Desenvolvimento de biossensor para detecção direta de Flavivirus utilizando nanobastões de ouro.
Data
2019
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Resumo
A co-circulação de Dengue virus, Zika virus, Yellow fever virus, Chikungunia virus e
Mayaro virus tem causado grande impacto na saúde pública brasileira e mundial. Os programas
de controle e prevenção de arboviroses e estudos epidemiológicos poderiam ser muito
beneficiados e aperfeiçoados com a utilização de metodologias de detecção direta dos vírus em
mosquitos, pois possibilitaria uma vigilância mais precisa nas populações de vetores ao longo do
tempo. Porém, os métodos de diagnósticos hoje disponíveis, apesar de possuírem alta
sensibilidade e especificidade são, em sua maioria, onerosos, demandam treinamento específico
para aplicação e interpretação e não provem um diagnóstico rápido. Neste contexto, o
desenvolvimento de novas tecnologias de biossensores que apresentem benefícios quanto ao
tempo de análise, sensibilidade e simplicidade de manipulação têm sido objeto de pesquisa nas
esferas pública e privada. A partir deste fato, este trabalho propõe desenvolver e analisar a
eficácia de metodologias de funcionalização de nanobastões de ouro (NBs) com anticorpos
específicos anti-DENV2 e anti-flavivirus para testar a capacidade de detecção de ligação
anticorpo-partícula viral. A detecção de biomoléculas ligadas às nanopartículas de ouro (AuNPs),
tais como proteínas e anticorpos, pode ser feita a partir da análise do seu espectro de absorção.
Para isso, nanobastões de ouro foram sintetizados, funcionalizados a 4 mM de polietilenoimina,
conjugados a 0,4 μg/mL de anticorpos e incubados com 103 UFP/mL de vírus. Os dados foram
obtidos através da leitura da ressonância plasmônica de superfície localizada em espectrômetro de
varredura UV-Vis. A síntese dos nanobastões, que utilizou o método de crescimento com
sementes com a utilização de diferentes agentes redutores, mostrou-se reprodutível. Além disso,
um deslocamento muito expressivo no pico de absorção foi observado quando biossensores
contendo anti-flavivirus foram incubados em solução com DENV2 e ZIKV, mas não foi
observado após incubação com MAYV, um Alphavirus utilizado como controle negativo. Como
esperado, nos biossensores contendo anti-DENV2 o deslocamento foi observado apenas na
presença de DENV2, demonstrando a especificidade dos anticorpos utilizados. Na presença de
soro humano diluído 1:3200 e macerado de mosquito diluído 8x, contendo DENV2 ou ZIKV, o
limite de detecção estimado foi de 100 UFP/mL. Assim, sugere-se que os nanobastões de ouro
apresentam potencial para o desenvolvimento de novas metodologias de diagnóstico mais rápidos,
precisos e práticos que as técnicas já existentes e viabilizar estudos de vigilância da virologia em
mosquitos.
Descrição
Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa de Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto.
Palavras-chave
Flavivirus, Ressonância de plasmônio de superfície, Nanotecnologia
Citação
RIBEIRO, Erica Milena de Castro. Desenvolvimento de biossensor para detecção direta de Flavivirus utilizando nanobastões de ouro. 2019. 115 f. Tese (Doutorado em Biotecnologia) - Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Universidade Federal de Ouro Preto, Ouro Preto, 2019.