Identificação de novos antígenos candidatos vacinais contra leishmaniose visceral canina no genoma de L. infantum utilizando a bioinformática como ferramenta.
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Data
2014
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Resumo
A leishmaniose visceral canina (LVC) é uma zoonose na América Latina, e o cão possui um
papel central como reservatório do parasito e na transmissão da infecção para o vetor no ciclo
urbano da Leishmania infantum. A vacinologia reversa permite realizar a predição de epítopos in
silico de células B e T, que são importantes na resposta imune, permitindo o desenho de vacinas
com tempo reduzido. O objetivo deste trabalho foi selecionar genes do protozoário L. infantum
candidatos à vacina contra LVC. Esse objetivo foi divido em duas etapas, sendo a primeira a
seleção de antígenos utilizando ferramentas de bioinformática e a segunda a clonagem e
expressão dos antígenos selecionados em um sistema eucarioto. Na ETAPA I foi realizado o
download do proteoma predito da espécie L. infantum, com 8.241 proteínas, que foi usado em
todas as análises subsequentes. As predições foram feitas utilizando-se os seguintes algoritmos:
a) para MHC-I, NetCTL e NetMHC; b) para MHC-II, NetMHCII; c) para células B, BepiPred,
AAP12 e BCPred12 enquanto que para a predição da localização subcelular das proteínas foram
utilizados Sigcleave, TargetP e WoLF PSORT. Foram analisados 12 alelos MHC-I humanos e
sete alelos MHC-I de camundongos, e no contexto de MHC-II, foram analisados 14 alelos
humanos e três de camundongos. Após a realização das predições, foi necessário o
desenvolvimento de um Banco de Dados relacional em um Sistema Gerenciador de Banco de
Dados (SGBD), o MySQL, para a integração dos resultados e pré-seleção das proteínas baseado
nos seguintes critérios: proteínas secretadas/excretadas ou de membrana plasmática, com
epítopos preditos com afinidade pelos 19 alelos de MHC-I utilizados e epítopos preditos com
afinidade por no mínimo 14 alelos de MHC-II, além de epítopos preditos para células B. Em
seguida, foi feita uma busca por similaridade de sequências com os proteomas preditos de
humano, de cão e de camundongo a fim de evitar reações autoimunes no ato da vacinação, para
isso foi utilizado o algoritmo BLASTp, do pacote Blastall. Após o alinhamento de sequências, as
proteínas com pouca similaridade foram confrontadas com a rede predita de interação proteínaproteína
do parasito, desenvolvida pelo grupo de pesquisa. Na ETAPA II, as proteínas
selecionadas foram clonadas no vetor de clonagem pGEM T easy, seguido da clonagem no vetor
de expressão pPICZα-A, onde os clones foram confirmados pela PCR e digestão enzimática.
Após essa etapa, os plasmídeos pPICZα-A recombinantes foram linearizados e transformados na
levedura Pichia pastoris, integrando-se no gemona da levedura. Os clones recombinantes foram
selecionados por PCR. Através das ferramentas de bioinformática, foram selecionadas quatro
proteínas candidatas a uma vacina contra LVC. Neste trabalho foi mostrado o resultado de clonagem e expressão de dois genes que codificam duas proteínas.
Descrição
Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. CIPHARMA, Escola de Farmácia, Universidade Federal de Ouro Preto.
Palavras-chave
Bioinformática, Leishmaniose visceral, Clonagem, Pichia stipitis
Citação
BRITO, Rory Cristiane Fortes de. Identificação de novos antígenos candidatos vacinais contra leishmaniose visceral canina no genoma de L. infantum utilizando a bioinformática como ferramenta. 2014. 111 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Farmacêuticas) – Escola de Farmácia, Universidade Federal de Ouro Preto, Ouro Preto, 2014.