Navegando por Autor "Barcellos, Neila Marcia Silva"
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Item Accelerated Blood Clearance (ABC) phenomenon favors the accumulation of tartar emetic in pegylated liposomes in BALB/c mice liver.(2018) Lopes, Tamara Cristina Moreira; Silva, Débora Faria; Costa, Walyson Coelho; Frezard, Frederic Jean Georges; Barichello, José Mario; Barcellos, Neila Marcia Silva; Lima, Wanderson Geraldo de; Rezende, Simone AparecidaTartar emetic (TE) was the first drug used to treat leishmaniasis.However, its use was discontinued due to high toxicity. Association of TE with liposomes is a strategy to reduce its side effects. Pegylated liposomes (Lpeg) present lower rates of uptake by macrophages and prolonged circulation compared to their nonpegylated counterparts. However, repeated administration of Lpeg can cause an Accelerated Blood Clearance (ABC) phenomenon, whereby recognition of liposomes by antibodies results in faster phagocytosis. Thiswork evaluated the effect of TE administration on histopathological aspects and the effect of the ABC phenomenon on targeting and toxicity in mice. Our results show that treatment with free or liposomal TE had no effect on the erythrocyte count, on liver and spleen weight, and on hepatic, splenic, and cardiac histology in mice. Severe lesions were observed on the kidneys of animals treated with a single dose of free TE. Treatment with TE in Lpeg after induction of ABC phenomenon caused a significant increase in Sb level in the liver without toxicity. Furthermore, mice treated with TE in liposomes showed normal renal histopathology. These results suggest site-specific targeting of Sb to the liver after induction of ABC phenomenon with no toxicity to other organs.Item Acute and sub chronic toxicity study of aqueous extract from the leaves and branches of Campomanesia velutina (Cambess) O. Berg.(2017) Araújo, Marcela Carolina de Paula Michel; Barcellos, Neila Marcia Silva; Vieira, Paula Melo de Abreu; Gouveia, Thiago Magalhães; Guerra, Martha Oliveira; Peters, Vera Maria; Guimarães, Dênia Antunes SaúdeEthnopharmacological relevance: Campomanesia velutina leaves and branches infusions are used in Brazilian folk medicine to treat diarrhea and to ameliorate intestinal cramps, respectively. Aim of the study: Carry out the acute and sub chronic pre-clinical evaluation and thus assess the safety and toxicological potential of the specie. Materials and methods: In vivo toxicity was evaluated by acute and sub chronic toxicity assays conducted according to the guidelines of the Brazilian Agency of National Health Surveillance (Agência Nacional de Vigilância Sanitária – ANVISA). For acute toxicity evaluation, a single dose of aqueous extracts from the leaves (AEL) and branches (AEB) of Campomanesia velutina were orally administered to mice at doses of 300, 600 and 1200 mg/kg. Then, the animals were observed for 14 days. In the sub chronic study, the extracts were orally administered to mice for 14 days at doses of 300, 600 and 1200 mg/kg. To assess the toxicological effects, animals were closely observed on general behavior, clinical signs of toxicity, body weight, food and water intake. At the end of the experiment, it was performed biochemical and hematological evaluations, as well as histopathological analysis from the following organs: brain, heart, lungs, liver, stomach, small intestine (section) and left kidney. Preliminary phytochemical analysis was performed using thin layer chromatography (TLC) and colorimetric pharmacognostic tests. Results: In oral acute assay, treatment with AEB at the major dose (1200 mg/kg) caused diarrhea, abdominal cramps and tremors in females. These effects were reversed at 4th hour. Normochromic normocytic anemia was observed in males treated with AEL 300 mg/kg and AEB 600 and 1200 mg/kg as well as in females treated with AEB 300 and 1200 mg/kg. The kidney of all treated animals showed moderate inflammation and a few hemorrhagic points. In sub chronic assay, treatment with AEL 600 mg/kg, AEL 1200 mg/kg and AEB 1200 mg/kg caused hyper excitability in females that was not reversed. Treatments also had impact on weight gain and the relative weight of males’ brain was increased on group treated with AEL 300 mg/kg, AEB 300 and AEB 1200 mg/kg. Although changes in hematological parameters were not observed, serum creatinine levels were significantly higher in males treated with AEB 300 mg/kg. Besides, the heart of all treated animals showed intense hyperemia. Preliminary phytochemical analysis revealed the presence of flavonoids, tannins and phenolic compounds. Conclusions: Toxicity signs were mainly observed after treatment with AEL and AEB at the two highest tested doses (600 and 1200 mg/kg), suggesting that the extracts are relatively safe at its effective dose (300 mg/kg). However, alterations on hematological and biochemical parameters and on the kidney and heart of the animals were not closely related with the dose, implying caution on its use.Item Association of liposome-encapsulated trivalent antimonial with ascorbic acid: an effective and safe strategy in the treatment of experimental visceral. leishmaniasis.(2014) Castro, Renata Alves de Oliveira e; Barcellos, Neila Marcia Silva; Licio, Carolina Souza Andrade; Souza, Janine Braga de; Testasicca, Miriam Conceição de Souza; Ferreira, Flávia Monteiro; Batista, Maurício Azevedo; Lemos, Denise da Silveira; Moura, Sandra Aparecida Lima de; Frezard, Frederic Jean Georges; Rezende, Simone AparecidaVisceral leishmaniasis (VL) is a chronic debilitating disease endemic in tropical and subtropical areas, caused by protozoan parasites of the genus Leishmania. Annually, it is estimated the occurrence of 0.2 to 0.4 million new cases of the disease worldwide. Considering the lack of an effective vaccine the afflicted population must rely on both, an accurate diagnosis and successful treatment to combat the disease. Here we propose to evaluate the efficacy of trivalent antimonial encapsulated in conventional liposomes, in association with ascorbic acid, by monitoring its toxicity and efficacy in BALB/c mice infected with Leishmania infantum. Methodology/Principal Findings:: Infected mice were subjected to single-dose treatments consisting in the administration of either free or liposome-encapsulated trivalent antimony (SbIII), in association or not with ascorbic acid. Parasite burden was assessed in the liver, spleen and bone marrow using the serial limiting dilution technique. After treatment, tissue alterations were examined by histopathology of liver, heart and kidney and confirmed by serum levels of classic biomarkers. The phenotypic profile of splenocytes was also investigated by flow cytometry. Treatment with liposome-encapsulated SbIII significantly reduced the parasite burden in the liver, spleen and bone marrow. Co-administration of ascorbic acid, with either free SbIII or its liposomal form, did not interfere with its leishmanicidal activity and promoted reduced toxicity particularly to the kidney and liver tissues. Conclusions/Significance:: Among the evaluated posological regimens treatment of L. infantum-infected mice with liposomal SbIII, in association with ascorbic acid, represented the best alternative as judged by its high leishmanicidal activity and absence of detectable toxic effects. Of particular importance, reduction of parasite burden in the bone marrow attested to the ability of SbIII-carrying liposomes to efficiently reach this body compartment.Item Avaliação biofarmacêutica da goiazensolida.