EFAR - Escola de Farmácia

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O curso de Farmácia em Ouro Preto foi criado em 1839, sendo a mais antiga Escola de Farmácia da América Latina.

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Estudo fitoquímico e atividades biólogicas de extratos etanólicos especiés Nectandra nitidula, Curatella americana e Albizia niopoides.
(2019) Lima, Lienne D’Auria; Brandão, Geraldo Célio; Teixeira, Luiz Fernando de Medeiros; Magalhães, José Carlos de; Santos, Orlando David Henrique dos; Brandão, Geraldo Célio
Foi realizada uma triagem fitoquímica preliminar de extratos das espécies Curatella americana, Nectandra nitidula e Albizia niopoides ocorrentes no estado de Minas Gerais. Os extratos foram preparados via percolação exaustiva a frio com etanol (92,8o GL), os principais metabólitos secundários foram identificados por cromatografia em camada delgada comparando-se com amostras de referência, e pela técnica de cromatografia líquida de ultra eficiência acoplada a ultravioleta, espectrometria de massa (CLUE-UV-EM) e espectrometria de massa sequencial (EMEM). Os principais constituintes identificados foram flavonoides da classe flavonol para a espécie Curatella americana e alcaloides da espermidina para a espécie Albizia niopoides. O extrato de folhas de C. americana foi submetido a um fracionamento por partição líquido-líquido, utilizando solventes de polaridade crescente. A fração em acetato de etila foi refracionada por cromatografia de exclusão molecular utilizando resina de Sephadex LH-20, e por cromatografia em coluna de sílica gel de fase reversa ligada a octadecilsilano (C18), e obteve dois sólidos isolados denominados CAFAE-1 e CAFAE-2. Neste trabalho foram realizados ensaios que permitiram a avaliação da atividade citotóxica, anti-Zika vírus, antibacteriana e anti-Trypanosoma cruzi dos diferentes extratos. O extrato de folhas de C. Americana mostrou-se moderamente citotóxico, mas com atividade significativa contra o Zika vírus, com CE50 de 85,23 μg/mL (IS = 2,56). Adicionalmente, a fração acetato de etila também apresentou forte atividade contra o Zika vírus com CE50 de 40,72 μg/mL (IS = 1,38), enquanto que somente a CAFAE-1 mostrou atividade contra o Zika vírus com CE50 de 152,8 μg/mL (IS = 2,0). A espécie N. nitidula revelou-se moderadamente citotóxica e foi ativa contra o Zika vírus com CE50 104,2 μg/mL (IS = 1,38), além disso, apresentou atividade antibacteriana contra Staphylococcus spp. O extrato de caules da espécie A. niopoides mostrou-se moderamente citotóxico para linhagens de células Vero e MRC-5 com CC50 de 62,22 e 30,54 μg/mL, respectivamente. Adicionalmente, este extrato apresentou uma atividade antibacteriana significativa contra a maioria das bactérias Gram-positivas e negativas testadas. Já o extrato de folhas dessa espécie demonstrou ausência de citotoxicidade e foi o mais ativo contra as formas amastigotas de T. cruzi, demonstrando 85% de inibição desses parasitos (IS = 2,65). Portanto, conclui-se que os constituintes de média polaridade podem ser os responsáveis pela atividade anti-Zika vírus observada e que os alcaloides da espermidina podem ser os responsáveis pelas atividades biológicas observadas para a espécie Albizia niopoides.
Avaliação da atividade anti-Trypanosoma cruzi in vitro e in vivo do composto silibinina isolado e associado ao benznidazol.
