, tendo sido observadas diferentes percentagens de alterações, variando de 4,2 a 79,2%. A parasitemia foi o parâmetro que apresentou maior pencentagemde alteração ocorrendo empraticamente todas as combinações genotípicas de T. cruzi. Foi observado aumento significativo e moito misturas e diminuição em11, representando alterações em19 das 24 combinações. Em umdos casos, foi observado efeito inibitório recíproco completo de umclone sobre o outro. A análise dos outros quatros parâmetros assosiados a parasitemia também demonstraramdiferenças significativas entre os valores observados e esperados nas infecções duplas emdiferentes proporções: 45.83% para PPP, 62.5% para PP, 66.6% para PMP e 33.3% para DPMP. Quando esses parâmetros foramconsiderados em conjunto, 11, 14, 11, 11, 15 e seis diferenças entre os valores observados e esperados foramdetectadas nas combinações genotípicas 19+20, 19+39 19+32, 20+39, 39+32 e 20+32, respectivamente. O menor número de diferenças significativas ocorreu exatamente na mistura 20+32, comclones filogeneticamente mais distantes e biologicamente mais distintos. Esses resultados enfatizama importância de se considerar a possibilidade de ocorrência de infecções mistas e suas conseqüências para o hospedeiro, na patogênese e na evolução da doença de Chagas.
Avaliação de testes sorológicos para leishmaniose visceral canina utilizando coleta de amostra sanguíneas em papel de filtro.
(Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto., 2005) Silva, Marcus Vinícius da; Coelho, George Luiz Lins Machado
A leishmaniose visceral vem apresentando mudanças importantes em seu padrão de transmissão, com progressiva urbanização e expansão geográfica, acometendo regiões anteriormente consideradas indenes. O controle da doença tem se mostrado difícil e laborioso, e a experiência adquirida nas últimas décadas revela a necessidade de se utilizar as medidas de controle de forma integrada. Incluída entre as estratégias preconizadas pelos órgãos públicos, a eliminação dos reservatórios caninos constitui uma importante ação que, para ser executada, exige uma correta identificação dos cães infectados. Outras medidas, como a vacinação dos cães, têm sido também utilizadas. Com a introdução no mercado de uma vacina contra a Leishmaniose Visceral Canina (Leishmuneâ), capaz de ocasionar o desenvolvimento de altos níveis de anticorpos IgG, torna-se necessária a utilização de novos marcadores sorológicos. Além disso, para o diagnóstico sorológico da infecção por Leishmania chagasi, é desejável a utilização de sangue dessecado em papel de filtro (SDPF), pois apresenta vantagens sobre a utilização de soro obtido por punção venosa, principalmente com relação aos custos envolvidos com logística e às facilidades para utilização em condições de campo. Assim, neste trabalho, buscou-se validar, em amostras de soro e de SDPF, um teste de imunofluorescência indireta (IFI), desenvolvido pela Bio-Manguinhos, e dois testes imunoenzimáticos (ELISA), sendo um deles também desenvolvido pela Bio-Manguinhos e o outro desenvolvido de acordo com a técnica descrita por Voller (1976) com modificações, utilizando antígeno solúvel obtido a partir de promastigotas de L. major-like. Avaliou-se também a reprodutibilidade dos níveis de anticorpos IgG, IgG1 e IgG2 por estas reações sorológicas, ao longo do tempo decorrido após a coleta. Além disso, determinou-se a capacidade das imunoglobulinas IgG1 e IgG2 de se constituírem em marcadores de infecção ativa por L. chagasi e o comportamento das mesmas em amostras de SDPF. As amostras de soro e eluato de SDPF obtidas de 161 cães – sendo 31 negativos, 10 chagásicos, 42 infectados assintomáticos, 45 infectados oligossintomáticos e 33 infectados polissintomáticos – foram ensaiadas de forma pareada no 1o dia após a coleta (D.A.C.), sendo que no 15o, 30o e 60o D.A.C. foram ensaiadas alíquotas de amostras de eluato de SDPF e comparadas com os resultados obtidos com o soro no 1º D.A.C. A validade das reações, em soro e em eluato, foi aferida através dos índices de copositividade (icp), co-negatividade (icn), concordância de Youden (J) e dos valores preditivos positivo (vpp) e negativo (vpn), utilizando-se a reação de IFI em soros como referência, uma vez que esta reação demonstrou fidelidade em identificar corretamente os animais verdadeiramente positivos e negativos. As reações de IFI, ELISA (Bio- Manguinhos), ELISA IgG (ag. L. major-like) e ELISA IgG2 (ag. L. major-like), em amostras de soro e eluato, se mostraram válidas para o diagnóstico sorológico da LVC. A distribuição cruzada dos resultados obtidos com soro e eluato, para cada reação avaliada, revelou ótimas e boas concordâncias para as reações de IFI, ELISA (Bio-Manguinhos), ELISA IgG (ag. L. major-like) e ELISA IgG2 (ag. L. major-like). A análise da reprodutibilidade das reações em SDPF, armazenadas a 4ºC na presença de sílica-gel., em função do tempo, demonstrou que níveis de imunoglobulinas específicas da classe IgG, presentes nas amostras de SDPF, mantiveram-se estáveis por até 30 D.A.C. pela reação de IFI e por até 60 D.A.C. pelas reações de ELISA (Bio-Manguinhos) e ELISA (ag. L. majorlike). As imunoglobulinas específicas das subclasses IgG1 e IgG2, presentes nas amostras de SDPF, também mantiveram seus níveis estáveis por até 60 D.A.C. pela reação de ELISA (ag. L. major-like). Não foi possível estabelecer uma correlação entre os níveis da imunoglobulinas IgG, IgG1 e IgG2 com a classificação clínica dos cães infectados por L. chagasi.
