PPBIOTEC - Programa de Pós-graduação em Biotecnologia
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Resultados da Pesquisa
Item Funcionalização de nanobastões de ouro para diagnóstico da paracoccidioidomicose.(2017) Ferreira, Cyntia Silva; Silva, Breno de Mello; Silva, Breno de Mello; Carvalho, Andréa Teixeira de; Sousa, Edésia Martins Barros de; Santos, Orlando David Henrique dos; Cota, Renata Guerra de SáA paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose granulomatosa sistêmica causada por duas espécies de um fungo termodimórfico: Paracoccidioides brasiliensis e Paracoccidioides lutzii. A doença é endêmica na América Latina e está associada a fatores sociais e econômicos. Embora a maioria das formas clínicas seja assintomática, podem ocorrer infecções severas e progressivas, envolvendo o tecido pulmonar e até mesmo o sistema nervoso central. Desse modo, sem uma intervenção terapêutica específica, o quadro da maioria dos pacientes acaba evoluindo para o óbito. Apesar da relevância da doença, não existe ainda um diagnóstico rápido e preciso com custo apropriado para as áreas endêmicas. Nesse sentido, uma alternativa é representada pelo uso de nanobastões de ouro (AuNBs), os quais possuem uma forte absorção característica no espectro visível (ressonância de plasmon) que pode ser monitorada por espectrofotometria. Considerando o uso dos AuNBs como biosensores, os mesmos foram funcionalizados com ácido lipóico ou polietilenoimina (ligantes contendo grupos carboxílicos ou aminas livres que permitem a ligação com proteínas antigênicas ou imunoglobulinas, respectivamente). Tais conjugados foram testados na presença dos alvos purificados e também desafiados com soro de pacientes saudáveis e com paracoccidioidomicose comprovada, e soro de camundongos infectados. A ligação efetiva das biomoléculas em questão foi observada através do deslocamento do pico de absorção plasmônica longitudinal dos AuNBs, sendo satisfatórias quando empregadas as biomoléculas purificadas e quando desafiados com soro de camundongos infectados, para a detecção de antígenos. Esses resultados mostram que o sistema deve ser aprimorado para a detecção tanto de antígenos como de anticorpos em soro humano. O deslocamento observado para as biomoléculas purificadas e com o soro de camundongos pode justificar em parte, o sucesso do sistema de detecção proposto, já destacado pela literatura com outros tipos de biomoléculas, e coloca os AuNBs funcionalizados obtidos nesse trabalho como biosensores úteis para o estudo e desenvolvimento de novas abordagens de diagnóstico para a paracoccidioidomicose. Além disso, representa um avanço biotecnológico para o diagnóstico de doenças negligenciadas.Item Atividade anti-angiogênica de inibidores de tripsina em membrana corioalantóica de Gallus domesticus.(Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto., 2013) Ferreira, Cyntia Silva; Andrade, Milton Hércules Guerra deOs inibidores do tipo Bowman-Birk (BBI) são proteínas contendo dois domínios inibitórios distintos para enzimas tripsina- e quimotripsina-símile. Muitos trabalhos mostram o uso desses inibidores como agentes anti-cancerígenos, no entanto, estudos prévios do nosso laboratório revelaram uma biodistribuição limitada do BBI. Peptídeos sintéticos análogos aos domínios inibitórios do BBI também apresentaram baixa biodisponibilidade, possivelmente devido à degradação. Com o objetivo de construir inibidores mais estáveis foram adicionados motivos do tipo dedo de zinco – sequências de aminoácidos com reconhecida função estabilizadora. Esses inibidores (CPI- e HPI-trip, para tripsina e CPI- e HPI-quimo, para quimotripsina) foram comparados ao inibidor nativo e às suas respectivas alças de inibição YCT-trip e YCA-quimo. A estabilidade dessas espécies químicas foi testada do ponto de vista térmico, redutor e de resistência à hidrólise. Os peptídeos sintéticos contendo dedo de zinco mostraram comportamento similar aos inibidores convencionais. A atividade biológica dos inibidores foi avaliada no complexo proteolítico proteassoma 20S de Ratos Wistar e em membrana corioalantóica de Gallus gallus domesticus. Os inibidores de quimotripsina apresentaram atividade inibitória sobre o proteassoma 20S, mas não geraram alterações na membrana corioalantóica. Da mesma forma, os análogos contendo o motivo dedo de zinco apresentaram baixa atividade tanto no proteassoma quanto na membrana. Por outro lado, os inibidores de tripsina apresentaram atividade inibitória sobre o proteassoma e produziram respostas anti-angiogênicas na concentração de 100 nM, de maneira relacionada à atividade da pentamidina, – uma droga com elevada atividade anti-tripsina. Ao contrário da pentamidina, o inibidor Bowman-Birk é considerado isento de toxicidade em humanos, colocando essa classe de inibidores como potenciais drogas anti-angiogênicas.