Peptídeos ligantes de células tumorais e de imunoglobulinas g específicos do câncer de mama.

Abstract

Até o momento, não existem biomoleculares que sejam efetivamente utilizados no diagnóstico do câncer de mama. Uma alternativa para auxiliar a busca por marcadores moleculares é baseada na seleção de ligantes de alta afinidade por meio de Phage Display (PD). O principal objetivo desta tese foi o desenvolvimento de novos biomarcadores envolvidos no câncer de mama selecionados contra uma linhagem celular tumoral altamente agressiva e contra IgG purificada específica de tecido mamário de pacientes. Após a seleção PD em biblioteca aleatória de peptídeos, todos os clones imunorreativos foram caracterizados por sequenciamento, deduzidos in vitro e submetidos a análises in silico. Validações posteriores foram conduzidas com ELISA e análise histopatológica. Apesar de terem sido relatadas diversas variações da metodologia, a maior parte dos processos de seleção usou ligantes obtidos depois de três ciclos de seleção. Os marcadores relatados na literatura foram pouco explorados devido à complexidade dos processos de validação. Este trabalho demonstrou que as seleções do primeiro e segundo ciclos são viáveis e podem ser utilizadas para aumentar o número de potenciais marcadores a serem testados. Os resultados com linhagem de células tumorais identificaram três potenciais marcadores no terceiro ciclo de seleção, dos quais foi selecionado aquele com melhor relação de absorbância tumor/controle no ELISA para síntese química. O peptídeo sintético foi associado com uma marcação menos intensa em tumores triplo negativos (Receptor de Estrógeno, Receptor de Progesterona e ErbB2). Outros peptídeos do segundo ciclo também demonstraram especificidade a tecidos tumorais. Para a estratégia de mapeamento de antígenos contra IgG purificada específica de tecido mamário, um peptídeo (F4) pode reconhecer tanto tecidos tumorais de mama quanto IgG circulante. Ambos clone F4 e peptídeo sintético SF4 alcançaram diagnóstico de alta acurácia, mas surpreendentemente, o clone F4 apresentou a melhor sensibilidade e especificidade (77,8% e 85,7%, respectivamente), sugerindo que pode ser utilizado no diagnóstico para triagem precoce de câncer de mama, anterior às análises por imagem e patológicas. A identificação e caracterização do biomarcador putativo está em investigação por meio de seleção combinatorial de anticorpos scFv contra o fago F4 e o peptídeo SF4, os quais serão utilizados para captura imunológica do antígeno verdadeiro e para análise por espectrometria de massas. Um sensor eletroquímico de baixo custo utilizando o peptídeo SF4 também foi desenvolvido.