Propriedades biológicas fundamentais de diferentes grupos genéticos do Trypanosoma cruzi, e avaliação inicial da investigação da expressão diferencial de proteínas associadas aos grupos genéticos TcI e TcII.

Abstract

A Doença de Chagas (DCh) tem como agente etiológico o protozoário hemoflagelado Trypanosoma cruzi que apresenta grande diversidade genética, que por sua vez apresenta-se relacionada à diversidade biológica da espécie. Diversas estudo foram conduzidos ao longo do tempo, na tentativa de relacionar a variabilidade genética do T. cruzi com seus parâmetros biológicos resistência ao tratamento e as diferentes manifestações clínicas da DCh, mas até o presente momento sem sucesso. Sabendo-se da importância e necessidade de busca de novos alvos que possam responder a essas questões, a proposta desse projeto foi avaliar os parâmetros biológicos principais de seis amostras do T. cruzi, pertencentes a grupos genéticos distintos (TcI, TcII e TcVI), isoladas de pacientes chagásicos crônicos, apresentando formas clínicas distintas da DCh. Foram utilizadas ferramentas proteômicas para determinar o proteoma diferencial de duas amostras do T. cruzi (TcI e TcII) para verificar se há correlação entre o perfil proteico com os parâmetros biológicos, evolução da infecção em modelo murino e as formas clínicas da doença humana. Este trabalho avaliou ainda a biologia de todas as seis amostras em meio acelular (LIT), em células “Vero” e camundongos Swiss. Neste modelo animal foi também avaliada a resposta ao tratamento com o Nifurtimox nas fases aguda e crônica da infecção. O conjunto de dados biológicos tais como crescimento em meio acelular, infecção em meio celular e desenvolvimento da infecção em modelo murino, obtidos de cada amostra de T. cruzi revelou diferenças significativas entre os genótipos. Em relação à resposta ao tratamento etiológico, o critério de cura clássico (ELISA negativa), demonstrou cura em apenas 6,25% dos animais infectados e tratados na fase aguda (ITFA). Em contrapartida, quando foi adotado um critério mais recente (CF-AATV negativa), o índice de cura foi 10 vezes maior (62.5%), e os mesmos animais considerados curados por este segundo critério foram também negativos na qPCR em tecido cardíaco. Na fase crônica, nenhuma amostra foi curada considerando ambos os critérios de cura, e a qPCR no coração também foi positiva em todos os animais, confirmando a conhecida dificuldade de curar infecções crônicas. Os dados obtidos da proteômica das duas cepas (TcI e TcII) a partir das formas epimastigotas, demonstraram diferenças significativas na expressão diferencial de proteínas, principalmente em relação ao grupo proteico com função de resposta ao estresse. Dessa forma, pode-se cloncuir com esse trabalho, que a hipótese de correlação entre genética do T. cruzi com a biologia das amostras foi confirmada, e que é importante adotar metodologias mais atuais que antecipam a demonstração da cura parasitológica da DCh. Esse trabalho demonstrou ainda a importância de busca de alvos diferencialmente expressos no parasita que sirvam como marcadores de prognóstico da infecção experimental e da DCh humana.