(2020) Tana, Iara Dévula Tiso; Souza, Jacqueline de; Guimarães, Dênia Antunes Saúde; Caldeira, Tamires Guedes; Fernandes, Cristian; Barcellos, Neila Marcia Silva; Souza, Jacqueline deA avaliação biofarmacêutica permite estudar o comportamento de fármaco ou substância bioativa frente a soluções que mimetizam as condições do trato gastrointestinal (TGI) visando prever sua solubilidade e permeabilidade em condições fisiológicas. Os resultados são preditivos do comportamento in vivo de candidatos a fármaco. Assim, um candidato a fármaco precisa de, além da eficácia clínica comprovada e ausência de toxicidade, possuir características físico-químicas que permitam a sua absorção no TGI em velocidade e extensão apropriadas. A avaliação por meio de testes in vitro das substâncias bioativas, quanto à solubilidade, e de testes in vivo de permeabilidade, permite a alocação dentro de uma das 4 classes do Sistema de Classificação Biofarmacêutica (SCB). A goiazensolida, lactona sesquiterpênica presente em espécies do gênero Lychnophora, apresentou atividades farmacológicas variadas, o que torna necessário elucidar suas características biofarmacêuticas, visando o desenvolvimento farmacotécnico de um medicamento contendo essa substância. Estudos in silico demonstraram que a goiazensolida apresenta alta solubilidade e baixa permeabilidade. Um método por cromatografia a líquido de alta eficiência (CLAE), para sua quantificação nos estudos de solubilidade, foi desenvolvido e validado nos meios tamponados pH 1,2, pH 4,5 e pH 6,8. O método foi linear na concentração de 10,0 a 50,0 μg/mL, seletivo, preciso e exato. A solubilidade da goiazensolida, determinada pelo método da agitação orbital em frasco, foi de 0,57 mg/mL (pH 1,2), 0,51 mg/mL (pH 4,5) e 0,45 mg/mL (pH 6,8). A razão entre a maior dose terapêutica, por extrapolação alométrica, e a solubilidade em cada um dos meios avaliados resultou nos valores de 175,16 mL (pH 1,2), 194,99 mL (pH 4,5) e 222,07 mL (pH 6,8), que apontaram a alta solubilidade da goiazensolida, visto que são inferiores a 250,0 mL. Ela se mostrou estável nos três meios tamponados. A permeabilidade foi avaliada pelo ensaio em membrana artificial paralela (PAMPA). Foi necessário validar o método por CLAE para a quantificação da goiazensolida no estudo de permeabilidade, o qual se mostrou linear na concentração de 3,6 a 117,0 μg/mL, seletivo, preciso e exato para os meios pH 6,8 e pH 7,4. Foram utilizados como padrão de alta permeabilidade o cloridrato de propranolol e de baixa permeabilidade a furosemida. Para a goiazensolida foi encontrado o valor de permeabilidade efetiva de 0,03 x 10-6 cm/s, inferior ao da furosemida (1,03 x 10-6 cm/s). Dessa forma, a avaliação biofarmacêutica permitiu predizer a absorção no TGI da goiazensolida e direcionar os estudos pré-clínicos necessários ao desenvolvimento de um novo fármaco.Item Avaliação biofarmacêutica da losartana visando subsidiar a discussão de bioisenção.(2015) Souza, Janine Braga de; Barcellos, Neila Marcia Silva; Souza, Jacqueline de; Barcellos, Neila Marcia Silva; Souza, Jacqueline deO Sistema de Classificação Biofarmacêutica (SCB) agrupa os fármacos de acordo com as suas características de solubilidade e permeabilidade, e tem sido utilizado como ferramenta regulatória para embasar a possibilidade de isenção dos estudos de bioequivalência in vivo (bioisenção), para certos fármacos veiculados em formas farmacêuticas sólidas orais de liberação imediata (FFSOLI). A solubilidade, a permeabilidade e dissolução são os principais fatores que controlam a absorção e logo a atividade terapêutica de um fármaco. Neste estudo, foram realizadas avaliações biofarmacêuticas para o anti-hipertensivo losartana buscando complementar informações, ainda ausentes, que possam contribuir para a definição de sua classe no SCB e para uma segura decisão sobre a possibilidade ou não de bioisenção. Foi desenvolvido e validado o método para a quantificação da losartana por CLAE nos meios que simulam o fluido gástrico simulado sem enzimas (FGSSE, pH=1,2), tampão acetato (TA, pH=4,5) e suco entérico simulado sem enzimas (SESSE, pH=6,8). Ométodo foi linear, preciso, exato e seletivo na faixa de trabalho selecionada em todos os meios tamponados e aplicado a estudos de solubilidade pelo método da agitação orbital em frasco (shake-flask) e por dissolução intrínseca. No método da agitação orbital e frasco, a losartana apresentou baixa solubilidade no meio FGSSE (pH=1,2) - razão D/S >250 mL - e no meio SESSE (pH=6,8) houve uma divergência em relação a sua classificação de acordo com as condições utilizadas. Por outro lado, no estudo de dissolução intrínseca o fármaco apresentou alta solubilidade no meio FGSSE (pH=1,2) - VDI=0,90 mg/min/cm2 - e no meio SESSE (pH=6,8), VDI=10,04 mg/min/cm2. Não foi possível obter resultados conclusivos em relação à solubilidade do fármaco no meio TA (pH=4,5). Os resultados obtidos pelos estudos de Química Quântica forneceraminformações moleculares e eletrônicas que auxiliaram no entendimento acerca da solvatação da losartana nas diferentes faixas de pH. Também foram avaliados os perfis de dissolução da losartana a partir de comprimidos revestidos disponíveis no mercado brasileiro nos meios tamponados e os excipientes destes produtos. Foi verificado que eles não apresentaram rápida dissolução (85% em 30 minutos) em nenhum dos meios tamponados avaliados. Além disso, não houve diferença estatística entre os perfis de dissolução dos produtos avaliados. Entretanto, em relação a eficiência de dissolução, foi observada diferença estatística (P<0,05) do Produto A (referência) e do Produto B (similar) em comparação ao Produto C (genérico) no meio TA (pH=4,5). No meio SESSE (pH=6,8), também houve diferença estatística do Produto A em comparação com o Produto C. Esse fato indicaria que o medicamento genérico analisado possuiria diferenças importantes na liberação e, logo, na biodisponibilidade do fármaco que poderiam estar relacionadas com a presença de um excipiente. Emrelação a permeabilidade, os dados encontrados na literatura demonstraram a baixa permeabilidade da losartana. Portanto, a losartana poderia ser um fármaco de classe IV (baixa solubilidade e baixa permeabilidade) do SCB, o que inviabiliza a possibilidade de bioisenção pelas agências reguladoras.Item Avaliação biofarmacêutica do cloridrato de amilorida como candidato a bioisenção.