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Influência da manutenção de Leishmania (Leishmania) amazonensis em meio de cultura axênico sobre a infecciosidade dos parasitos e sua correlação com a atividade ecto-nucleotidásica.
(Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto., 2008) Assis, Elisângela Aparecida de; Afonso, Luís Carlos Crocco
Parasitos pertencentes ao gênero Leishmania quando são mantidos em cultura por passagens sucessivas apresentam redução na infecciosidade. As cepas infectantes dos parasitos possuem maior atividade ecto-nucleotidásica do que as não infectantes. Para avaliar a existência de correlação entre o tempo de manutenção em cultura, a infecciosidade e a hidrólise de nucleotídeos em Leishmania amazonensis o parasito citado foi mantido em cultura por passagens sucessivas. Os parasitos mantidos em cultura por poucas passagens (p<15) apresentaram maior hidrólise dos nucleotídeos ATP, ADP e AMP e maior porcentagem de formas infectantes quando comparados com aqueles mantidos em cultura por várias passagens (p>100). Para avaliar o curso da infecção causada por passagens diferentes do parasito, os camundongos C57BL/6 foram inoculados na pata com formas promastigotas totais ou metacíclicas. O curso da infecção foi acompanhado por um período de oito semanas. Os camundongos inoculados com os parasitos mantidos em cultura por poucas passagens desenvolveram lesões maiores e produziram IFN- em menor quantidade quando comparados com o grupo de animais que recebeu o inóculo dos parasitos mantidos em cultura por várias passagens. Não foi verificada a produção de IL-4. O re-isolamento de parasitos, dos animais inoculados com os parasitos mantidos em cultura por várias passagens, mostra que apenas uma passagem pelo hospedeiro vertebrado não alterou a atividade ecto-nucleotidásica. O observado indica que a manutenção dos parasitos em cultura pode selecionar aqueles que apresentam reduzida atividade ecto-nucleotidásica. O tratamento dos parasitos mantidos em cultura por poucas passagens com adenosina causou alteração no metabolismo de nucleotídeos e na infecciosidade dos mesmos. Os dados sugerem a existência de correlação entre o tempo de manutenção em cultura, a infecciosidade e a atividade ecto-nucleotidásica em L. amazonensis.
The influence of ecto-nucleotidases on Leishmania amazonensis infection and immune response in C57B/6 mice.
(2010) Testasicca, Miriam Conceição de Souza; Assis, Elisângela Aparecida de; Gomes, Rodrigo Saar; Silva, Eduardo de Almeida Marques da; Melo, Maria Norma; Fietto, Juliana Lopes Rangel; Afonso, Luís Carlos Crocco
Previous results from our laboratory and from the literature have implicated the expression of ectonucleotidases in the establishment of Leishmania infection. In the present study we evaluated the correlation between ecto-nucleotidasic activity and the infectivity of L. amazonensis promastigotes that were kept in culture for short or extended numbers of passages, a condition that is known to decrease parasite infectivity. We also analyzed the immune response associated with the infection by these parasites. As expected, we found that long-term cultured parasites induce the development of smaller lesions than the short-term cultured counterparts. Interestingly, long-term cultured parasites presented reduced ecto-nucleotidasic activity. In addition, cells recovered from animals infected with long-term cultured parasites produced higher amounts of IFN-_ and have smaller parasite load, after 8 weeks of infection. Furthermore, after 1 week of infection, there is increased expression of the chemokine CCL2 mRNA in animals infected with short-term cultured parasites. Finally, infection of peritoneal macrophages by these parasites also shows marked differences. Thus, while short-term cultured parasites are able to infect a greater proportion of macrophages, cells infected by long-term cultured parasites express higher amounts of CXCL10 mRNA, which may activate these cells to kill the parasites. We suggest that the enzymes involved in metabolism of extracellular nucleotides may have an important role in infection by L. amazonensis, by acting directly in its adhesion to target cells and by modulating host cell chemokine production.