PPCBIOL - Programa de Pós-graduação em Ciências Biológicas

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    Baccharis trimera inibe a produção de espécies reativas de oxigênio através da via de sinalização da PKC e NADPH oxidase em células SK Hep-1.
    (2015) Araújo, Glaucy Rodrigues de; Costa, Daniela Caldeira; Chaves, Míriam Martins
    Baccharis trimera, popularmente conhecida como "carqueja", é uma planta nativa sul-americana que possui uma alta concentração de compostos fenólicos e, portanto, alto potencial antioxidante. Apesar do potencial antioxidante de B. trimera descrito na literatura, não existem relatos sobre as vias de sinalização envolvidas neste processo. A enzima NADPH oxidase é uma fonte importante na produção de espécies reativas de oxigênio (ERO) em condições patológicas, como no câncer, no diabetes e em processos inflamatórios. Esta enzima é ativada por meio de diferentes moduladores, entre os quais destaca-se a proteína cinase C (PKC), que fosforila a subunidade p47phox da NADPH oxidase, como um contribuinte para a ativação do complexo enzimático e a consequente geração de ERO. Com base nestas informações, o objetivo do presente estudo foi avaliar a composição fitoquímica dos extratos aquoso e hidroetanólico de Baccharis trimera bem como a influência destes extratos na modulação de ERO e na via de sinalização da PKC e NADPH oxidase em células de hepatocarcinoma humano (SK Hep-1). No presente estudo, a quercetina e a rutina foram utilizadas como controles positivos, pois o efeito antioxidante destes flavonoides tem sido bem estabelecido, sendo estes compostos já identificados em extratos de B. trimera. No extrato hidroetanólico foram identificados cinco flavonoides enquanto no extrato aquoso foram identificados três flavonoides por CLAE-EM. A atividade antioxidante in vitro por DPPH também foi avaliada e os resultados demonstraram que o extrato hidroetanólico possui um maior potencial em sequestrar o radical DPPH bem como uma maior quantidade de compostos fenólicos em comparação ao extrato aquoso. Em relação à viabilidade celular, observamos que o extrato hidroetanólico de B. trimera manteve acima de 70% a porcentagem de células viáveis, entretanto em 24 e 48 horas de incubação houve uma redução da viabilidade (<70%) em concentrações iguais ou superiores a 25μgmL-1. Em relação ao extrato aquoso observamos que a porcentagem de células viáveis foi mantida acima de 70% em 12, 24 e 48 de incubação. Em relação a produção de espécies reativas foi observado que os extratos de B. trimera (aquoso e hidroetanólico) diminuíram os níveis de ERO em células SK Hep-1 não estimuladas. Níveis reduzidos de ERO também foram observados nas células tratadas com quercetina e rutina. Os resultados mostraram que as células estimuladas com PMA / ionomicina (ativadores de PKC) tiveram um aumento significativo na produção de ERO, e esta produção voltou aos níveis basais após tratamento com o DPI (inibidor da NADPH oxidase). O extrato hidroetanólico de B. trimera e quercetina, mas não o extrato aquoso e a rutina, modularam a produção de ERO através da inibição da expressão e atividade da proteína PKC e também através da redução da fosforilação da subunidade p47phox da enzima NADPH oxidase. Em conjunto, estes resultados sugerem um mecanismo potencial de ação de B. trimera na inibição da produção de ERO através da via de sinalização da PKC/NADPH oxidase.
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    Efeito antioxidante do captopril e a influência da via de sinalização de PKC na produção de EROS induzida por Bradicinina no modelo experimental de diabetes mellitus tipo 1.
    (Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto., 2011) Araújo, Glaucy Rodrigues de; Costa, Daniela Caldeira
    O diabetes é uma doença que acomete milhões de pessoas em todo o mundo e tem sido alvo de muitos estudos. As complicações no diabetes, como a cardiomiopatia e o estresse oxidativo aumentado são importantes focos de estudo e são responsáveis em grande parte pelo aumento na morbidade e mortalidade associado à doença. Drogas anti-hipertensivas, principalmente aquelas que bloqueiam o sistema renina-angiotensina, como o captopril, são utilizadas com freqüência para o tratamento de diabetes, contribuindo para minimizar as complicações diabéticas. A relação do diabetes e inflamação evidencia o importante papel dos mecanismos de defesa nessa patologia. Além disso, as vias de sinalização envolvidas no processo e ativação dos granulócitos no diabetes ainda não é bem esclarecida. Sabe-se que a via de proteína cinase C (PKC) tem um importante papel na ativação da NADPH oxidase nessas células. No presente estudo, utilizou-se ratas Fisher, não diabéticas ou diabéticas induzidas com estreptozotocina (STZ), para avaliar produção de espécies reativas de oxigênio (EROS) em granulócitos e parâmetros do estresse oxidativo no coração em um tratamento com duas doses de captopril (5mg/kg e 10mg/kg). Ainda foi avaliado a participação da via de (PKC) na produção de EROS induzido por bradicinina, em granulócitos de ratas Fisher não diabéticas e diabéticas. No primeiro ensaio in vivo, tratou-se os animais durante 10 dias, e nenhuma diferença foi observada na produção de EROS nos granulócitos desses animais. Um tratamento de 40 dias foi então realizado, onde avaliou-se a produção de EROS nos granulócitos e parâmetros do estresse oxidativo, como catalase, glutationa total, substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) e proteína carbonilada no coração destes animais. No tratamento de 40 dias, o captopril na dose 10mg/kg foi capaz de modular a produção de EROS nos granulócitos dos animais diabéticos. O captopril ainda foi capaz de reverter a atividade da enzima catalase e os níveis de proteína carbonilada no coração de animais diabéticos, apesar de não ter sido observado efeito significativo nos níveis de glutationa e TBARS. No ensaio in vitro os granulócitos de animais não diabéticos e diabéticos apresentaram uma maior produção de EROS quando estimulados com bradicinina. E somente nos animais diabéticos, houve a redução na produção de EROS quando os granulócitos foram pré-incubados com calfostim C (inibidor de PKC), mostrando a participação dessa via na ativação da produção de EROS induzido por bradicinina.Estes resultados analisados em conjunto sugerem que o captopril tem efeito antioxidante em granulócitos e no coração de animais diabéticos. Entretanto, parece que o efeito inibitório na produção de EROS em granulócitos de animais tratados com captopril (ensaio in vivo) não é mediado pela bradicinina (ensaio in vitro).