(2019) Torchelsen, Fernanda Karoline Vieira da Silva; Lana, Marta de; Silva, Glenda Nicioli da; Murta, Silvane Maria Fonseca; Brandão, Geraldo Célio; Lana, Marta de
A doença de Chagas (DC) é uma doença parasitária endêmica na América Latina e encontrada em diversos países no mundo. Seu tratamento é feito com o benznidazol (BZ) e o nifurtimox (NF), ambos fármacos com baixa eficácia terapêutica na maoria dos pacientes em fase crônica tardia da DC, e que causam vários efeitos colaterais. A busca por novos fármacos para a DC é estimulada entre produtos naturais e em estratégias como associação de fármacos. A silibinina (SLB) é um composto natural capaz de inibir a proteína de efluxo (Pgp) nas membranas celulares, induzir a morte de microrganismos, além de possuir atividade anti-inflamatória. Ainda não há na literatura relato de sua atividade em T. cruzi. Neste trabalho foi avaliada a atividade in vitro e in vivo de SLB e de SLB associada a BZ (SLB+BZ) frente a cepa Y de T. cruzi. Foi realizado ensaio de citotoxicidade pelo método de MTT em células VERO (24h), que revelou IC50 de 250,22 µM para a SLB. A atividade tripanocida avaliada por método com resazurina em epimastigotas (24h) mostrou que a SLB 25 µM inibiu o crescimento dos parasitos. O ensaio em amastigotas revelou índice de seletividade de 3,13, além de mostrar a maior porcentagem de inibição (> 90%) quando a SLB foi usada na associação de SLB100+BZ10µM, em comparação com SLB (100; 25; 6,25 µM) ou BZ (10; 5; 2,5 µM) isolados. No ensaio in vivo, camundongos Swiss comprovadamente infectados IP com 10.000 tripomastigotas sanguíneos foram tratados por via oral por 20 dias consecutivos com SLB50, SLB150, SLB50+BZ25, SLB50+BZ50, SLB50+BZ100, SLB150+BZ25, SLB150+BZ50, SLB150+BZ100, BZ25, BZ50 e BZ100 mg/kg/dia. Os animais foram avaliados diariamente na fase aguda (parasitemia) e aos 90, 180 e 240 dias após tratamento por hemocultura, qPCR de eluato sanguíneo e sorologia (ELISA). Após a eutanásia, foram feitas, além das avaliações anteriores, a qPCR do tecido cardíaco. Os resultados in vivo demonstraram que a SLB em monoterapia não foi capaz de controlar a parasitemia e a mortalidade dos animais. As avaliações parasitológicas mostraram 100% de negatividade na maioria dos grupos de animais tratados com combinação de drogas ou doses menores de BZ, enquanto a sorologia foi positiva em todos os animais não sendo constatada cura pelo critério clássico. Entretanto verificamos que os grupos experimentais tratados com BZ em menores doses e que os tratados com BZ em menores doses quando associado a SLB apresentaram maior negatividade nos exames parasitológicos, porém sem diferenças significativas entre os demais grupos. Análise histopatológica cardíaca será feita para avaliar se houve redução da inflamação/fibrose entre os grupos tratados com a associação SLB+BZ versus BZ.
Avaliação anti-Trypanosoma cruzi in vitro e in vivo de lactona sesquiterpênica isolada de Lychnophora passerina.
(2018) Milagre, Matheus Marques; Lana, Marta de; Guimarães, Dênia Antunes Saúde; Alves, Tânia Maria de Almeida; Vieira Filho, Sidney Augusto; Lana, Marta de
Atualmente, a única droga disponível para tratar a DCh no Brasil é o benznidazol (BZ), que apresenta várias limitações e efeitos adversos, dessa forma estimulando a busca por novas opções terapêuticas. Assim, este projeto visa o uso em solução da lactona sesquiterpênica goyazensolida (GZL), previamente ativa contra o Trypanosoma cruzi in vitro, com os seguintes objetivos: (1) Determinar o limiar de citotoxicidade in vitro sobre células de mamíferos (H9c2) e avaliar sua atividade tripanocida contra amastigotas, estabelecendo seu índice de seletividade; (2) Avaliar os sinais de toxicidade aguda in vivo e sua atividade frente à infecção experimental de T. cruzi em modelo murino. Para avaliar a citotoxicidade foram realizados os testes MTT e Vermelho Neutro (VN) e, para verificar a atividade da GZL contra o T. cruzi, células H9c2 foram infectadas com um isolado resistente da cepa Y de T. cruzi e tratadas durante 24 e 48h. Na avaliação da toxicidade aguda in vivo, foi determinada a dose máxima tolerada, feito o hemograma e dosagem de parâmetros bioquímicos para avaliação da toxicidade hepática e renal. Para avaliar a atividade terapêutica da GZL, camundongos Swiss infectados com as cepas Y e