Imunogenicidade de três frações antigênicas de Leishmania amazonensis como candidatos vacinais avaliados em hamster contra leishmaniose visceral.

Abstract

A Leishmaniose é um conjunto de síndromes complexas e multifacetadas causadas por espécies de protozoários do gênero Leishmania, sendo transmitida através da picada de flebotomíneos infectados. Endêmica em 88 países do mundo estima-se que cerca de 350 milhões de pessoas estão em risco de contrair a doença, e aproximadamente 12 a 14 milhões estão infectadas. Cerca de 500 mil pessoas desenvolvem a forma visceral da doença, sendo que 90% dos casos ocorrem na Índia, Bangladesh, Nepal, Sudão, e no Brasil. Diversos pesquisadores no mundo tem buscado respostas para a prevenção da leishmaniose visceral canina (LVC), através da caracterização de antígenos de espécies de Leishmania, já que o cão é considerado o reservatório doméstico do parasito e um importante elo na cadeia epidemiológica de transmissão da doença. Ainda não existe uma vacina que apresente eficácia vacinal compatível para o controle da LVC e que seja recomendada pelo Ministério da Saúde de nosso país como medida profilática da doença. Considerando o hamster amplamente utilizado como modelo experimental em ensaios vacinais com diversos protocolos anti-Leishmania, estabelecemos uma plataforma para testes rápidos in vivo buscando avaliar simultaneamente diferentes candidatos vacinais. Neste sentido, o presente projeto propôs a avaliação de um ensaio pré-clínico vacinal, em hamsters Mesocricetusauratus, considerando aspectos relacionados à inocuidade, toxicidade e imunogenicidade dos candidatos contra leishmaniose visceral, entre os quais: (i) grupo inoculado com salina 0,85% estéril, (ii) grupo inoculado com adjuvante saponina, (iii) grupo inoculado com antígeno bruto de Leishmania amazonensis(LA), (iv)grupo inoculado comantígeno solúvel de L. amazonensis(LASol), (v) grupo inoculado com antígeno particulado de L. amazonensis (LAPart), (vi) grupo inoculado com antígeno bruto de L. amazonensis associado a saponina (LASap), (vii) grupo inoculado com antígeno solúvel de L. amazonensis associado a saponina (LASapSol)e (viii)grupo inoculado comantígeno particulado de L. amazonensis associado a saponina (LASapPart). Os resultados mostraram que nenhuma das formulações vacinais induziu alterações no local do inóculo ou alterações sistêmicas avaliadas pela inspeção clínica e pelo hemograma. Deste modo, ficou constatado que as diferentes formulações vacinais não induziram hemólise ou anemia nos diferentes grupos avaliados. A análise do leucograma revelou linfocitose restrita apenas aos grupos que receberam antígenos vacinais associados ou não ao adjuvante saponina. De forma semelhante, a análise de antigenicidade revelou aumento dos níveis de IgG total anti-Leishmania, acima do cut-off, nos mesmos grupos que apresentaram linfocitose. A análise do immunoblotting, realizada nas formulações em que foi associado antígeno ao adjuvante saponina (LASap, LASapSol, LASapPart), demonstrou a presença de três bandas imunogênicas com peso molecular próximas de 40 kDa, 30 kDa e bandas entre 20 e 30 kDa. As proteínas encontradas nesse trabalho abrem perspectivas para a análise de novas formulações vacinais contra a leishmaniose visceral.