Produção, purificação e caracterização de uma lipase de Cylindrocladium pteridis LPF-59.
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Data
2013
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Editor
Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto.
Resumo
Este trabalho teve por objetivo avaliar a produçao de lipase do fungo Cylindrocladium pteridis LPF-59 crescido em diferentes fontes de carbono, puri:ficar, caracterizar e identificar as propriedades bioquimicas da enzima corn potencial para aplicaçao industrial. 0 cultivo do fungo foi realizado em meios de cultura liquida submersa contendo bagaço de cana de açucar, farelo de trigo e resî'duos de viveiro de eucalipto como fonte de carbono. 0 farelo de trigo apresentou maior capacidade de induçao da produçao da lipase. Para produçao da enzima, o microrganismo foi cultivado por 168 boras a 28°C a 180 rpm. 0 sobrenadante da cultura foi fùtrado e submetido às cromatografias de interaçao hidrof6bica e troca iônica para purificaçao da enzima. Ao final do processo, a lipase apresentou um fator de purificaçao de 23,7 vezes e rendimento de 42,7%. A massa molecular da enzima foi estimada em 14,9 kDa por cromatografia de exclusao molecular. Atividades maximas foram detectadas em temperatura de 35°C e pH 9,0, sendo que a enzima manteve 75% de sua atividade inicial quando incubada a 400C por 12 boras e 40% quando incubada a 50 oc por 30 minutos. A atividade enzimatica foi totalmente inibida por HgC}z nas concentraçoes de 1 e 5 mM, e parcialmente inibidas por MnCh, ZnCh, CuSo4, NaCI, MgCh, EDTA e SDS na concentraçao de lmM, mantendo mais de 80% de atividade total. A estabilidade em solventes orgânicos foi estudada por incubaçao da enzima na presença dos solventes isopropanol, acetona, etanol, acetonitrila, hexano e metanol na concentraçao de 25% (v/v) durante12 boras a 25°C. A atividade enzimâtica foi maior na presença de isopropanol, mantendo também mais de 90% de sua atividade na presença de etanol e acetona. A especificidade por substratos sintéticos foi avaliada na presença dos ésteres de p-nitrofenol butirato (C4), Caprilato (C8), Decanoato (CIO), Laurato (Cl2), Miristato (Cl4) e Palmitato (Cl6). A lipase de C. pteridis LPF-59 apresentou maior capacidade de hidr6lise sobre o substrato p-nitrofenol caprilato. A lipase de C. pteridis apresentou capacidade de manter sua atividade enzimatica mesmo ap6s ser submetida a fervura. Diante desses resultados, a lipase de Cylindrocladium pteridis LPF-59 mostrou propriedades relevantes para possfveis aplicaçôes industriais, uma vez que sua atuaçao em baixas temperaturas e pH alcalino siio indicativos de possfveis aplicaçôes na fabricaçiio de detergentes.
Descrição
Palavras-chave
Lipase, Cylindrocladium pteris, Biotecnologia
Citação
OLIVEIRA, C. A. de . Produção, purificação e caracterização da lipase de Cylindrocltulium pteridis LPF-59. 2013. 48 f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia) - Universidade Federal de Ouro Preto, Ouro Preto, 2013.