Produção, purificação e caracterização de uma poligalacturonase de Cylindrocladium pteridis.

Abstract

Os objetivos deste trabalho foram selecionar diferentes fontes de carbono indutoras da poligalacturonase em cultura submersa de Cylindrocladium pteridis LPF-59, purificar e caracterizar a enzima para identificação das propriedades funcionais interessantes para possíveis aplicações biotecnológicas e industriais. Para produção da poligalacturonase, o fungo foi cultivado por 168 horas em meio líquido composto por uma das seis diferentes fontes de carbono: resíduo de viveiro de eucalipto antigo, resíduo de viveiro de eucalipto novo, folha de eucalipto, caule jovem de eucalipto, caule lignificado de eucalipto e farelo de trigo. A enzima produzida a partir da cultura fúngica em meio contendo folha de eucalipto foi purificada por cromatografias de troca iônica e filtração em gel. Ao final do processo, a poligalacturonase apresentou um fator de purificação de 13,32 vezes, com rendimento de 18,91%. A massa molecular da enzima foi de aproximadamente 68 KDa quando estimada por SDS-PAGE. A enzima apresentou atividade máxima em pH 4,0 e na temperatura de 60oC. Os valores de meia-vida para a poligalacturonase foram de 260 e 66 minutos, nas temperaturas de 50 e 60oC, respectivamente. Os valores de KM e Vmax, utilizando o substrato ácido poligalacturônico, foram 0,525 mg.mL-1 and 5,862 U.mL-1, respectivamente e 6,770 mg.mL-1 e 16,166 U.mL-1 para a pectina cítrica. A enzima apresentou atividade hidrolítica para ácido poligalacturônico, pectina cítrica e PDA (potato dextrose agar) . A atividade enzimática foi 97 % inibida por HgCl2 e 85 % por SDS, e na presença de CaCl2, FeSO4, lactose e EDTA, a enzima ainda manteve aproximadamente 50% da atividade original. A poligalacturonase identificada neste trabalho apresentou propriedades adequadas para sua possível aplicação em indústrias alimentícias, uma vez que sua atuação em ambientes ácidos e em altas temperaturas indica que poderia ser utilizada no processo de preparação e clarificação do suco de frutas.