Avaliação de proteção heteróloga utilizando proteínas recombinantes de Leishmania braziliensis contra a Leishmaniose visceral.

dc.contributor.advisorRoatt, Bruno Mendespt_BR
dc.contributor.authorSilva, Felipe Oliveira da
dc.contributor.refereeRoatt, Bruno Mendespt_BR
dc.contributor.refereeCosta, Guilherme de Paulapt_BR
dc.contributor.refereeBrito, Rory Cristiane Fortes dept_BR
dc.date.accessioned2024-03-08T21:51:39Z
dc.date.available2024-03-08T21:51:39Z
dc.date.issued2023pt_BR
dc.descriptionPrograma de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa de Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto.pt_BR
dc.description.abstractA leishmaniose visceral é considerada a forma mais grave dentre as formas clínicas das leishmanioses e até o momento não há uma vacina que possa ser empregada em campanhas de controle e profilaxia dessa doença. Por isso, se torna necessário um estudo aprofundado no ramo da vacinologia para encontrar possíveis candidatos vacinais que evidenciem imunogenicidade e eficácia. As vacinas atuais com maior potencial imunogênico têm origem de proteínas recombinantes, e sua aplicação tem demonstrado uma eficácia quando analisadas em modelos experimentais murinos. Neste contexto, as proteínas Enolase e Hipotética (rLbHyp) foram avaliadas em camundongos e demonstraram potencial imunogênico com uma baixa carga parasitária quando analisado os órgãos que mais são acometidos pela LV (baço, fígado e medula óssea). Dessa forma, ensaios em modelo hamster (Mesocricetus auratus), são indicados e podem contribuir para uma melhor avaliação destas proteínas visto que este modelo apresenta diversas características da doença quando comparados cães e humanos. O objetivo deste estudo foi então avaliar a eficácia de imunização através de uma vacina composta por proteínas recombinantes de Leishmania braziliensis contra a Leishmaniose visceral experimental em modelo hamster Mesocricetus auratus. Para isto, hamsters foram divididos em oito grupos experimentais sendo estes: animais não imunizados (CI), imunizados com saponina (Sap), proteína hipotética (Hip), proteína enolase (Eno), combinação proteína hipotética e enolase (Hip + Eno), imunizados com proteína hipotética + saponina (Vac Hip), proteína enolase + saponina (Vac Eno), e combinação proteína hipotética e enolase + saponina (Vac Hip + Eno). Os animais receberam três doses de imunização, tendo um intervalo de 21 dias entre elas. Logo após a última dose, foram esperados mais 30 dias para a realização do desafio experimental, sendo um inóculo de 2x107 promastigotas de L. infantum pela via intraperitoneal. Logo após, esperou-se 60 dias para realizar a eutanásia desses animais e amostras de sangue, soro, fragmentos do baço foram obtidos para a realização de diferentes análises laboratoriais através de análises hematológicas, imunológicas e parasitológicas. Em relação aos parâmetros hematológicos, leucograma, eritograma e plaquetas, foram observados padrões normais, principalmente nos grupos imunizados com as composições vacinais completas (Vac Hip, Vac Eno e Vac Hip+Eno). A resposta celular nos mostrou uma elevação nas células CD4+ produtoras das citocinas IFN- e TNF e uma redução nos níveis de IL-10 nos grupos imunizados. A análise macroscópica do baço demonstrou uma esplenomegalia nos grupos CI e Sap comparados aos outros grupos experimentais. Estes resultados foram associados aos dados de carga parasitária onde observamos uma redução do parasitismo hepato-esplênicos principalmente nos grupos com as composições vacinais completas. Em vista disso, os resultados apresentados demonstram uma imunogenicidade importante desencadeada principalmente nos grupos imunizados com as composições vacinais completas, mostrando a relevância vacinal das duas proteínas em um modelo de susceptibilidade na LV.pt_BR
dc.description.abstractenVisceral leishmaniasis is considered the most serious form of the clinical forms of leishmaniasis and to date there is no vaccine that can be used in control and prophylaxis campaigns for this disease. Therefore, an in-depth study in the field of vaccinology is necessary to find possible vaccine candidates that demonstrate immunogenicity and efficacy. Current vaccines with greater immunogenic potential originate from recombinant proteins, and their application has demonstrated efficacy when analyzed in murine experimental models. In this context, the Enolase and Hypothetical proteins (rLbHyp) were evaluated in mice and demonstrated immunogenic potential with a low parasitic load when analyzing the organs that are most affected by VL (spleen, liver and bone marrow). Therefore, tests on a hamster model (Mesocricetus auratus) are recommended and can contribute to a better evaluation of these proteins, as this model presents different characteristics of the disease when compared to dogs and humans. The objective of this study was to evaluate the efficacy of immunization using a vaccine composed of recombinant proteins from Leishmania braziliensis against experimental visceral Leishmaniasis in the Mesocricetus auratus hamster model. For this, hamsters were divided into eight experimental groups: non-immunized animals (CI), immunized with saponin (Sap), hypothetical protein (Hip), enolase protein (Eno), hypothetical protein and enolase combination (Hip + Eno), immunized with hypothetical protein + saponin (Vac Hip), enolase protein + saponin (Vac Eno), and hypothetical protein and enolase + saponin combination (Vac Hip + Eno). The animals received three doses of immunization, with an interval of 21 days between them. Immediately after the last dose, another 30 days were waited to carry out the experimental challenge, with an inoculum of 2x107 L. infantum promastigotes via the intraperitoneal route. Soon after, 60 days were waited to euthanize these animals and samples of blood, serum, spleen fragments were obtained to carry out different laboratory analyzes through hematological, immunological and parasitological analyses. In relation to hematological parameters, white blood cell count, erythrocyte count and platelets, normal patterns were observed, mainly in the groups immunized with the complete vaccine compositions (Vac Hip, Vac Eno and Vac Hip+Eno). The cellular response showed us an increase in CD4+ cells producing the cytokines IFN- and TNF and a reduction in IL-10 levels in the immunized groups. Macroscopic analysis of the spleen demonstrated splenomegaly in the CI and Sap groups compared to the other experimental groups. These results were associated with parasite load data where we observed a reduction in hepatosplenic parasitism, mainly in groups with complete vaccine compositions. In view of this, the results presented demonstrate an important immunogenicity triggered mainly in the groups immunized with the complete vaccine compositions, showing the vaccine relevance of the two proteins in a VL susceptibility model.pt_BR
dc.identifier.citationSILVA, Felipe Oliveira da. Avaliação de proteção heteróloga utilizando proteínas recombinantes de Leishmania braziliensis contra a Leishmaniose visceral. 2023. 77 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Universidade Federal de Ouro Preto, Ouro Preto, 2023.pt_BR
dc.identifier.urihttp://www.repositorio.ufop.br/jspui/handle/123456789/18113
dc.language.isopt_BRpt_BR
dc.rightsabertopt_BR
dc.rights.licenseAutorização concedida ao Repositório Institucional da UFOP pelo(a) autor(a) em 28/02/2024 com as seguintes condições: disponível sob Licença Creative Commons 4.0 que permite copiar, distribuir e transmitir o trabalho, desde que sejam citados o autor e o licenciante.pt_BR
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0/us/*
dc.subjectImunizaçãopt_BR
dc.subjectLeishmania braziliensispt_BR
dc.subjectProteínaspt_BR
dc.subjectLeishmaniose visceralpt_BR
dc.titleAvaliação de proteção heteróloga utilizando proteínas recombinantes de Leishmania braziliensis contra a Leishmaniose visceral.pt_BR
dc.typeDissertacaopt_BR

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