(2016) Guimarães, Laryssa Freitas; Barcellos, Neila Marcia Silva; Souza, Jacqueline de; César, Isabela da Costa; Coutrim, Maurício Xavier; Barcellos, Neila Marcia SilvaO Sistema de Classificação Biofarmacêutica (SCB) se baseia nas propriedades de solubilidade e permeabilidade de fármacos veiculados em formas farmacêuticas sólidas de liberação imediata (FFSOLI). O conhecimento destas características permite uma previsão da extensão e velocidade de absorção do fármaco; assim, este sistema tem sido utilizado como ferramenta para fundamentar a possibilidade de substituição de estudos in vivo por estudos in vitro, no registro de novos medicamentos, o que caracteriza a bioisenção. Este trabalho teve como objetivo contribuir para a definição da classificação biofarmacêutica do diurético cloridrato de amilorida, a fim de subsidiar uma decisão sobre a possibilidade ou não de bioisentar novos produtos contendo o referido fármaco. Para tal, foi realizado o estudo da solubilidade em equilíbrio empregando-se o método de agitação orbital em frasco e também foi identificado na literatura dados de permeabilidade que possibilitaram classificar o fármaco pelo SCB. Foi realizado ainda um estudo de dissolução, empregando 900mL de meio, aparato pá e com 50 rpm, de três produtos do mercado brasileiro contendo o cloridrato de amilorida sob a FFSOLI. Inicialmente foram desenvolvidos e validados métodos analíticos por cromatografia a líquido de alta eficiência (CLAE) para quantificação do cloridrato de amilorida, nos meios fluido gástrico simulado sem enzimas (FGSSE - pH 1,2), tampão acetato (TA pH - 4,5) e suco entérico simulado sem enzimas (SESSE - pH 6,8) utilizados nos estudos de solubilidade e dissolução. Os métodos apresentaram-se seletivos, lineares, precisos e exatos nas faixas de trabalho utilizadas em cada meio tamponado. O valor da solubilidade do cloridrato de amilorida encontrado nos meios FGSSE, TA e SESSE foram de 590,11 µg/mL, 3072,44 µg/mL e 168,66 µg/mL, respectivamente. A razão Dose/Solubilidade do cloridrato de amilorida foi de 8,5 mL no FGSSE, 1,6 mL no TA e 29,6 mL no SESSE. Todos os resultados foram inferiores a 250 mL confirmando, em condições adequadas, que o cloridrato de amilorida é um fármaco de alta solubilidade. Estudos in vivo disponíveis na literatura afirmam que o cloridrato de amilorida é um fármaco de alta permeabilidade com Peff jejunal de 1,6x10-4 cm/s. O estudo de dissolução mostrou que no meio FGSSE os medicamentos genérico e similar obtiveram dissolução rápida; no meio TA os três produtos apresentaram dissolução rápida e no meio SESSE, somente o similar apresentou dissolução rápida. Neste contexto, considerando que todas as agências regulatórias aceitam a bioisenção de fármacos classe I, com comprovada segurança, amplo intervalo terapêutico e farmacocinética linear, contidos em formas farmacêuticas sólidas que tenham dissolução rápida (85% em 30 minutos) pode-se inferir que novos medicamentos contendo o cloridrato de amilorida poderão ser bioisentos se cumprirem esta condição de dissolução.Item Avaliação da solubilidade e permeabilidade da loratadina e desloratadina visando a classificação biofarmacêutica.(2018) Silva, Débora dos Santos da; Souza, Jacqueline de; Barcellos, Neila Marcia Silva; Souza, Jacqueline de; César, Isabela da Costa; Coutrim, Maurício XavierO Sistema de Classificação Biofarmacêutica (SCB), proposto em 1995, é fundamentado nos parâmetros de solubilidade e permeabilidade de fármacos e tem sido utilizado como ferramenta na decisão regulatória da substituição dos estudos de bioequivalência por testes in vitro. Devido à necessidade de estudos biofarmacêuticos para segura classificação e a discussão acerca da bioisenção, a loratadina e a desloratadina são fármacos de estudo que apresentam estreitas relações farmacocinética e estrutural entre si. Esses fatores despertaram a necessidade de um método analítico capaz de quantificá-los simultaneamente, sendo desenvolvido e validado um método por cromatografia a líquido de alta eficiência com as condições cromatográficas: C18 (150x4,6 mm, 5 μm), fluxo 1,0 ml/min, temperatura 25ºC, volume de injeção 20 μl, detecção na região do UV a 248 nm, a fase móvel foi composta por ácido acético a 0,1% em água (v/v) (A) e metanol (B) eluídos em modo gradiente (tempo (min)/% B): 0,0/5,0%; 3,0/100,0%; 5,0/100,0%; 6,0/5,0% e 7,0/5,0%. O método desenvolvido foi aplicado a estudos de solubilidade em equilíbrio pelo método da agitação orbital em frasco (shake-flask) e mostrou-se indicativo de estabilidade, sendo seletivo, linear, preciso e exato. A loratadina apresentou solubilidade dependente do pH, tendo razão dose/solubilidade de 0,59 mL, 415,0 mL e 17787, 64 mL nos meios tamponados FGSSE pH 1,2, TA pH 4,5 e FISSE pH 6,8, respectivamente. A desloratadina por sua vez apresentou alta solubilidade caracterizada com razão dose/solubidade 0,19 mL, 0,76 mL, 1,30 mL nos três meios tamponados FGSSE pH 1,2, TA pH 4,5 e FISSE pH 6,8, respectivamente. Em relação à permeabilidade, os dados da literatura compilados não compreendem estudos in vivo em humanos sadios, de forma que a partir dos dados disponíveis sugere-se que ambos os fármacos se comportem como altamente permeável, sendo a desloratadina passível de pertencer a classe I e a loratadina a classe II segundo o SCB. Nesse contexto, a desloratadina é um possível candidato a bioisenção enquanto que a loratadina não é um fármaco bioisento. A identificação e avaliação da composição dos medicamentos contendo esses fármacos isoladamente permitiu verificar a ausência de excipientes considerados críticos no processo de absorção nos medicamentos contendo 10 mg de loratadina, enquanto que duas das formulações contendo 5 mg de desloratadina apresentaram manitol em sua composição. Ao passo que esse excipiente pode afetar a biodisponibilidade dos fármacos, os estudos de bioequivalência que todos esses medicamentos foram submetidos asseguram a eficácia clínica e segurança dos mesmos.Item Avaliação da solubilidade em equilíbrio e da permeabilidade in vitro da eremantolida C.(2015) Caldeira, Tamires Guedes; Souza, Jacqueline de; Guimarães, Dênia Antunes Saúde; Araújo, Magali Benjamim de; Santos, Cláudia Gouvea dos; Souza, Jacqueline de; Barcellos, Neila Marcia SilvaOs parâmetros de solubilidade e permeabilidade intestinal estão diretamente relacionados com a biodisponibilidade oral do fármaco. Baseada nessa relação o Sistema de Classificação Biofarmacêutica (SCB) visa definir testes in vitro capazes de prever o comportamento in vivo dos medicamentos, o que é extremamente útil no processo de descoberta de novos fármacos. Nesse contexto, se encontra a eremantolida C (EREC), lactona sesquiterpênica e constituinte químico ativo da Lychnophora trichocarpha Spreng. (arnica brasileira), com comprovadas atividades farmacológicas e baixa toxicidade, o que levou ao interesse de se avaliar as suas características biofarmacêuticas e, consequentemente a sua aplicação como fármaco. Os primeiros dados, obtidos in silico, sugeriram que a EREC apresenta baixa solubilidade e alta permeabilidade, uma vez que exibe cLogS = -3,83 e cLogP em torno de 2,00. Esses resultados estão em concordância com os encontrados na literatura para fármacos em geral, pois cerca de 85% destes têm valores de LogS entre -1 e -5, o que caracteriza a polaridade necessária para a solubilidade aquosa e o caráter lipofílico adequado para a passagem através da membrana. Além de cLogP equiparável ao padrão de alta permeabilidade (metoprolol). Posteriormente foi desenvolvido e validado um método por cromatografia líquida de alta eficiência com detecção por ultravioleta a 267 nm para a quantificação da eremantolida C nos meios TA (pH 4,5), FISSE (pH 6,8) e TF (pH 7,4). Embora tenham sido avaliados, os meios ácidos, FGSSE (pH 1,2) e tampão ácido clorídrico (pH 2,1), a EREC não apresentou estabilidade. O método se mostrou linear na faixa de concentração de 7,0-75,0 μg/mL para os dois primeiros meios, e de 7,0-60,0 μg/mL para o TF (pH 7,4), seletivo, preciso e exato. A avaliação da solubilidade e da permeabilidade in vitro veio a confirmar os dados