Navegando por Assunto "Adenosina trifosfato"

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Adenosine production via CD39/CD73 pathway promotes Leishmania amazonensis survival in macrophages.
(2014) Bajracharya, Bijay; Afonso, Luís Carlos Crocco
A leishmaniose cutânea (CL), causada por L. amazonensis, é caracterizada por uma intensa imuno- supressão e multiplicação descontrolada do parasito em modelos experimentais e é geralmente grave em humanos, variando desde a forma cutânea até a cutâneo-difusa. Não existem mecanismos precisos conhecidos sobre como L. amazonensis modula a resposta imunológica para que os macrófagos (MФ) infectados com L. amazonensis se tornem refratários à ativação por células T efetoras. Aqui, nós investigamos o possível mecanismo regulador que Leishmania provavelmente pode induzir em MФ residentes durante a interação precoce, de modo a impedir ativação das células. Neste estudo, analisou-se a expressão de CD39 e CD73, por citometria de fluxo, em MФ peritoneais murinos infectados com promastigotas metacíclicas de L. amazonensis e também a porcentagem dessas células que expressam a CD39 e CD73 foi avaliada. Nossos resultados mostraram que em 72hrs inativos os MФ tiveram baixa expressão de CD73. Curiosamente, no entanto, ao contrário de MФ tratados com LPS os infectados com L. amazonensis expressaram altos níveis de CD73. Esta informação foi posteriormente validada pelos resultados de estudos no contexto ex-vivo que mostrou igualmente que MФ infectados são predominantemente CD73+. Quando as atividades enzimáticas de CD39 e CD73 foram bloqueadas, tal como pelo uso de DIDS e MAD αβ, tanto a infecção quanto o número de amastigotas diminuiu significativamente após 48 horas de incubação. Da mesma forma, a inibição dos receptores de adenosina A2a e A2b de ZM241385 e MRS1754 também apresentou os mesmos efeitos sobre a sobrevivência do parasito e infectividade. Em estudo posterior, em busca de um possível papel da HIF- 1α na infecção por Leishmania, investigamos os efeitos da FM19G11, inibidor do HIF- 1α, na expressão de CD39 e CD73, bem como na infecção parasitária . Observou-se que, apesar de HIF - 1α poder influenciar na sobrevivência do parasito, os seus efeitos sobre a expressão de CD39 e CD73 não eram visíveis. Também foi avaliada, por PCR em tempo real, a expressão de receptores de adenosina em populações infectadas, nas quais não se observou nenhuma mudança significativa na expressão após 24 horas de infecção. Além disso, também foi avaliada a produção de citocinas, tais como TNF- α e IL-10 a partir da produção de NO nos grupos tratados. Surpreendentemente, não houve variação nos níveis destes mediadores, sugerindo a existência de outros mecanismos independentes da mediação por citocina para produção de Óxido Nítrico, tais como a produção de ROS ou efeitos leishmanacidas independentes do triptofano. Concluindo, nossos dados mostram que a infecção por L. amazonensis regula a expressão CD73 durante 24 horas de infecção e sua sobrevivência depende de atividades enzimáticas, bem como de receptores A2a e A2b.
A metaciclogênese em Leishmania é promovida na ausência de purinas.
(Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto., 2012) Serafim, Tiago Donatelli; Afonso, Luís Carlos Crocco
Parasitos do gênero Leishmania são agentes causadores de um espectro de doenças, caracterizadas por lesões cutâneas graves (localizadas ou difusas) até ao potencialmente fatal acometimento de vísceras, coletivamente conhecido como leishmanioses. Estas doenças têm início quando formas infecciosas do parasito. promastigotas metacíclicas, são transmitidas pela picada de um flebotomíneo infectado para o hospedeiro mamífero. Há muito que se sabe que o desenvolvimento no vetor dessas formas, processo conhecido como metaciclogênese, é vital para o ciclo de vida do protozoário e concomitante surgimento da doença no homem, porém, pouco se sabe sobre os fatores que proporcionam seu aparecimento. Tem sido geralmente estabelecido que "condições de estresse" irão conduzir ao desenvolvimento de formas metacíclicas e com a exceção de alguns estudos nenhuma análise detalhada da natureza molecular do fator de estresse tem sido realizada. Neste trabalho, mostramos que a presença/ausência de nucleosídeos, em particular a adenosina, controla a metaciclogênese em Leishmania tanto in vitro quanto in vivo. Nós descobrimos que a adição de um antagonista de receptor de adenosina em culturas de Leishmania amazonensis aumenta significativamente a metaciclogênese, um efeito que pode ser revertido pela presença de determinados nucleosídeos de purina ou nucleobases. Além disso, nossos resultados mostram que a proliferação e metaciclogênese são reguladas independentemente e que a adição de adenosina no meio de cultura é suficiente para recuperar características proliferativas em promastigotas metacíclicos purificados. Mais importante, demonstramos que a metaciclogênese foi inibida em fêmeas de Lutzomyia longipalpis infectadas com Leishmania infantum chagasi que foram alimentadas com uma mistura de sacarose e adenosina. Esses resultados preenchem uma lacuna de conhceimento no ciclo de vida destes parasitos, demonstrando como a metaciclogênese, um ponto chave na propagação do parasito ao hospedeiro mamífero, pode ser controlada pela presença de purinas.