Avaliação da utilização de Lactobacillus delbrueckii UFV H2b20 como adjuvante na vacinação contra Leishmania braziliensis.
(Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto., 2005) Castro, Juciane Maria de Andrade; Afonso, Luís Carlos Crocco
Um dos grandes desafios na formulação de uma vacina efetiva contra Leishmania é a descoberta de um adjuvante com efeito imunomodulador que irecionem a resposta imune a um perfil de resistência aos parasitas, uma vez que as vacinas testadas até o momento não apresentam eficácia apropriada. O Lactobacillus delbrueckii UFV H2b20 já teve seu efeito imunomodulador comprovado em camundongos, induzindo produção de IL-12, IFN- e TNF- in vitro, e aumentando o poder de eliminação de Escherichia coli patogênica por esses animais. Em células mononucleares do sangue periférico humano de voluntários sadios, induziu a produção de IL-12, IFN- e TNF- e estimulou a ativação de mecanismos efetores da imunidade inata, levando à diferenciação de linfócitos T virgens em linfócitos Th1 específicos para antígeno de Leishmania amazonensis. Neste trabalho, verificou-se a capacidade do Lact delbrueckii de proteger camundongos BALB/c contra infecção por Leishmania braziliensis, funcionando, assim, como adjuvante indutor de uma resposta que levaria a eliminação desse parasita. Verificouse que o Lact delbrueckii induziu a produção, in vitro, de altos níveis de IL-12, IFN- e TNF- por esplenócitos de camundongos BALB/c. Porém, quando inoculado na presença de antígeno de L. braziliensis, essa bactéria não foi capaz induzir proteção aos camundongos contra a inoculação de formas infectantes desse parasita. Esse resultado pode ser explicado pela indução concomitante da citocina IL-10 pelo Lact delbrueckii, o que ocasionaria uma supressão da resposta protetora. Diante dessas constatações, decidiu-se isolar a molécula do Lact delbrueckii responsável pela indução da produção de IL-12. Para isso, obteve-se um extrato de parede dessa bactéria. Esse extrato induziu IFN- , in vitro, de uma maneira peculiar e distinta à bactéria íntegra. A análise desse extrato revelou que a provável substância imunomoduladora possui característica glícidica e baixo peso molecular. Esses resultados demonstram a importância em se efetivarem estudos mais detalhados com o Lact. delbrueckii e outras bactérias probióticas no sentido de caracterizar seus componentes distintos envolvidos na indução diferencial de determinadas citocinas.
Comparação de técnicas sorológicas para a identificação da leishmaniose visceral canina (LVC) visando a otimização do diagnóstico em inquéritos epidemiológicos.
(Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto., 2005) Ferreira, Eduardo de Castro; Gontijo, Célia Maria Ferreira
O presente estudo avaliou o desempenho de três métodos sorológicos diferentes (RIFI, ELISA e DAT) utilizados no diagnóstico da leishmaniose visceral canina. Foram avaliadas 234 amostras de soros de cães provenientes de Belo Horizonte, área endêmica para LV. Vinte soros de cães não infectados de área não endêmica e 20 soros de cães com outras doenças parasitárias, sendo sete soros de cães com Trypanosoma cruzi, cinco soros de cães com Leishmania braziliensis, cinco soros de cães com Toxoplasma gondii e três soros de cães com Erlichia canis.foram incluídos neste estudo. ARIFI presentou baixasensibilidade(72%), especificidade (52%), e reação cruzada com soros de cães infectados com T. cruzi, L. braziliensis e E. canis. O teste de ELISA apresentou elevada sensibilidade (95%) embora com especificidade baixa (64%), e reação cruzada com soros de cães infectados com T. cruzi, L. braziliensis e E. canis. O DAT apresentou elevadas sensibilidade (93%), specificidade (96%), e reação cruzada apenas com uma amostra de E. canis. De acordo com o índice kappa, a RIFI apresentou uma reprodutibilidade regular, enquanto ELISA e DAT apresentaram reprodutibilidade perfeita. A concordância entre os testes realizados a partir de soros de cães de área endêmica foi ótima entre ELISA e DAT, boa entre ELISA e RIFI e regular entre RIFI e DAT. Essa concordância entre os testes foi variável de acordo com o grupo clínico analisado. Não foi observada correlação entre os títulos e/ou absorbância dos testes entre si, assim como não foi observada correlação entre título ou absorbância e gravidade da doença. Foram ainda analisadas 230 amostras de eluato de sangue dissecado em papel filtro de cães, dos 234 cães anteriormente analisados, pelas técnicas de RIFI e ELISA. A concordância entre amostras de soro e eluato foi boa para o ELISA e regular para a RIFI. Comparando os testes realizados com eluato a concordância foi regular. Quando foram comparados os testes ELISA e RIFI realizados com soro, a concordância foi boa. Este estudo confirmou que ainda não existe uma técnica de diagnóstico com 100% de especificidade e sensibilidade e que a escolha da técnica dependerá do objetivo do estudo. Tendo em vista a otimização do diagnóstico da LVC e baseado nos resultados deste estudo, sugerimos o incentivo por parte do Ministério da Saúde (MS) do desenvolvimento e produção de um antígeno a ser utilizado no DAT que poderá substituir os métodos usados atualmente .
Efeito do excesso de ferro e dieta hipercolesterolêmica sobre o perfil de lipídios sérios e estresse oxidativo em Hamsters.
(2005) Silva, Jacqueline Coelho Augusto da; Pedrosa, Maria Lúcia
O aumento nos níveis de LDL e a diminuição de HDL têm sido apontados como fatores de risco para a aterosclerose e contribuído para o desenvolvimento de doenças cardiovasculares (DCV). Por outro lado, estudos epidemiológicos e experimentais sugerem que o excesso de ferro, também, pode contribuir para o desenvolvimento dessas doenças. O objetivo do trabalho foi investigar o efeito do excesso de ferro sobre as diversas frações de lipídios séricos e homeostase do ferro em hamsters alimentados com dieta controle ou contendo colesterol. Golden Syrian Hamsters machos foram divididos em quatro grupos de acordo com o tratamento recebido: grupo controle (C) recebeu dieta controle; grupo CF recebeu dieta controle e excesso de ferro; grupo H recebeu dieta hipercolesterolêmica contendo 0,5g/100g de colesterol e grupo HF recebeu dieta hipercolesterolêmica e excesso de ferro. O experimento durou nove semanas e o excesso de ferro foi obtido através de injeções de ferro-dextran, na sétima semana na dose de 10mg/dia durante 5 dias. Os dados foram testados pela ANOVA, análise bivariada. Quando as alterações foram significativas, o teste de Tukey foi feito para determinar as diferenças específicas entre as médias. A diferença de p< 0,05 foi considerada significativa. O excesso de ferro aumentou (p<0,05) os níveis de colesterol plasmáticos em hamsters alimentados com dieta hipercolesterolêmica (4,370,73 mmol/L e 7,072,22 mmol/L para H e HF, respectivamente). O colesterol sérico não foi diferente entre os grupos C e CF (1,680,29 mmol/L e 1,930,37 mmol/L para C e CF, respectivamente). O excesso de ferro associado à dieta hipercolesterolêmica também aumentou as frações HDL e LDL colesterol (p<0,05). O tratamento com ferro-dextran aumentou o ferro sérico, a saturação de transferrina e a capacidade de ligação do ferro nos grupos CF e HF. A dieta hipercolesterolêmica aumentou o estresse oxidativo, avaliado pelos níveis séricos de 4-hidroxialquenal, mas o excesso de ferro não alterou as concentrações de 4-hidroxialquenal, malondialdeído, ou o status antioxidante total. Nossos resultados sugerem que a dieta hipercolesterolêmica aumenta o colesterol sérico e proporcionalmente as demais frações nos hamsters e que o tratamento com ferro, quando associado à dieta hipercolesterolêmica, potencializa tais aumentos, que o excesso de ferro não afeta o status antioxidante e que o hamster pode ser um bom modelo para explorar mecanismos que favorecem nosso entendimento sobre a relação ferro/lipídios.