obtidos in silico. A solubilidade da EREC, por meio da avaliação utilizando o método da agitação orbital em frasco, atingiu o equilíbrio em 32 horas apresentando valores de LogS de -4,13, -4,18 e -4,34 para os meios TA (pH 4,5), FISSE (pH 6,8) e TF (pH 7,4), respectivamente. A permeabilidade por sua vez, foi avaliada por meio do ensaio em membrana artificial paralela (PAMPA), o qual possibilita o uso de pequenas quantidades de substância, sendo o método mais utilizado no processo de descoberta de novos fármacos. Por se tratar de um novo ensaio, foi necessária a validação dos métodos para a quantificação dos fármacos padrão de baixa e alta permeabilidade: furosemida e cloridrato de propranolol, e para a eremantolida C, em um novo intervalo linear. Todos se mostraram linear, seletivo, preciso e exato, dentro do intervalo proposto, para os meios FISSE (pH 6,8) e TF (pH 7,4). Para a EREC foi encontrado o valor de permeabilidade efetiva de 30,4x10-6 cm/s o que confirma a sua alta permeabilidade, uma vez que apresentou resultado superior ao do cloridrato de propranolol (9,23x10-6 cm/s), fármaco utilizado como padrão de alta permeabilidade nos testes de PAMPA, nos quais foram utilizados o FISSE (pH 6,8) e o TF (pH 7,4) como compartimentos doador e receptor, respectivamente. Dessa forma, a medida da permeabilidade juntamente com a solubilidade permite predizer a absorção gastrointestinal de substâncias candidatas a fármacos, como a eremantolida C.Item Avaliação da toxicidade aguda do antimônio trivalente : formas livres ou lipossomal associadas ou não à administração de ácido ascórbico.(2013) Licio, Carolina Souza Andrade; Barcellos, Neila Marcia Silva; Teixeira, Mônica Cristina; Raposo, Nádia Rezende Barbosa; Rezende, Simone Aparecida; Barcellos, Neila Marcia SilvaCompostos antimoniais são utilizados no tratamento das Leishmanioses, porém há lacunas importantes a respeito dos seus mecanismos de ação e toxicidade. Formulações lipossomais foram desenvolvidas objetivando promover menor toxicidade e maior eficácia desses compostos. Visando dar continuidade aos trabalhos anteriores de nosso grupo de pesquisa com o SbIII na forma lipossomal e com a potencial ação cardioprotetora do ácido ascórbico (AA) quando associado ao SbIII, este trabalho avaliou a toxicidade aguda não clínica de duas formulações lipossomais de SbIII, convencional (LCSbIII) e peguilada (LPSbIII) associadas ou não à administração de AA, após sua administração por via intraperitoneal (IP), em camundongos Swiss. As preparações lipossomais foram realizadas pelo método de congelamento/descongelamento, seguido de extrusão. Para quantificação do SbIII nessas formulações realizou-se a revalidação de um método analítico por ICP-OES. O percentual de encapsulação obtido foi de, aproximadamente, 15% para LCSbIII e de 14% para LPSbIII . Em média, os tamanhos das partículas foram de 170 a 230 nm, para ambas as formulações, com índice de polidispersão inferior a 0,3. LPSbIII foi mais estável por 30 dias e apresentou perfil de liberação in vitro mais lento. Para determinação da dose limite (DL) de SbIII utilizou-se o método do “Teste de Doses Fixas” (TDF), no qual foram utilizadas as doses: 17, 18, 19 e 20 mg.kg-1. A dose única de 18 mg.kg-1 (DL) de SbIII livre induziu claros sinais de toxicidade e alterações histopatológicas qualitativas. No estudo de toxicidade aguda, as administrações de SbIII livre e SbIII+AA induziram perda de peso corporal nos animais, mortalidade significativa e sinais clínicos de toxicidade, como: ataxia, piloereção, tremores, convulsões e elevados níveis de ALT, AST e fosfatase alcalina. Nesses grupos, observou-se degeneração celular, presença de pigmentos de hemossiderina e necrose tecidual no fígado. Também foram observadas esclerose glomerular nos rins e necrose no baço. Em geral, os lipossomas reduziram a frequência e a intensidade dos sinais clínicos de toxicidade, além de não ter sido observada a presença de mortalidade. Lesões histológicas de maior gravidade também não foram observadas nos tratamentos lipossomais. Nos diferentes grupos estudados não foram observadas alterações importantes nas análises de hemácias, hematócrito, monócitos e neutrófilos. A associação da administração de AA com SbIII, nas formas livre ou lipossomais, não produziu efeito protetor em fígado, baço e rins contra a toxicidade desse semimetal nas condições experimentais avaliadas. Porém, os seus efeitos tóxicos foram reduzidos com a utilização dos lipossomas convencionais e peguilados.Item Avaliação da toxicidade do antimoniato de meglumina.(Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. CIPHARMA, Escola de Farmácia, Universidade Federal de Ouro Preto., 2008) Kato, Kelly Cristina; Barcellos, Neila Marcia SilvaNo Brasil, o antimoniato de meglumina, medicamento à base de antimônio, é o fármaco de primeira escolha na terapêutica da leishmaniose. O alto custo do tratamento é um desafio que deve ser ultrapassado e que justifica a busca por alternativas terapêuticas. Assim, a disponibilidade de produtos sintéticos pode facilitar economicamente estudos de fármacos antimoniais pentavalentes e propiciar o desenvolvimento de novos medicamentos; por isto dois simples e eficientes métodos de obtenção de antimoniato de meglumina, utilizando como fonte de antimônio V SbCl 5 (produto AM) ou KSb (OH) 6 (produto AM1), foram desenvolvidos por Demicheli e cols. (1999-PI 9907575-0 e 2001-PI 0106305-7), e vêm sendo aplicados em diferentes estudos, uma vez que a análise dos mesmos mostrou similaridade com o fármaco comercial (Glucantime®) (Demicheli et al., 2003). No entanto, mesmo sendo os antimoniais fármacos empregados a muito tempo no tratamento da leishmaniose mostrando elevada efetividade, induzem efeitos adversos após sua aplicação, tais como: anormalidades no eletrocardiograma e nos níveis de transaminases, pancreatite e nefrotoxicidade. Neste contexto, este trabalho teve por objetivo avaliar a toxicidade pancreática, hepática, renal e cardíaca, do antimoniato de meglumina obtido por diferentes rotas sintéticas: SbCl 5 (AM) e KSb (OH) 6 (AM1) e comercial (GLUC), no modelo ratos Wistar através de dosagens bioquímicas de amilase, AST, ALT, fosfatase alcalina, dosagens urinárias de sódio, potássio e proteínas, depuração de creatinina e CKMB; análise de ECG e PA; além de análise histológica dos órgãos em dois protocolos de administração dos fármacos: A: sub-agudo no qual os animais receberam 50 mg SbV/kg/dia VIP por até 30 dias,e foram realizadas análises nos dias 3, 7, 15 e 30 dias; e B: protocolo agudo no qual dose única de 500 mg de SbV/kg, foi administrada VIV. Inicialmente, para caracterização dos fármacos foram realizados doseamentos de SbIII e potássio residuais. Os resultados mostraram que os teores de Sb III nos fármacos AM, AM1 e GLUC, foram de 0,2%; 0,011% e 0,12% e de potássio 39,0; 113,0 e 10,2 mmol/L, respectivamente.A avaliação da toxicidade pancreática mostrou que AM, AM1 e GLUC, induziram alterações crescentes no teor de amilase, porém microscopicamente, apenas no tratamento agudo, pequena congestão celular pode ser identificada; estes resultados indicaram apenas indução de leve toxicidade pancreática nas condições experimentais empregadas. A avaliação hepática mostrou elevação sérica de AST induzida pelo tratamento com GLUC por 30 dias (423,2 U/L) em relação ao grupo controle (155,7 