A contribuição de sistemas de associação de adjuvantes no aumento da eficácia vacinal de dois novos imunobiológicos contra a infecção experimental por Leishmania infantum em camundongos Balb/c.

Abstract

A leishmaniose visceral humana (LVH) e a leishmaniose visceral canina (LVC) são as mais relevantes doenças emergentes com alta prevalência na América Latina, sobretudo no Brasil. Apesar disso, ainda são limitados os avanços obtidos tanto no tratamento da doença quanto no desenvolvimento de vacinas com intuito de conter sua expansão. Em se tratando da busca por vacinas mais eficazes, os adjuvantes vacinais surgem como aditivos importantes, capazes de aumentar a imunogenicidade do antígeno ao induzir uma resposta imune intensa e prolongada. Novas abordagens têm testado sistemas de duas ou mais associações de adjuvantes na busca por uma resposta mais rápida e efetiva em comparação ao emprego dos adjuvantes isolados. Dessa forma, o objetivo desta tese foi avaliar a contribuição de sistemas de associação de adjuvantes no aumento da eficácia vacinal de novos imunobiológicos contra a infecção experimental por L.infantum em camundongos Balb/c. Para tanto, o estudo foi dividido em duas estapas. Primeiro, avaliamos os adjuvantes Saponina (SAP), Resiquimod (R-848) e Monofosforil Lipídio A (MPL) combinados em sistemas de associação duplas e tripla, nas doses de 25%, 33% e 50% referente a dose total de cada adjuvante, a fim de estabelecer o melhor sistema bem como sua dose ideal. Animais inoculados com solução salina foram utilizados como grupo controle e todos experimentos foram conduzidos em duplicata. Os animais foram divididos em 16 grupos experimentais (n=6/grupo), Controle Salina (CS), Saponina (SAP), Monofosforil Lipídio A (MPL), Resquimod (R-848), e as associações SAP+MPL (SM), SAP+R-848 (SR), MPL+R-848 (MR) e SAP+MPL+R-848 (SMR), nas doses supracitadas. Os animais receberam uma dose única pela via intradérmica e passadas 48 horas foram eutanasiados para obtenção do fragmento de pele do local do inóculo. Metade do fragmento foi destinado para dosagem de quimiocinas (CCL2, CCL3, CCL4, CCL5 e CXCL1) e citocinas (IL-2, IFN-, TNF-, IL-4 e IL-10) por Cytometric Bead Array (CBA) e a outra metade para avaliações histológicas. Dentre todos os sistemas avaliados, SM50 levou ao aumento da produção de todas as quimiocinas e da citocina TNF-, enquanto SMR50 aumentou os níveis das quimiocinas CXCL1, CCL2 e CCL5 e citocinas TNF- e IFN- quando comparadas ao grupo controle. Além disso, SM50 apresentou aumento do infiltrado inflamatório, com aumento do percentual da população de macrófagos, enquanto que SMR50 também apresentou aumento no percentual de macrófagos. Após estes resultados, ambos os sistemas foram escolhidos para serem associados com o antígeno total de Leishmania braziliensis para compor duas novas vacinas na etapa 2, nas quais foi avaliado o efeito do sistema de associação de adjuvantes sobre a imunogenicidade e eficácia vacinal. Camundongos Balb/c foram divididos em 6 grupos experimentais (n=5/grupo), Controle Salina (CS), grupo imunizado com antígeno total de L. braziliensis (LB), os sistemas de associação dupla e tripla de adjuvantes, SAP+MPL e SAP+MPL+R-848, ambos nas doses de 50%, e outros dois grupos que combinavam o antígeno total de L. braziliensis com os sistemas de associação de adjuvantes (LBSM50 e LBSMR50). Esses foram imunizados com três doses, com intervalo de 15 dias entre as doses, e desafiados com 1 x 107 promastigotas de L. infantum. Após 28 dias, os animais foram necropsiados, o baço foi coletado para avaliar a proliferação celular, produção de IL-2, TNF- e INF-, formação de células T de memória efetora e central, além da avaliação da carga parasitária tanto no baço quanto no fígado. Observou-se que o sistema LBSMR50 promoveu aumento na produção de TNF- por células TCD4+, entretanto sua principal ação foi sobre células TCD8+, promovendo aumento da proliferação celular, produção de TNF- e formação de células de memória efetora. Todavia, ambas as vacinas foram capazes de reduzir a carga parasitária no fígado. Diante do exposto, concluímos que o emprego de sistemas de adjuvantes utilizando doses reduzidas induzem uma resposta eficaz, pois uma vez que combinados com o antígeno promoveram não apenas ativação do sistema imune no baço como também a redução da carga parasitária no fígado, sugerindo que o uso desses sistemas aumentaram a eficácia vacinal no modelo murino.