CL de T. cruzi foram tratados pelas vias oral e intravenosa (IV) por 20 dias consecutivos nas doses de 1, 5 e 25 mg/kg/dia [via oral e IV, cepa Y (isolado resistente ao BZ) e CL (sensível ao BZ)] e 1, 3 e 9 mg/kg/dia IV (cepa CL), paralelamente a grupos controles BZ 100mg/kg/dia e infectado não tratados (INT). A parasitemia dos animais foi avaliada diariamente até consistente negativação. A ação do tratamento foi avaliada ainda por exames parasitológicos (hemocultura e PCR) e sorológico (ELISA). Os resultados obtidos revelaram a citotoxicidade in vitro da GZL em concentrações acima de 250 ng/mL nos tratamentos de 24 e 48h avaliadas pelos testes MTT e VN, sendo o índice de seletividade em 24h de 351 calculado a partir da relação dos parâmetros de MTT e do teste de ação tripanocida da GZL in vitro. Houve discreta nefrotoxicidade revelada pelo aumento de creatinina observado nos animais tratados com GZL 25 mg/kg IV em relação ao grupo CNT. Na avaliação pós-tratamento em animais infectados pela cepa Y, foi observada uma diminuição significativa da parasitemia a partir do 5º dia de tratamento com GZL nas doses de 1,0 mg/kg/dia (IV e oral) e 5,0 mg/kg/dia, via oral e BZ 100 mg/kg/dia, quando comparados ao grupo controle INT. As taxas de sobrevivência dos camundongos tratados com GZL foram de 100% na dose de 5,0 mg/kg/dia oral, seguidos dos tratados com 1,0 mg/kg/dia IV e BZ 100 mg/kg/dia oral, que foram de 87,5%, enquanto o grupo controle INT apresentou 25% de sobrevida. Nenhum dos camundongos foram considerados curados segundo o critério de cura adotado (MS, 2016). Os animais infectados pela cepa CL e tratados com GZL demonstraram no 180º dia pós-tratamento uma diminuição significativa da parasitemia a partir do primeiro dia do PP em relação ao grupo INT, porém inferior ao observado no grupo tratado com BZ. A maioria dos grupos tratados não apresentou 100% de negatividade na HC e PCR simultaneamente, entretanto o grupo tratado com BZ apresentou 57,1% de cura com sobrevida de 87,5%, seguido por GZL 3 mg/kg/dia IV que curou 12,5% dos animais com sobrevida de 100%. Este resultado, em particular, aliado aos demais, representam uma boa perspectiva do uso da GZL para o tratamento da DCh a ser explorada.
Pharmacokinetic and tissue distribution of benznidazole after oral administration in mice.
(2017) Melo, Luísa Helena Perin de; Silva, Rodrigo Moreira da; Fonseca, Kátia da Silva; Cardoso, Jamille Mirelle de Oliveira; Mathias, Fernando Augusto Siqueira; Reis, Levi Eduardo Soares; Molina, Israel; Oliveira, Rodrigo Corrêa de; Vieira, Paula Melo de Abreu; Carneiro, Cláudia Martins
Specific chemotherapy using benznidazole (BNZ) for Chagas disease during the chronic stage is controversial due to its limited efficacy and toxic effects. Although BNZ has been used to treat Chagas disease since the 1970s, few studies about the biodistribution of this drug exist. In this study, BNZ tissue biodistribution in a murine model and its pharmacokinetic profile in plasma were monitored. A bioanalytical high-performance liquid chromatography method with a UV detector (HPLC-UV) was developed and validated according to the European Medicines Agency for quantification of BNZ in organs and plasma samples prepared by liquidliquid extraction using ethyl acetate. The developed method was linear in the BNZ concentration, which ranged from 0.1 to 100.0 g/ml for plasma, spleen, brain, colon, heart, lung, and kidney and from 0.2 to 100.0 g/ml for liver. Validation assays demonstrated good stability for BNZ under all conditions evaluated. Pharmacokinetic parameters confirmed rapid, but low, absorption of BNZ after oral administration. Biodistribution assays demonstrated different maximum concentrations in organs and similar times to maximum concentration and mean residence times, with means of 40 min and 2.5 h, respectively. Therefore, the biodistribution of BNZ is extensive, reaching organs such as the heart and colon, which are the most relevant organs affected by Trypanosoma cruzi infection, and also the spleen, brain, liver, lungs, and kidneys. Simultaneous analyses of tissues and plasma indicated high BNZ metabolism in the liver. Our results suggest that low bioavailability, instead of inadequate biodistribution, coul
Immunohistochemical studies in acute and chronic canine chagasic cardiomyopathy.