U/L) bem como de fosfatase alcalina induzida pelo tratamento por 15 e 30 dias com AM (231,8 e 260,0 U/L, respectivamente) em relação ao grupo controle (163,3 e 183,2 U/L), possíveis indicativos de toxicidade sub-aguda induzida pelos fármacos. No entanto, a análise histológica, não revelou alterações significativas, exceto por leve congestão hepática na administração aguda. Quanto à avaliação renal foi observada leve alteração de parâmetros bioquímicos: aumento significativo na variação de potássio (AM-15 (60,9%); AM1- 3 (45,0%) e 15 (44,2%) e GLUC-3 (40,4%) e 7 dias (53,6%) e sódio (AM- 15 dias (163,8%) em relação ao grupo controle que mostrou para variação de potássio em 3, 7 e 15 dias (-12,6%, -15,7% e -9,6% respectivamente) e para sódio (-0,6%). Já análise histológica apresentou também leve congestão tecidual apenas no tratamento agudo. Estes resultados foram considerados indicativos da não ocorrência de lesões renais). A avaliação cardiovascular não revelou diferenças significativas nas dosagens bioquímicas de CKMB em ambos os protocolos estudados e a análise histológica apresentou apenas leve congestão após administração em dose única no protocolo agudo, assim como nos outros órgãos. Já os sinais de ECG, obtidos após administração por até 30 dias dos fármacos estudados, protocolo sub-agudo, não mostraram diferenças significativas para o intervalo PR e para o complexo QRS houve diferença significativa apenas para AM1 após 15 dias (AM1 28,8% e AM cont 23,1%). Já o intervalo QT apresentou aumento significativo nos tempos de 15 (AM 89,3% e AM cont 71,8%). e 30 (AM 88,4% e AM cont 72,2%). dias para o AM e nos tempos 7 (AM1 103,2% e AM1 cont 84,0%). e 15 (AM1 115,1% e AM1cont 92,2%). dias para o AM1; não tendo sido observada diferença significativa para o GLUC, embora sua administração tenha induzido a aumentos da ordem de 10% neste parâmetro. Quanto à avaliação de QTc, foram observados aumentos significativos: induzidos por AM em todos os tempos avaliados sendo observado os seguintes valores para o período controle e após administração: 131,0% e 161,8% para o tempo de 3 dias; 137,5% e 158,8% para 7 dias; 138,4% e 166,2% para 15 dias e 135,6% e 135,6 % para 30 dias.. e após 7 dias de administração do AM1 (AM1 181,7% e AM1 cont 157,4%). Por outro lado, a avaliação destes parâmetros cardiovasculares após administração de dose única de 500 mg/Kg, no protocolo agudo, não induziu variações significativas em nenhum parâmetro de ECG analisado. Os dados obtidos de pressão arterial (PA) e freqüência cardíaca (FC) no protocolo sub-agudo mostraram, respectivamente, significativa queda da PA induzida por AM1 no tempo 15 dias (PAS 63,0 e PAD 47,4 mmHg) em relação ao grupo controle (PAS 103,8 e PAD 67,2 mmHg),. e significativa bradicardia induzida por AM no tempo de 15 dias (AM 392 bpm e AMcont 432 bpm). Estes resultados mostram que os fármacos AM, AM1 e GLUC não induziram danos cardíacos significativos, indicando relativa segurança na utilização destes nas condições estudadas.Os dados obtidos neste estudo mostraram correlação de toxicidade hepática, renal e cardíaca com o fármaco AM que apresentou maior teor residual de SbIII (0,2%) e correlação de toxicidade renal e cardíaca com o fármaco AM1 que apresentou maior teor residual de potássio (113 mmol/L). No entanto, a análise conjunta dos dados das análises bioquímica, histológica e de alterações de ECG e PA, revelaram uma similaridade e relativa segurança na administração de AM, AM1 e GLUC tanto no protocolo sub-agudo onde foi utilizada a dose de 50 mg SbV/kg/dia por até 30 dias, quanto no protocolo agudo, onde uma dose dez vezes maior (500 mg SbV/kg) foi avaliada, uma vez que não houveram dados que evidenciassem lesões pancreáticas, hepáticas, renais ou cardiovasculares nessas condições experimentaisItem Biopharmaceutics classification system : importance and inclusion in biowaiver guidance.(2015) Arrunátegui, Lorena Barbosa; Barcellos, Neila Marcia Silva; Bellavinha, Karime Rezende; Ev, Lisiane da Silveira; Souza, Jacqueline deO tratamento farmacológico é essencial frente a várias patologias e é fundamental que a política de medicamentos tenha por objetivo oferecer à população tratamento seguro, eficaz e de preço acessível. Uma forma de alcançar esse objetivo é por meio da bioisenção, definida como a substituição de estudos de bioequivalência in vivo por estudos in vitro. Para bioisentar novos medicamentos sob a forma farmacêutica sólida oral de liberação imediata são utilizados dados de permeabilidade intestinal e solubilidade do fármaco, bem como sua dissolução a partir da forma farmacêutica. O Sistema de Classificação Biofarmacêutica (SCG) é um esquema científico que divide os fármacos em classes de acordo com solubilidade e permeabilidade e vem sendo utilizado como critério para bioisenção em diversas legislações. O presente artigo faz uma avaliação desta utilização, abordando os conceitos gerais e parâmetros utilizados pelo SCB, fazendo um relato histórico da aplicação da bioisenção, das exigências pertinentes às legislações vigentes, dos benefícios e riscos inerentes a uma tomada de decisão sobre bioisenção baseada neste critério. Os resultados revelaram que a utilização do SCB como critério amplia enormemente as possibilidades de bioisenção, contribuindo para o maior acesso da população em geral a medicamentos com garantida eficácia, segurança e menor custo.Item Candesartana cilexetila : um candidato a bioisenção e ao programa farmácia popular do Brasil?(2017) Campos, Débora Priscila de; Souza, Jacqueline de; Barcellos, Neila Marcia Silva; Fernandes, Christian; Gurgel, Leandro Vinícius Alves; Souza, Jacqueline deO Programa Farmácia Popular do Brasil foi desenvolvido pelo Ministério da Saúde com o intuito de ampliar o acesso da população a medicamentos considerados básicos e essenciais e atualmente distribui gratuitamente medicamentos, preferencialmente genéricos, para o tratamento da hipertensão arterial. Dentre eles encontra-se a losartana, membro da classe dos antagonistas dos receptores de angiotensina II. Porém, diversos estudos publicados demonstraram a superioridade de outros representantes desta classe sobre a losartana, especialmente a candesartana cilexetila, um pró-fármaco. Para propor a inserção da candesartana cilexetila no Programa, contribuir para o registro de novos medicamentos genéricos do pró-fármaco e avaliar a sua solubilidade em condições fisiológicas, visto que dados da literatura a este respeito são controversos, o presente trabalho visa avaliar a solubilidade e permeabilidade da candesartana cilexetila, bem como, sua dissolução a partir de produtos sob a forma farmacêutica comprimidos, comparando os resultados experimentais com as informações obtidas da literatura e da Química Quântica para subsidiar sua classificação de acordo com o Sistema de Classificação Biofarmacêutica. Para tal foi desenvolvido e validado um método por cromatografia à líquido de alta eficiência empregando coluna C18 (50 x 4,6 mm d.i., 5,0 μm), fase móvel composta por acetonitrila e água acidificada com ácido acético 0,1 % (60:40 v/v), vazão de 1,2 mL/min e detector de fluorescência. O método demonstrou ser seletivo, linear nas faixas de 0,4-1,4 μg/mL (pH 1,2), 0,5-1,8 μg/mL (pH 6,8) e 1,0-25,0 μg/mL (pH 6,8 com polissorbato 20), preciso, exato e robusto quando mantidas as condições cromatográficas demonstrando assim ser adequado para a quantificação do pró-fármaco nos testes de solubilidade e dissolução. A solubilidade em equilíbrio da candesartana cilexetila foi avaliada em meios tamponados no intervalo de pH entre 1,2 e 6,8 sendo de 0,42 μg/mL no meio pH 1,2 e 0,66 μg/mL no meio pH 6,8. A razão entre a maior dose terapêutica e a solubilidade proporcionaram os valores 76.190,48 mL e 48.484,85 mL, que apontaram a candesartana cilexetila como de baixa solubilidade. Os resultados da Química Quântica demonstraram que dois grupos principais estão envolvidos na solvatação da candesartana cilexetila, o benzimidazol e o tetrazol-bifenil. A biodisponibilidade absoluta de 14 % relatada na literatura para o fármaco permite classificar a candesartana cilexetila como de baixa permeabilidade. Desta forma podendo inferir que o pró-fármaco pertence à classe IV do Sistema de Classificação Biofarmacêutica, o que inviabiliza a possibilidade de bioisenção de novos produtos. No mercado nacional são encontrados 15 medicamentos contendo candesartana cilexetila na dose de 16 mg, a maioria dos produtos possui o excipiente polietilenoglicol que conhecidamente apresenta efeito inibidor sobre a glicoproteína-P, podendo deste modo interferir na sua absorção, por competir com o sítio de ligação desta proteína de membrana. Destes 15 medicamentos, dois (referência e genérico) foram selecionados e comparados quanto aos perfis de dissolução, que demonstraram ser estatisticamente diferentes, p < 0,05. Quanto ao Programa Farmácia Popular do Brasil, foi realizado um levantamento bibliográfico a respeito do seu histórico e critérios utilizados para a inclusão de produtos no elenco de medicamentos distribuídos e espera-se com estes dados contribuir para a sua ampliação ou avaliação da possibilidade ou não de inserir a candesartana cilexetila neste elenco.Item Caracterização de aspectos farmacológicos e biofarmacêuticos de antidiabêticos orais da classe dos inibidores da dipeptidil peptidase-4.(2017) Mapa, Bruna de Carvalho; Barcellos, Neila Marcia Silva; Souza, Jacqueline de; Volpato, Nádia Maria; Guimarães, Andrea Grabe; Barcellos, Neila Marcia SilvaO Diabetes Mellitus (DM) é uma doença metabólica crônica de alta prevalência, sendo a forma mais frequente a DM tipo 2 (DM2). Os novos antidiabéticos orais (ADO) da classe dos inibidores da dipeptidil peptidase-4 (IDPP-4) se apresentam como alternativa eficaz e segura ao tratamento do DM2. Porém, o elevado custo dos IDPP-4 disponíveis no mercado brasileiro, dificulta sua inserção em políticas públicas do Sistema Único de Saúde (SUS). Os medicamentos genéricos e similares se apresentam como alternativa para ampliação do acesso a esses medicamentos. A garantia da equivalência terapêutica é fornecida pela obrigatoriedade da realização de estudos in vivo de biodisponibilidade comparativa: denominada bioequivalência (BE) para genéricos e biodisponibilidade relativa (BR) para os similares. O Sistema de Classificação Biofarmacêutica (SCB), criado em 1995, vem sendo utilizado pelas agências FDA, EMA e ANVISA, como uma ferramenta regulatória visando avaliar a possibilidade de substituir os estudos in vivo de BE/BR por estudos in vitro, ou seja, bioisentar alguns fármacos veiculados em formas farmacêuticas sólidas de liberação imediata (FFSOLI) e, com isso, aumentar os medicamentos disponíveis, vendidos a um menor custo e com segurança comprovada. Segundo o SCB, os fármacos são agrupados em quatro classes de acordo com sua solubilidade e permeabilidade. Atualmente são considerados como possíveis candidatos à bioisenção fármacos de classe I e III para a EMA, FDA e OMS e fármacos de classe I para a ANVISA. Assim, foi identificada por nosso grupo de pesquisa a importância da realização de estudos que avaliem e discutam: (1) a importância farmacológica da utilização terapêutica destes medicamentos (2) as características biofarmacêuticas, principalmente de solubilidade e permeabilidade destes fármacos, identificando-as para que viabilizem uma definição da classificação destes pelo Sistema de Classificação Farmacêutica (SCB); e, subsequente utilização desta classificação como critério para avaliação da possibilidade de bioisenção no desenvolvimento e registro de novos medicamentos contendo estes fármacos. Adicionalmente, foi desenvolvido e validado o método analítico por CLAE, para quantificação do fosfato de sitagliptina nos meios fluido gástrico simulado sem enzina (pH 1,2), tampão acetado (pH 4,5) e suco entérico simulado sem enzina (pH 6,8); o qual mostrou-se adequado para faixa de concentração de 50 a 150 μg/mL. O método foi aplicado ao estudo da solubilidade em equilíbrio do fosfato de sitagliptina e os resultados permitiram sua definição como um fármaco de alta solubilidade (razão dose/solubilidade < 250 mL) nos meios biorrelevantes estudados (0,9702 mL para o meio pH 1,2, 1,19 mL para o meio pH 4,5 e 1,60 mL para o meio pH 6,8). Adicionalmente, os dados de biodisponibilidade em humanos (87%) da literatura, bem como o valor de log P (1,85) obtido in silico, classificam o fosfato de sitagliptina como um fármaco de alta permeabilidade. Assim, este fármaco pôde ser definido como de classe I pelo SCB. Ao serem avaliados os critérios de bioisenção relativos a: classificação pelo SCB, farmacocinética linear, adjuvantes presentes e dissolução a partir de FFSOLI, para o fosfato de sitaglipitina, pode-se concluir que novos medicamentos contendo este fármaco poderão ser bioisentos, desde que cumpram com os requisitos de dissolução na comparação com o medicamento de referência (85% em 30 minutos).Item Classificação biofarmacêutica do cloridrato de fexofenadina e avaliação das condições para estudos de dissolução da suspensão oral.(2017) Rosa, Lorena de Sousa; Souza, Jacqueline de; Marinho, Flávia Dias Marques; Porta, Valentina; Barcellos, Neila Marcia Silva; Souza, Jacqueline deO objetivo do presente trabalho foi realizar estudos de dissolução para o cloridrato de fexofenadina na forma farmacêutica suspensão oral e avaliar os dados de solubilidade e permeabilidade para elucidar a sua classificação biofarmacêutica. Para tanto, foi desenvolvido um método por cromatografia a líquido de alta eficiência para quantificação do fármaco aplicado aos estudos de dissolução e solubilidade. O método, validado de acordo com o estabelecido na resolução 899/2003 da Anvisa, compunha-se de fase móvel tampão fosfato de sódio 25mM pH 6,8: acetonitrila (68:32 v/v), coluna Zorbax Eclipse® C18, fluxo 1mL.min-1 , temperatura de 30 °C e volume de injeção de 20μL. O estudo de solubilidade foi desenvolvido utilizando o método da agitação orbital em frasco, à temperatura de 37 °C±1 °C e agitação de 100 rpm por 12h nos meios tamponados compostos de ácido clorídrico pH 2,0, acetato pH 4,5 e fosfato pH 6,8. Esses mesmos meios foram utilizados no desenvolvimento do teste de dissolução. Nesse ensaio, 5mL da suspensão oral de cloridrato de fexofenadina foram inseridos em cubas contendo 900mL dos meios, com auxílio de seringas de vidro as quais foram pesadas cheias e após esvaziadas. O ensaio foi realizado com uso do aparelho pá, a 37°C ± 0,5 °C, nas velocidades de agitação 25 e 50 rpm. Alíquotas de 5mL foram coletadas, com reposição de mesmo volume de meio, filtradas em membranas PVDF de 0,45μm e quantificadas, sem diluição. Os dados relativos à permeabilidade do fármaco