Produção, purificação e caracterização de uma poligalacturonase de Cylindrocladium pteridis.
dc.contributor.advisor | Guimarães, Valéria Monteze | pt_BR |
dc.contributor.author | Ázar, Rafaela Inês de Souza Ladeira | |
dc.date.accessioned | 2013-06-14T17:06:36Z | |
dc.date.available | 2013-06-14T17:06:36Z | |
dc.date.issued | 2013 | |
dc.description.abstract | Os objetivos deste trabalho foram selecionar diferentes fontes de carbono indutoras da poligalacturonase em cultura submersa de Cylindrocladium pteridis LPF-59, purificar e caracterizar a enzima para identificação das propriedades funcionais interessantes para possíveis aplicações biotecnológicas e industriais. Para produção da poligalacturonase, o fungo foi cultivado por 168 horas em meio líquido composto por uma das seis diferentes fontes de carbono: resíduo de viveiro de eucalipto antigo, resíduo de viveiro de eucalipto novo, folha de eucalipto, caule jovem de eucalipto, caule lignificado de eucalipto e farelo de trigo. A enzima produzida a partir da cultura fúngica em meio contendo folha de eucalipto foi purificada por cromatografias de troca iônica e filtração em gel. Ao final do processo, a poligalacturonase apresentou um fator de purificação de 13,32 vezes, com rendimento de 18,91%. A massa molecular da enzima foi de aproximadamente 68 KDa quando estimada por SDS-PAGE. A enzima apresentou atividade máxima em pH 4,0 e na temperatura de 60oC. Os valores de meia-vida para a poligalacturonase foram de 260 e 66 minutos, nas temperaturas de 50 e 60oC, respectivamente. Os valores de KM e Vmax, utilizando o substrato ácido poligalacturônico, foram 0,525 mg.mL-1 and 5,862 U.mL-1, respectivamente e 6,770 mg.mL-1 e 16,166 U.mL-1 para a pectina cítrica. A enzima apresentou atividade hidrolítica para ácido poligalacturônico, pectina cítrica e PDA (potato dextrose agar) . A atividade enzimática foi 97 % inibida por HgCl2 e 85 % por SDS, e na presença de CaCl2, FeSO4, lactose e EDTA, a enzima ainda manteve aproximadamente 50% da atividade original. A poligalacturonase identificada neste trabalho apresentou propriedades adequadas para sua possível aplicação em indústrias alimentícias, uma vez que sua atuação em ambientes ácidos e em altas temperaturas indica que poderia ser utilizada no processo de preparação e clarificação do suco de frutas. | pt_BR |
dc.description.abstracten | The objectives of this study were to select different carbon sources induce polygalacturonase in submerged culture of Cylindrocladium pteridis LPF-59, purify and characterize the enzyme to identify the functional properties of interest for potential biotechnological and industrial applications. To polygalacturonase production, the fungus was grown for 168 hours in liquid medium composed of the six different carbon sources: old residue from nursery eucalyptus, new residue from nursery eucalyptus, eucalyptus leaf, young stem eucalyptus, woody stem eucalyptus and wheat bran. The enzyme produced from the fungal culture in medium containing eucalyptus leaf was purified by ion exchange chromatography and gel filtration. At the end of the process, polygalacturonase had a purification factor of 13.32 times, with yield of 18.91%. The molecular mass of the enzyme was about 68 kDa when estimated by SDS-PAGE. The enzyme showed maximal activity at pH 4.0 and at a temperature of 60oC. The values of half-life for polygalacturonase were 260 and 66 minutes at temperatures of 50 and 60 ° C respectively. The values of KM and Vmax, using the substrate polygalacturonic acid were 0.525 mg.mL-1 and 5.862 U.mL-1 respectively and 6.770 mg.mL-1 and 16.166 U.mL-1 for citrus pectin. The enzyme showed hydrolytic activity for polygalacturonic acid, citrus pectin and PDA (potato dextrose agar). The enzyme activity was inhibited by 97% and 85% HgCl2 for SDS, and in the presence of CaCl2, FeSO4, EDTA and lactose, the enzyme still retained approximately 50% of the original activity. The work presented in this polygalacturonase identified suitable properties for their possible application in the food industry, since his action in acidic environments and at high temperatures indicates that it could be used in the preparation process and clarification of fruit juice. | |
dc.identifier.citation | ÁZAR, R. I. de S. L. Produção, purificação e caracterização de uma poligalacturonase de Cylindrocladium pteridis. 2013. 67 f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia) - Universidade Federal de Ouro Preto, Ouro Preto, 2013. | pt_BR |
dc.identifier.uri | http://www.repositorio.ufop.br/handle/123456789/2917 | |
dc.language.iso | pt_BR | pt_BR |
dc.publisher | Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. | pt_BR |
dc.subject | Cylindrocladium pteridis | pt_BR |
dc.subject | Enzimas | pt_BR |
dc.subject | Pectinase | pt_BR |
dc.subject | Carbono | pt_BR |
dc.title | Produção, purificação e caracterização de uma poligalacturonase de Cylindrocladium pteridis. | pt_BR |
dc.type | Dissertacao | pt_BR |
Arquivos
Pacote original
1 - 1 de 1
Nenhuma Miniatura Disponível
- Nome:
- DISSERTAÇÃO_ProduçãoPurificaçãoCaracterização.pdf
- Tamanho:
- 805.48 KB
- Formato:
- Adobe Portable Document Format
Licença do pacote
1 - 1 de 1
Nenhuma Miniatura Disponível
- Nome:
- license.txt
- Tamanho:
- 2.18 KB
- Formato:
- Item-specific license agreed upon to submission
- Descrição: