Desenvolvimento e validação de métodos analíticos espectrométrico em plasma bovino para aplicação na confecção de dispositivos de liberação controlada de progesterona.

Abstract

A progesterona é um importante hormônio na reprodução de bovinos normalmente quantificado por radioimunoensaio. A cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massa é uma alternativa que tem sido usada com menor frequência, que elimina os riscos associados ao manuseio de material radioativo. No presente estudo foi desenvolvido e validado métodos de cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas para a determinação dos níveis de progesterona em plasma bovino e meio aceptor (etanol: água 62,5: 37,5 v/v), com acetado de medroxiprogesterona como padrão interno. E avaliouse a cinética de liberação de P4 incorporada em PCL. As amostras foram preparadas utilizando extração por precipitação proteica, e os extratos foram injetados diretamente no sistema cromatográfico. A separação cromatográfica foi realizada com pré-coluna Vanguard C18 e coluna BEH-C18 1,7µm e 100mm de comprimento usando metanol e gradiente de solução aquosa de ácido fórmico a 0,1% como fase móvel com taxa de fluxo de 0,3 ml / min. Utilizou-se fonte electrospray no modo positivo. Monitoramento de reação múltipla para o íon precursor quantificador de P4 (m / z 315) de m / z 97,0; e para IS (m / z 387,2) de m / z 327,0. Boa linearidade foi observada ao longo das faixas de concentração com uma regressão linear (1/x) nas duas matrizes. O método desenvolvido para matriz plasma bovino foi comparado com resultados de radioimunoensaio. As técnicas obtiveram alta correlação (i.e. 0,959) e não foi detectada diferença na média dos resultados comparando as duas técnicas de quanticação de progesterona (P <0,05). O método altamente seletivo proposto para quantificar P4 não requer derivatização de amostras, que é uma etapa corriqueira para a quantificação de hormônios esteróides. A cinética de liberação da P4 em PCL foi de 1ª ordem. Portanto, foi desenvolvido um método em CLUEEM/EM/ESI sensível, seletivo e reprodutível para quantificação de P4 em duas matrizes que é capaz de substituir o RIE. Também foi feito um piloto da liberação de P4 em PCL que pode servir como base para futuras etapas de desenvolvimento de dispositivos intravaginais de P4 com PCL.