A variação da temperatura como pista ambiental na expressão temporal de genes em cardiomiócitos de camundongos neonatos.

Abstract

O trabalho teve como objetivo analisar a expressão temporal medida em um período de 24 h de genes do relógio (Bmal1 e Per1), opsinas (Opn2, Opn3 e Opn4), canais TRP (Trpa1, Trpv1 e Trpm8) e receptores natriuréticos (Npra, Nprb e Nprc) em cultura primária de cardiomiócitos de camundongos neonatos C57BL/6J, mantidos em escuridão constante. As células foram lisadas imediatamente após estímulo de pulso de frio de 2 h de duração (zeitgeber ou ZT0) e 6 h (ZT6), 12 h (ZT12) e 18 h (ZT18) após o estímulo. Para quantificar os níveis de mRNA dos genes selecionados, foi realizada técnica de qPCR seguida da análise pelo método de quantificação relativa da expressão gênica (ΔΔCT). Os genes alvos foram normalizados pelo RNA ribossômico 18S. Os dados foram apresentados como média e erro padrão da média utilizando-se o teste ANOVA Two-way seguido pelo pós-teste Bonferroni para comparação entre os grupos, e One-way seguido pelo pós-teste de Tukey para comparação intragrupo. Destaca-se aqui que para os genes Trpm8 e Nprb o pulso de frio ocasionou aumento nos níveis de expressão gênica no tempo ZT18 para ambos os genes entre os grupos e uma maior expressão no ZT12 para o gene Nprb. A comparação intragrupo para ambos os genes apresentou maior expressão no ZT18 em relação ao ZT0, ZT6 e ZT12 no grupo tratado. Quanto ao perfil temporal da Opn2, houve maior expressão intragrupo no ZT6 do grupo controle em relação ao ZT0, ZT12 e ZT18, e maior expressão no ZT18 em relação ao controle. Para os genes do relógio, a expressão gênica de Bmal1 apresentou maior expressão intragrupo no ZT6 em relação ao ZT18 no grupo controle e no ZT18 em relação ao ZT0 no grupo tratado, houve aumento da expressão entre grupos no ZT18 em relação ao controle. Já para o gene Per1 observamos um aumento intragrupo no ZT6 em ralação ao ZT0 e ZT12 apenas no grupo controle, e aumento da expressão entre grupos no ZT18 em relação ao controle. Não observamos diferença estatisticamente significativa para a expressão gênica de Npra e Nprc para a análise intragrupo, mas houve aumento da expressão entre grupos no ZT18 em relação ao controle para o gene Nprc. Não houve detecção da expressão dos genes Trpa1, Trpv1, Opn3 e Opn4. Por fim, relatamos que o pulso de frio foi capaz de aumentar os níveis de expressão gênica da maior parte dos genes analisados, indicando que o estímulo foi captado pelas células. Embora não tenhamos observado expressão cíclica dos genes ligados ao relógio biológico, observamos que o pulso de frio foi capaz de alterar os níveis de expressão similarmente entre os genes Trpm8 e Nprb. Conclui-se que os cardiomiócitos são responsivos ao pulso de frio em nível de expressão gênica.