Nanocápsulas de poli-&-caprolactona contendo halofantrino : desenvolvimento, caracterização e estudo da cardiotoxicidade.
(Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto., 2006) Leite, Elaine Amaral; Mosqueira, Vanessa Carla Furtado
A malária é uma das infecções parasitárias mais importantes do mundo. A malária severa é uma forma complicada de infecção pelo Plasmodium falciparum onde administração intravenosa de agentes antimaláricos é necessária. O halofantrino (Hf) poderia ser uma alternativa para o tratamento da malária porque é um fármaco ativo contra cepas de P. falciparum resistentes à cloroquina. Porém, é freqüentemente associado com o prolongamento do intervalo QT do eletrocardiograma. No presente trabalho, o Hf base foi associado a carreadores coloidais nanoestruturados, conhecidos como nanocápsulas (NCs), as quais são constituídas por um núcleo oleoso envolvido por polímero biodegradável, a poli--caprolactona. O índice de polidispersão e o diâmetro médio das partículas foram determinados por espectroscopia de correlação de fótons (PCS) e a medida do potencial zeta por mobilidade eletroforética. A morfologia e a organização estrutural foram avaliadas pela técnica de microscopia de força atômica (MFA), buscando analisar e entender possíveis alterações induzidas pela associação do fármaco a essas nanoestruturas. O principal objetivo desse trabalho foi avaliar as alterações eletrocardiográficas, principalmente o prolongamento do intervalo QT e as alterações de pressão arterial, em ratos Wistar sadios ou infectados com Plasmodium berghei, após a administração i.v. de uma dose única, especialmente alta (100 e 150 mg/kg) de halofantrino associado às nanocápsulas (NC-Hf) ou solução de cloridrato de halofantrino (Hf.HCl). O diâmetro médio das NCs brancas obtido por MFA variou de 222 a 550 nm, enquanto o diâmetro médio dessa mesma amostra determinado por PCS foi de 245 nm. O diâmetro médio das NC-Hf, determinado por MFA, foi 475  153 nm e 309  97 nm para 0,1 e 1,0 mg Hf/mL de suspensão coloidal. A análise dos dados mostrou que o diâmetro das NCs é muito maior que a altura, apresentando uma relação diâmetro/altura de aproximadamente 10. A dose aguda letal (DL 100) observada experimentalmente foi de 200 mg/kg para o grupo que recebeu Hf.HCl enquanto a DL 50 calculada foi 154 mg/kg. A DL100 para NC-Hf foi 300 mg/kg, e os animais morreram em tempos superiores quando comparados com Hf.HC e a DL 50 calculada para NC-Hf foi 249 mg/kg. Foi observado, nos experimentos de avaliação da cardiotoxicidade a curto prazo, que o Hf induziu um prolongamento dose-dependente dos intervalos QT e PR do ECG, porém, este efeito foi significativamente reduzido (P < 0,001) quando o Hf foi administrado associado às nanocápsulas. O Hf.HCl induziu uma bradicardia pronunciada, seguida por uma redução contínua da freqüência cardíaca e hipotensão severa que levaram os animais à morte. Nenhuma alteração nos parâmetros cardiovasculares foi observada nos animais que receberam as soluções controle: veículo do Hf livre ou excipientes das NCs em intervalos de tempo e volumes equivalentes. O Hf associado às NCs reduziu o prolongamento do intervalo QT de 77% e 85%, 5 min após a administração de 100 e 150 mg/kg, respectivamente. A avaliação a longo prazo demonstrou aumentos equivalentes para o intervalo QT e QTc quando Hf foi administrado como NC-Hf na dose de 150 mg/kg comparada com a mesma dose do Hf livre até 30 minutos, observando uma alteração máxima somente 2 horas depois da injeção. Entretanto, as NC-Hf induziram uma toxicidade menos pronunciada, uma vez que todos os animais sobreviveram durante todo o período experimental. Por outro lado, o Hf.HCl induziu morte em 83% dos animais, 30 min após a administração. Foi observada alteração do intervalo QT, 24 horas após a administração de NC-Hf a qual poderia ser atribuída ao Hf acumulado nas células do sistema fagocítico mononuclear. A avaliação da cardiotoxicidade em ratos infectados com Plasmodium berghei demonstrou que a NC-Hf induziu variações dos parâmetros cardiovasculares semelhante ao Hf.HCl, indicando que em animais infectados, as NC estariam disponibilizando o fármaco para interação com as células cardíacas de maneira semelhante à solução de Hf.HCl. Porém, em todos os experimentos realizados, em animais sadios ou infectados foi observado que, provavelmente, a encapsulação do Hf alterou sua distribuição no organismo, pois a resposta farmacológica foi alterada.