foram obtidos por meio de pesquisa bibliográfica em bases de dados científicas. Os excipientes da formulação da suspensão oral foram catalogados e classificados quanto à sua função, e suas interferências na dissolução foram pesquisadas na literatura científica. O estudo de solubilidade indicou que o cloridrato de fexofenadina é um fármaco de baixa solubilidade, com razão dose/solubilidade de 326,55mL no tampão pH 2,0; para o tampão pH 4,5, 2.456,33mL; e para o tampão pH 6,8, 1.021,16mL. No estudo de dissolução, a velocidade de rotação de 25rpm foi mais adequada para rotina no controle de qualidade. A forma de inserção da amostra tem grande influência na homogeneidade dos perfis de dissolução. Pode ser estabelecido como critério de aceitação a cedência de 85% em 30 min com base nos resultados obtidos e no tempo de esvaziamento gástrico. A dissolução ocorreu adequadamente no tampão ácido clorídrico pH 2,0 e provavelmente não seria uma etapa limitante da absorção da fexofenadina a partir da suspensão. Observou-se que dois excipientes da formulação podem ter auxiliado no aumento da dissolução. Quanto à permeabilidade, o cloridrato de fexofenadina foi considerado pouco permeável, assim, pertence à classe IV do Sistema de Classificação Biofarmacêutica.Item Desenvolvimento e validação de um método bioanalítico para estudos de farmacocinética e biodistribuição do fármaco anti-chagásico benznidazol em modelo murino.(2015) Melo, Luísa Helena Perin de; Carneiro, Cláudia Martins; Vieira, Paula Melo de Abreu; Carneiro, Cláudia Martins; Peccinini, Rosângela Gonçalves; Vieira Filho, Sidney Augusto; Barcellos, Neila Marcia SilvaO benznidazol (BNZ) é o único fármaco empregado no tratamento da doença de Chagas no Brasil. Parte da ineficiência do BNZ pode estar relacionada a sua distribuição inadequada entre os tecidos. Portanto, o objetivo deste trabalho foi monitorar e avaliar os perfis farmacocinéticos do BNZ em amostras de plasma e tecidos de camundongos. Para isso foi desenvolvido e validado um método bioanalítico utilizando CLAE-UV destinado a quantificar o BNZ e o padrão interno em matrizes biológicas previamente tratadas pela extração líquido-líquido com acetato de etila e validado de acordo com as especificações da European Medicines Agency – Science Medicines Health (EMEA). O método desenvolvido foi linear na faixa de concentração de 0,1 a 100,0 μg/mL para o baço, cérebro, coração, cólon, duodeno, plasma, pulmão e rim e 0,2 a 100,0 μg/mL para estômago e fígado e demonstrou ser sensível com resultados precisos e exatos. Além disso, constatou-se a estabilidade do BNZ ao ser submetido a diferentes condições de manipulação exigidas pelo método. Para os estudos de farmacocinética e biodistribuição foram utilizados cinquenta camundongos Swiss, fêmeas, com trinta dias de idade, necropsiados nos tempos de 0,16; 0,33; 0,50; 0,75; 1; 2; 3; 4; 5 e 6 hs após a administração, por gavagem, de uma dose única de 100 mg/kg de BNZ, após jejum de doze horas. Os parâmetros farmacocinéticos foram determinados aplicando o modelo monocompartimental. A absorção do BNZ foi relacionada com os dados de área sob a curva (ASC), concentração plasmática máxima (Cmáx) e o tempo para atingir a concentração máxima (tmáx). A distribuição reversível do fármaco da circulação para os tecidos e órgãos foi relacionada ao volume de distribuição (Vd/F). O metabolismo do fármaco foi representado pela meia-vida de eliminação (t1/2β) e sua excreção pelo Clearance (Cl/F). Além disso, foi calculado o tempo médio de residência (TMR). Os parâmetros farmacocinéticos confirmam a rápida absorção do BNZ, quando administrado por via oral e os parâmetros de biodistribuição demonstraram que, em geral, apesar das concentrações nos órgãos terem sido diferentes, a t½β e o TMR foram semelhantes: plasma (Cmáx=41,61μg/mL; tmáx=0,83h; MRT=3,86h; t1/2β=2,03h; Vd/F=38,81mL; Cl/F=13,29mL/h), estômago (Cmáx=127,95 μg/mL; tmáx=0,67h e MRT=2,66h), pulmão (Cmáx=34,58μg/mL; tmáx=0,63h e MRT =2,74h), coração (Cmáx=21,68μg/mL; tmáx=0,67h e MRT =2,42h), cólon (Cmáx=18,11 μg/mL; tmáx=0,67h e MRT =2,03h) baço (Cmáx=27,73μg/mL; tmáx=0,58h e MRT =1,79h), duodeno (Cmáx=8,48μg/mL; tmáx=0,83h e MRT =2,14h), cérebro (Cmáx=12,39 μg/mL; tmáx=0,75h e MRT =2,01h), rim (Cmáx=6,98μg/mL; tmáx=0,49h e MRT =2,00h) e fígado (Cmáx=1,76μg/mL; tmáx=0,75h e MRT 3,41h). A biodistribuição do BNZ ocorre de maneira ampla, atingindo altas concentrações inclusive nos órgãos de maior relevância na infecção pelo Trypanosoma cruzi, coração e cólon.Item Development and validation of an analytical method for quantification of arsenic and antimony in liposomes using inductively coupled plasma-optical emission spectrometry.(2013) Reis, Priscila Gomes dos; Abreu, Adriana Trópia de; Guimarães, Andrea Grabe; Teixeira, Mônica Cristina; Souza, Jacqueline de; Barcellos, Neila Marcia SilvaArsenic and antimony compounds are used to treat endemic diseases, such as cancer, leishmaniasis, and schistosomiasis, in spite of their toxicity. Several studies seeking the development and characterization of nanocarrier systems such as liposomes are being carried out with the aim of developing new drug delivery systems and minimizing the toxicity of these drugs. However, the lack of reference methods to quantify these semimetals within a liposomal matrix hinders the QC of these formulations. Therefore, the validation of an analytical method for arsenic and antimony quantification in liposomal matrix by inductively coupled plasma-optical emission spectrometry is presented here. The linearity, specificity, LOD, LOQ, accuracy, and precision were determined according to the International Conference on Harmonization norms and the Brazilian Health Surveillance Agency (Resolution 899). The LOD values were 0.02 and 0.06 mg/L for antimony and arsenic, respectively. The LOQ for both was 3.0 mg/L, with an adequate accuracy within 98.26 and 101.32% for different levels of antimony and 99.98 and 100.36% for arsenic. Precision (CV) was lower than 5.0%. The developed and validated method was shown to be reproducible for quantification of arsenic and antimony in liposome pharmaceutical dosage forms.Item Effect of pyridostigmine on in vivo and in vitro respiratory muscle of mdx mice.(2017) Amancio, Gabriela de Cássia Sousa; Guimarães, Andrea Grabe; Haikel, Dridi; Moreau, Johan; Barcellos, Neila Marcia Silva; Lacampagne, Alain; Matecki, Stefan; Cazorla, OlivierThe current work was conducted to verify the contribution of neuromuscular transmission defects at the neuromuscular junction to Duchenne Muscular Dystrophy disease progression and respiratory dysfunction. We tested pyridostigmine and pyridostigmine encapsulated in liposomes (liposomal PYR), an acetylcholinesterase inhibitor to improve muscular contraction on respiratory muscle function in mdx mice at different ages. We evaluated in vivo with the whole-body plethysmography, the ventilatory response to hypercapnia, and measured in vitro diaphragm strength in each group. Compared to C57BL10 mice, only 17 and 22 month-old mdx presented blunted ventilatory response, under normocapnia and hypercapnia. Free pyridostigmine (1 mg/kg) was toxic to mdx mice, unlike liposomal PYR, which did not show any side effect, confirming that the encapsulation in liposomes is effective in reducing the toxic effects of this drug. Treatment with liposomal PYR, either acute or chronic, did not show any beneficial effect on respiratory function of this DMD experimental model. The encapsulation in liposomes is effective to abolish toxic effects of drugs.Item Effects of experimental conditions on solubility measurements for BCS classification in order to improve the biowaiver guidelines.