(2002) Caliari, Marcelo Vidigal; Lana, Marta de; Cajá, Rosângela Aparecida França; Carneiro, Cláudia Martins; Bahia, Maria Terezinha; Santos, César Augusto Bueno dos; Magalhães, Gustavo Albergaria; Sampaio, Ivan Barbosa Machado; Tafuri, Washington Luiz
A major characteristic of Chagas’ disease is a myocarditis constituted primarily of mononuclear cells, both during the acute and chronic phases of the disease. Using monoclonal antibodies and image analyses we have quantified canine CD8+ T cells (caCD8+ T cells), canine CD4+ T cells (caCD4+ T cells) and neutrophils in canine chagasic myocardiopathy induced by two strains isolated from the first human clinical case of Chagas’ disease. We also evaluated the influence of tissue parasitism in the genesis of chronic myocarditis through immunohistochemistry. As in human myocarditis, there was a predominance of T lymphocytes in the inflammatory infiltrate in all animals studied. In the dogs inoculated with strain Berenice 78 (Be78) and necropsied during the acute phase of infection, we found 58% caCD8+ and 42% caCD4+ T cells. In chronically infected animals, 53% of T cells were represented by caCD8+ and 47% were caCD4+ T cells. Since normal canine lymphoid organs are constituted by 70–80% caCD4+ T cells and 20–30% caCD8+ T cells our results indicate a higher proliferation of caCD8+ T cells in dogs inoculated with the Be78 strain. In chronic myocarditis induced by the Berenice 62 (Be62) strain, caCD8+ cells constituted 33% of the T cells and 67% were caCD4+ T cells, a proportion similar to that found in normal canine lymphoid organs. Since the Be78 strain induces greater loss of myocardiocytes than strain Be62, we believe that the caCD8+ T cells, among other factors, can be important in the genesis of these lesions. Amastigote nests and immunohistochemically labelled Trypanosoma cruzi antigen were not found in dogs necropsied during the chronic phase. The absence of the parasite in the myocardium suggests the involvement of other
Increase of reactive oxygen species by desferrioxamine during experimental Chagas' disease.
(2010) Francisco, Amanda Fortes; Vieira, Paula Melo de Abreu; Arantes, Jerusa Marilda; Silva, Maísa; Pedrosa, Maria Lúcia; Santos, Silvana Maria Elói; Martins Filho, Olindo Assis; Carvalho, Andréa Teixeira de; Araújo, Márcio Sobreira Silva
Oxidative stress is common in inflammatory processes associated with many diseases including Chagas’ disease. The aim of the present study was to evaluate, in a murine model, biomarkers of oxidative stress together with components of the antioxidant system in order to provide an overview of the mechanism of action of the iron chelator desferrioxamine (DFO). The study population comprised 48 male Swiss mice, half of which were treated daily by intraperitoneal injection of DFO over a 35-day period, while half were administered sterile water in a similar manner. On the 14th day of the experiment, 12 DFO-treated mice and an equal number of untreated mice were experimentally infected with Trypanosoma cruzi. Serum concentrations of nitric oxide and superoxide dismutase and hepatic levels of total glutathione, thiobarbituric acid reactive species and protein carbonyl, were determined on days 0, 7, 14 and 21 post-infection. The results obtained revealed that DFO enhances antioxidant activity in the host but also increases oxidative stress, indicating that the mode of action of the drug involves a positive contribution to the host together with an effect that is not beneficial to the parasite.
Trypanosoma cruzi Discret Typing Units (TcII and TcVI) in samples of patients from two municipalities of the Jequitinhonha Valley, MG, Brazil, using two molecular typing strategies.
