Produção, purificação e caracterização de uma lipase de Cylindrocladium pteridis LPF-59.
dc.contributor.advisor | Rezende, Sebastião Tavares de | pt_BR |
dc.contributor.author | Oliveira, Cristina Alves de | |
dc.date.accessioned | 2014-01-27T15:37:13Z | |
dc.date.available | 2014-01-27T15:37:13Z | |
dc.date.issued | 2013 | |
dc.description.abstract | Este trabalho teve por objetivo avaliar a produçao de lipase do fungo Cylindrocladium pteridis LPF-59 crescido em diferentes fontes de carbono, puri:ficar, caracterizar e identificar as propriedades bioquimicas da enzima corn potencial para aplicaçao industrial. 0 cultivo do fungo foi realizado em meios de cultura liquida submersa contendo bagaço de cana de açucar, farelo de trigo e resî'duos de viveiro de eucalipto como fonte de carbono. 0 farelo de trigo apresentou maior capacidade de induçao da produçao da lipase. Para produçao da enzima, o microrganismo foi cultivado por 168 boras a 28°C a 180 rpm. 0 sobrenadante da cultura foi fùtrado e submetido às cromatografias de interaçao hidrof6bica e troca iônica para purificaçao da enzima. Ao final do processo, a lipase apresentou um fator de purificaçao de 23,7 vezes e rendimento de 42,7%. A massa molecular da enzima foi estimada em 14,9 kDa por cromatografia de exclusao molecular. Atividades maximas foram detectadas em temperatura de 35°C e pH 9,0, sendo que a enzima manteve 75% de sua atividade inicial quando incubada a 400C por 12 boras e 40% quando incubada a 50 oc por 30 minutos. A atividade enzimatica foi totalmente inibida por HgC}z nas concentraçoes de 1 e 5 mM, e parcialmente inibidas por MnCh, ZnCh, CuSo4, NaCI, MgCh, EDTA e SDS na concentraçao de lmM, mantendo mais de 80% de atividade total. A estabilidade em solventes orgânicos foi estudada por incubaçao da enzima na presença dos solventes isopropanol, acetona, etanol, acetonitrila, hexano e metanol na concentraçao de 25% (v/v) durante12 boras a 25°C. A atividade enzimâtica foi maior na presença de isopropanol, mantendo também mais de 90% de sua atividade na presença de etanol e acetona. A especificidade por substratos sintéticos foi avaliada na presença dos ésteres de p-nitrofenol butirato (C4), Caprilato (C8), Decanoato (CIO), Laurato (Cl2), Miristato (Cl4) e Palmitato (Cl6). A lipase de C. pteridis LPF-59 apresentou maior capacidade de hidr6lise sobre o substrato p-nitrofenol caprilato. A lipase de C. pteridis apresentou capacidade de manter sua atividade enzimatica mesmo ap6s ser submetida a fervura. Diante desses resultados, a lipase de Cylindrocladium pteridis LPF-59 mostrou propriedades relevantes para possfveis aplicaçôes industriais, uma vez que sua atuaçao em baixas temperaturas e pH alcalino siio indicativos de possfveis aplicaçôes na fabricaçiio de detergentes. | pt_BR |
dc.description.abstracten | This study aimed to evaluate the production of lipase of the fungus Cylindrocladium pteridis LPF-59 grown on different carbon sources, puri:fy, characterize and identify the biochemical properties of the enzyme with potential for industrial application. The cultivation of the fungus was carried out in submerged liquid culture media containing sugar cane bagasse, wheat bran and eucalyptus nursery waste as a carbon source. The bran had a higher ability to induce the production of lipase. For enzyme production, the microorganism was cultured for 168 hours at 28 o C at 180 rpm. The culture supematant was :filtered and subjected to hydrophobie interaction chromatography and ion exchange purification of the enzyme. At the end of the process, the lipase showed a purification factor of 23.7 times and 42.7% yield. The molecular mass of the enzyme was estimated to be 14.9 kDa by size exclusion chromatography. Maximum activities were detected in 35 ° C and pH 9.0, and the enzyme retained 75% of its initial activity when incubated at 40 aC for 12 hours and 40% when incubated at 50 oC for 30 minutes. The nzyme activity was completely inhibited by HgCh at concentrations of 1 and 5 mM, and partially inhibited by MnC}z, ZnC}z, CuS04, NaCI, MgC}z, EDTA and SDS at a concentration of 1 mM, holding over 80% of total activity. Stability in organic solvents was studied by incubating the enzyme in the presence of the solvent isopropanol, acetone, ethanol, acetonitrile, hexane and methanol at a concentration of 25% (v 1 v) durante12 hours at 25 oC. The enzyme activity was greater in the presence of isopropanol, while also maintaining more than 90% of its activity in the presence of ethanol and acetone. The specificity for synthetic substrates was evaluated in the presence of p-nitrophenol esters, butirate (C4), caprilate (C8), decanoate (CIO), laurate (Cl2), miristate (Cl4) and palmitate (Cl6). Lipase C. pteridis LPF-59 showed higher capacity hydrolysis of the substrate p nitrophenol caprylate. Lipase C. pteridis showed ability to maintain its enzymatic activity even after being subjected to boiling. Given these results, the lipase Cylindrocladium pteridis LPF-59 showed relevant properties for potential industrial applications, since his performance at low temperatures and alkaline pH are indicative of possible applications in the manufacture of detergents. | |
dc.identifier.citation | OLIVEIRA, C. A. de . Produção, purificação e caracterização da lipase de Cylindrocltulium pteridis LPF-59. 2013. 48 f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia) - Universidade Federal de Ouro Preto, Ouro Preto, 2013. | pt_BR |
dc.identifier.uri | http://www.repositorio.ufop.br/handle/123456789/3419 | |
dc.language.iso | pt_BR | pt_BR |
dc.publisher | Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. | pt_BR |
dc.rights.license | A concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições. Na qualidade de detentor dos direitos autorais, de acordo com a lei nº 9610/98 autorizo a Universidade Federal de Ouro Preto/ UFOP, a disponibilizar gratuitamente, sem ressarcimento dos direitos autorais, o texto integral da publicação supracitada, em meio eletrônico, na BDTD - Biblioteca Digital de Teses e Dissertações e no Repositório Institucional da UFOP, no formato especificado, para fins de leitura, impressão e/ou download pela Internet, a título de divulgação da produção científica gerada pela Universidade a partir desta data. | pt_BR |
dc.subject | Lipase | pt_BR |
dc.subject | Cylindrocladium pteris | pt_BR |
dc.subject | Biotecnologia | pt_BR |
dc.title | Produção, purificação e caracterização de uma lipase de Cylindrocladium pteridis LPF-59. | pt_BR |
dc.type | Dissertacao | pt_BR |
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