Licnofolida livre e em formulações nanoméricas : toxicidade, atividade in vitro e in vivo contra Trypanosoma cruzi e proposta de mecanismo de ação.

Abstract

A doença de Chagas permanece epidemiologicamente relevante e é a sexta doença mais negligenciada do mundo, causando elevada morbidade e mortalidade em plena idade produtiva. O mais grave é a falta de terapia profilática e curativa adequada para esta enfermidade, sendo os únicos medicamentos atualmente utilizados o benznidazol (BZ) e nifurtimox (NIF). Estes fármacos causam graves efeitos colaterais e apresentam limitada eficácia terapêutica na fase crônica da doença, justificando a busca por novas opções terapêuticas. Este trabalho visou

avançar nos estudos da lactona sesquiterpênica licnofolida (LIC-livre) e em nanocápsulas (LIC- NC) avaliando a citotoxicidade in vitro células cardíacas H9c2 e hepáticas HepG2 pelos

métodos de vermelho neutro; sua interferência no ciclo celular e na produção de espécies reativas de oxigênio (EROs); genotoxicidade por ensaio cometa; fenômenos de apoptose e necrose; seletividade para T. cruzi em comparação à células H9c2; análise qualitativa da incorporação das NC fluorescente pelas células e parasitos na tentativa de explicar o mecanismo de ação de LIC-NC na infecção por T. cruzi; avaliar a toxicidade aguda in vivo da LIC-livre e LIC-NC; bem como sua eficácia terapêutica contra a cepa Colombiana de T. cruzi, protótipo de resistência ao tratamento por BZ e NIF. O tratamento com BZ foi utilizado como grupo controle de referência. No teste de vermelho neutro LIC-livre e LIC-NC apresentaram IC50 de 1,69μM e 3,28μM em células H9c2 e IC50 de 3,11μM e 3,69μM em células HepG2. Não foram observadas diferenças significativas entre as células na análise da evolução do ciclo celular, tampouco na comparação dos tratamentos com LIC-livre e LIC-NC. Verificou-se aumento nas fases sub-G1 e diminuição nas fases G2-M com ambas as formulações. Não foram observadas diferenças significativas nas análises de apoptose e necrose entre LIC-livre e LIC-NC. Em células H9c2, LIC-livre, LIC-NC, NC-BR e BZ aumentaram a produção de EROs. LIC-livre e BZ induziram aumento na intensidade da cauda nas células H9c2, diferentemente das células HepG2. Os testes em amastigota e epimastigota mostraram que LIC-livre possui maior ação tripanocida in vitro quando comparada à LIC-NC. LIC-NC foi incorporada tanto pelas células H9c2 não infectadas, quanto infectadas, e por tripomastigotas, mostrando boa entrega da formulação nos sítios de interesse. No teste de toxicidade aguda não foram observadas alterações significativas quanto aos parâmetros avaliados. LIC-NC curou 80% dos animais infectados com a cepa Colombiana, 100% resistente aos fármacos de referência, com negativação de todos os parâmetros avaliados (hemocultura, qPCR sanguínea e em tecido cardíaco após imunossupressão e ELISA). A licnofolida se mostrou eficaz em sua ação anti-T. cruzi in vitro e in vivo, na sua forma livre e nanoencapsulada, com diminuição da citotoxicidade quando encapsulada, e melhora significativa da sua ação tripanocida in vivo. LIC ainda se mostrou menos citotóxica em todos os parâmetros avaliados em relação ao grupo controle BZ. Ambas as formulações se mostraram seguras quanto ao uso em camundongos, principalmente a LIC-NC que foi também mais eficaz na cura da infecção por T. cruzi. Em conjunto, os resultados incentivam estudos complementares da LIC-NC como uma nova opção terapêutica a ser explorada e utilizada no tratamento da doença de Chagas.