(2015) Oliveira, Maykon Tavares de; Assis, Girley Francisco Machado de; Silva, Jaquelline Carla Valamiel de Oliveira e; Machado, Evandro Marques de Menezes; Silva, Glenda Nicioli da; Veloso, Vanja Maria; Macedo, Andréa Mara; Martins, Helen Rodrigues; Lana, Marta de
Background: Trypanosoma cruzi is classified into six discrete taxonomic units (DTUs). For this classification, different biological markers and classification criteria have been used. The objective was to identify the genetic profile of T. cruzi samples isolated from patients of two municipalities of Jequitinhonha Valley, MG, Brazil. Methods: Molecular characterization was performed using two different criteria for T. cruzi typing to characterize 63 T. cruzi samples isolated from chronic Chagas disease patients. The characterizations followed two distinct methodologies. Additionally, the RAPD technique was used to evaluate the existence of genetic intragroup variability. Results: The first methodology identified 89 % of the samples as TcII, but it was not possible to define the genetic identity of seven isolates. The results obtained with the second methodology corroborated the classification as TcII of the same samples and defined the classification of the other seven as TcVI. RAPD analysis showed lower intra-group variability in TcII. Conclusions: The results confirmed the preliminary data obtained in other municipalities of the Jequitinhonha Valley, showing a predominance of TcII, similar to that verified in northeast/south axis of Brazil and the first detection of TcVI in the study region. The second protocol was more simple and reliable to identify samples of hybrid character.
Eficácia do tratamento com licnofolida livre e em nanocápsulas em camundongos experimentalmente infectados com cepas de Trypanosoma cruzi de perfis distintos de resistência aos fármacos usuais.
(2015) Mello, Carlos Geraldo Campos de; Lana, Marta de; Branquinho, Renata Tupinambá
A doença de Chagas (DCh) permanece negligenciada. O único fármaco disponível no Brasil para seu tratamento é o benznidazol (BZ), que provoca efeitos colaterais graves e baixa eficácia terapêutica na fase crônica (FC) da infecção. Já foi demonstrado que a licnofolida (LIC), isolada de Lychnophora trichocarpha apresenta atividade anti-T. cruzi in vitro e eficácia terapêutica nas fases aguda (FA) e FC da infecção in vivo. Sendo a LIC uma substância lipofílica com ação citotóxica, uma formulação farmacêutica para carreá-la, como nanocápsulas poliméricas (NC) é viável por permitir liberação controlada de substâncias, seletividade tecidual e redução da toxicidade. Sendo assim, os objetivos deste trabalho foram (I) determinar a eficácia terapêutica da LIC livre e de formulações de NC contendo LIC na FA e FC da infecção em modelo murino infectado com cepas de T. cruzi de distintos perfis de resistência ao BZ e (II) avaliar o real benefício das NC na evolução da infecção e eliminação tecidual do T. cruzi. Para tal, camundongos Swiss foram infectados com as cepas Y (parcialmente resistente ao BZ) e VL-10 (resistente ao BZ) tratados por 20 dias por via oral durante as FA e FC. Tratamentos: (I) Cepa Y – FA/FC: LIC-livre 5,0 mg/kg/dia, BZ 100,0 mg/kg/dia e controles; (II) Cepa VL-10 – FA/FC: LIC-livre 12,0 mg/kg/dia, BZ 100,0 mg/kg/dia, NC-PLAPEG-LIC (8,0 e 12,0 mg/kg/dia – FA) e controles. A avaliação da eficácia terapêutica foi realizada por exame de sangue a fresco (ESF -FA), hemocultura (HC), PCR e ELISA. (i) FA – Cepa Y: Não foi observada cura em nenhum animal tratado com LIC-livre e controles, mas 62,5% dos tratados com BZ foram curados. As taxas de sobrevida foram de 75,0%, 100,0% e 0% dos animais tratados com LIC-livre, BZ e controles, respectivamente, cujo tempo médio de sobrevida foi de somente19 dias. FC – Cepa Y: Ao avaliar os resultados dos exames parasitológicos e ELISA não foi observada cura em nenhum animal dos grupos tratados com LIC-livre, BZ e controles. As taxas de sobrevida foram semelhantes em todos os grupos: 70,0% nos tratados com LIC-livre e controles e 80,0 nos tratados com BZ. (ii) FA – Cepa VL-10: Houve cura em 75,0% e 37,5% dos animais tratados com NC-PLAPEG-LIC 12mg e NC-PLAPEG-LIC 8mg, enquanto nenhum animal tratado com LIC-livre, BZ e dos grupos controles foi curado. FC – Cepa VL-10-: Não foi revelada cura em nenhum animal tratado com LIC-livre. A sobrevida dos animais tratados com LIC-livre, BZ e controles foi de: 70,0%, 80,0% e 60,0% respectivamente. LIC-livre foi capaz de reduzir a parasitemia em animais infectados com as cepas Y e VL-10, mas não curou a infecção. NC-LIC promoveu cura de 75% dos animais infectados com a cepa VL-10 tratados na FA, e apresentou efeito dose x resposta. Os resultados da qPCR foram concordantes em sua maioria (97%) com os resultados obtidos com o controle de cura clássico (negatividade da HC, PCR convencional em sangue e ELISA). Esta técnica demonstrou eficiência > 97,0%, redução do parasitismo tecidual nos animais tratados com LIC-livre e NC-PCL-LIC, e ausência do T. cruzi no tecido cardíaco em 100% dos animais tratados com NC-PLAPEG-LIC, independentemente da cepa e fase da infecção em que o tratamento foi administrado.