(2021) Monteiro, Patrícia Fernanda; Barcellos, Neila Marcia Silva; Caldeira, Tamires Guedes; Reis, Adriana Cotta Cardoso; Ribeiro, Amanda Santos; Souza, Jacqueline deAmong the methods described for determining the solubility, shake-flask is suitable to evaluate the equilibrium solubility according to the BCS. Nevertheless, experimental conditions related to the shake-flask method are not well described. Evaluating the effects of experimental conditions on solubility measurements by shake-flask method is important and contributes in biowaiver decision. For this work, propranolol hydrochloride and nimesulide were used as model compound of high and low solubility, respectively. Equilibrium solubility was evaluated at 37 oC, 100 rpm during 48 hours in buffer media. Effects of the rotation speed, temperature, substance in excess and aliquot withdrawn were evaluated. Small variations of temperature caused significant differences in the solubility and then this parameter must be controlled. Excess of raw material influenced the results of the nimesulide, then, little excess is recommended. Rotation speed did not cause differences in the equilibrium solubilities, but at 150 rpm the equilibrium was reached faster. Aliquot did not present significant differences, but excessive withdrawn should be avoided. Therefore, the evaluation of equilibrium solubility using shake-flask method must be performed in physiological pH conditions, 37 ± 1 oC, substance in excess 10% above saturation, 50, 100 or 150 rpm and aliquot withdrawn not more than 10% of the media volume.Item Enhanced schistosomicidal efficacy of tartar emetic encapsulated in pegylated liposomes.(2003) Melo, Alan Lane de; Barcellos, Neila Marcia Silva; Demicheli, Cynthia Peres; Frezard, Frederic Jean GeorgesThe aim of the present study was to evaluate the ability of liposomes to improve the efficacy of tartar emetic (TA) against established Schistosoma mansoni infection. TA was used as a schistosomicidal drug model and both conventional liposomes (CL) and long-circulating pegylated liposomes (LCL) were evaluated. In the first experiment, TA, either free or encapsulated within CL or LCL, was given intraperitoneally (i.p.) as a single dose of 11 mg Sb/kg to mice experimentally infected with S. mansoni. Only the group treated with LCL showed a significant (55%) reduction in the worm burden, compared to the control groups (untreated or treated with empty LCL). In the second experiment, the efficacy of TA-containing LCL was evaluated at a higher dose (27 mg Sb/kg) by both subcutaneous (s.c.) and i.p. routes. Reduction levels of 67 and 82% were achieved by s.c. and i.p. routes, respectively. Strikingly, all mice survived to this high dose of antimony. This is in contrast with free TA that was lethal in 100% of mice at the same dose. The present work demonstrates that LCL reduce the acute toxicity of TA and effectively deliver this drug to S. mansoni during the late stages of parasite infection.Item Estudo sazonal e avaliação das atividades anti-hiperuricêmica e anti-inflamatória e da estabilidade de extratos etanólicos de Lychnophora passerina (Mart. ex. DC) Gardn.(2017) Ugoline, Bruno César de Albuquerque; Guimarães, Dênia Antunes Saúde; Souza, Jacqueline de; Pimenta, Lúcia Pinheiro Santos; Serra, Cristina Helena dos Reis; Guimarães, Andrea Grabe; Barcellos, Neila Marcia Silva; Guimarães, Dênia Antunes SaúdeNeste trabalho foi avaliada a influência da sazonalidade sobre o teor da lactona sesquiterpênica goiazensolida nos extratos etanólicos brutos de partes aéreas de L. passerina coletada no verão (EV), outono (EO), inverno (EI) e primavera (EP) e sobre as atividades anti-hiperuricêmica e anti-inflamatória. A goiazensolida foi isolada da fração hexano/acetato etílica obtida do extrato clorofórmico e sua estrutura química foi confirmada por meio de métodos espectrométricos usuais. Um método por CLAE empregando adição de padrão foi desenvolvido e validado para quantificação da goiazensolida em EV, EO, EI e EP, sendo um método inédito para a quantificação do marcador químico na espécie. A goiazensolida foi submetida à degradação forçada, por 24 horas, em meios alcalino e ácido, apresentando degradação completa nos referidos meios. O armazenamento da goiazensolida a 40 ºC promoveu uma redução de 35,4% no seu teor após as 24 horas. EV, EO, EI e EP apresentaram teores distintos da lactona sesquiterpênica. Soluções aquosas de EV, EO, EI e EP a 100 μg/mL foram avaliadas quanto à capacidade de reduzir in vitro a atividade da xantina oxidase (XO) e todos os extratos se mostraram ativos. Os tratamentos com os extratos EV e EO (125,0 e 250,0 mg/kg), e com a goiazensolida (10,0 mg/kg) reduziram os níveis séricos de ácido úrico em camundongos com hiperuricemia induzida por oxonato de potássio. Neste ensaio, a atividade da goiazensolida foi significativamente semelhante a do fármaco alopurinol. EV, EO, e EP, nas doses de 125,0 e 250,0 mg/kg, bem como a goiazensolida na dose 10,0 mg/kg, inibiram a atividade da XO hepática, evidenciando um dos prováveis mecanismos de ação anti-hiperuricêmica. Os animais tratados com EV e EO (125,0 e 250,0 mg/kg) e com a goiazensolida (5,0 mg/kg), tiveram o edema induzido por cristais de urato monossódico reduzido a partir de 24 horas do início do experimento. Não foram encontradas diferenças significativas entre a atividade antiedematogênica dos extratos, porém os resultados indicaram que EV e EP foram os extratos com maior efeito anti-hiperuricêmico. No ensaio do edema de pata induzido por carragenina, os tratamentos com EV, EO, EI, EP (125,0 e 250,0 mg/kg) e com a goiazensolida (10,0 mg/kg) foram capazes de reduzir significativamente o edema a partir da segunda hora de experimento. Os extratos não apresentaram atividade anti-inflamatória estatisticamente diferente, sugerindo que para o uso como agente anti-inflamatório a planta pode ser coletada em qualquer época do ano. O extrato EO e a tintura preparada com a espécie vegetal coletada na mesma estação (TO) foram avaliados quanto à estabilidade de longa duração a 30 °C, por 12 meses, e acelerada a 40 °C, por 6 meses. Parâmetros como características organolépticas, pH, densidade relativa e resíduo seco não apresentaram alteração significativa para ambas as amostras. O teor de goiazensolida foi maior que o limite estabelecido (≥ 90%) no primeiro mês de estudo de estabilidade acelerada, com decréscimo maior que 50% ao término dos 6 meses para EO e TO, cujos teores iniciais foram 6,6 ± 0,44 e 8,2 ± 0,79 % (p/p) e reduziram a 1,3 ± 0,17 e 3,9 ± 0,64 % (p/p); respectivamente. Nas condições de prateleira, o teor de goiazensolida reduziu a níveis abaixo do limite estabelecido pela Anvisa (≤ 10%) após o quarto mês de estudo. Desta forma, o extrato etanólico de L. passerina demonstrou ser uma promissora alternativa para a terapêutica da gota, devido às atividades anti-hiperuricêmica e anti-inflamatória apresentadas pelo mesmo, atuando de forma diferenciada e inovadora frente aos fármacos atualmente disponíveis.