Hematological alterations during experimental canine infection by Trypanosoma cruzi.
(2012) Guedes, Paulo Marcos da Matta; Veloso, Vanja Maria; Mineo, Tiago Wilson Patriarca; Silva, Juliana Santiago; Crepalde, Geovam Pereira; Caldas, Ivo Santana; Nascimento, Manuela Sales Lima; Lana, Marta de; Chiari, Egler; Galvão, Lúcia Maria da Cunha; Bahia, Maria Terezinha
Para confirmar que cães Beagle são um bom modelo para doença de Chagas, foram avaliadas as alterações hematológicas durante as fases aguda e crônica em cães Beagle infectados com as cepas Y, Berenice-78 (Be-78) e ABC de Trypanosoma cruzi, correlacionando os sinais clínicos com a curva de parasitemia. Foi demonstrado que a fase aguda da infecção foi marcada por letargia e perda de apetite. Simultaneamente, observou-se anemia, leucocitose e linfocitose. Ainda, foram descritas alterações hematológicas e sinais clínicos positivamente correlacionados com a parasitemia durante a infecção experimental com as três cepas de T. cruzi estudadas, demonstrando que a infecção em cães Beagle constitui um modelo fidedigno para a doença de Chagas.
Different infective forms trigger distinct immune response in experimental Chagas disease.
(2012) Vieira, Paula Melo de Abreu; Franscisco, Amanda Fortes; Machado, Evandro Marques de Menezes; Nogueira, Nívia Carolina; Fonseca, Kátia da Silva; Reis, Alexandre Barbosa; Carvalho, Andréa Teixeira de; Martins Filho, Olindo Assis; Tafuri, Washington Luiz; Carneiro, Cláudia Martins
Although metacyclic and blood trypomastigotes are completely functional in relation to parasite-host interaction and/or target cell invasion, they differ in the molecules present on the surface. Thus, aspects related to the variability that the forms of T. cruzi interacts with host cells may lead to fundamental implications on the immune response against this parasite and, consequently, the clinical evolution of Chagas disease. We have shown that BT infected mice presented higher levels of parasitemia during all the acute phase of infection. Moreover, the infection with either MT or BT forms resulted in increased levels of total leukocytes, monocytes and lymphocytes, specifically later for MT and earlier for BT. The infection with BT forms presented earlier production of proinflammatory cytokine TNF-a and later of IFN-c by both T cells subpopulations. This event was accompanied by an early cardiac inflammation with an exacerbation of this process at the end of the acute phase. On the other hand, infection with MT forms result in an early production of IFN-c, with subsequent control in the production of this cytokine by IL-10, which provided to these animals an immunomodulatory profile in the end of the acute phase. These results are in agreement with what was found for cardiac inflammation where animals infected with MT forms showed intense cardiac inflammation later at infection, with a decrease in the same at the end of this phase. In summary, our findings emphasize the importance of taking into account the inoculums source of T. cruzi, since vectorial or transfusional routes of T. cruzi infection may trigger distinct parasite-host interactions during the acute phase that may influence relevant biological aspects of chronic Chagas disease.

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