PPBIOTEC - Mestrado (Dissertações)
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Item Identificação de genes envolvidos na tolerância ao alumínio em Saccharomyces cerevisiae.(2022) Ferreira, Ludmila da Conceição; Cruz, Izinara Rosse da; Brandão, Rogélio Lopes; Cunha, Aureliano Claret da; Cruz, Izinara Rosse da; Brandão, Rogélio Lopes; Cunha, Aureliano Claret da; Magalhães, Cíntia Lopes de Brito; Santos, Fernanda GodoyA produção de etanol combustível representa um importante papel na economia de vários países, sendo os Estados Unidos, Brasil e China os maiores produtores mundiais. O bioetanol é um combustível renovável, sendo o biocombustível mais consumido no Brasil. A síntese do etanol é normalmente realizada com a obtenção de uma solução de açúcares, que são fermentados para produzir etanol, sendo este separado por destilação e purificado. A principal rota metabólica envolvida na fermentação alcoólica em leveduras é a glicólise. Diversos fatores fisiológicos podem influenciar no desempenho fermentativo da Saccharomyces cerevisiae, como o estresse osmótico, o estresse ácido, a contaminação bacteriana e a presença de níveis tóxicos de alumínio. Em virtude da fermentação ocorrer em condições ácidas, o alumínio, absorvido pela cana-de-açúcar em solos ácidos, provoca sérios problemas durante a fermentação. As cepas de leveduras industriais diferem bastante em relação à tolerância ao alumínio e, considerando o potencial de aplicação biotecnológica das leveduras, se faz necessário um estudo das bases genéticas envolvidas nesse fenótipo de tolerância. Neste contexto, o objetivo do presente projeto foi identificar no genoma da Saccharomyces cerevisiae genes que possam estar envolvidos na tolerância ao alumínio. Desse modo, localizou-se os genes presentes na região do QTL no cromossomo VI apontados por Mezadri (2018), envolvidos na tolerância ao alumínio em S. cerevisiae e avaliou-se a tolerância ao alumínio por meio de testes de crescimento contendo diferentes concentrações de alumínio. Para verificar se os genes candidatos a estarem envolvidos com a tolerância ao alumínio carregavam variantes genéticas que poderiam estar associadas ao fenótipo de interesse, as sequências de nucleotídeos desses genes foram alinhadas utilizando a ferramenta online Clustal Omega, para visualização e análise do alinhamento múltiplo das sequencias de nucleotídeos utilizou-se o programa Jalview 2 e para visualização das variantes genéticas utilizou-se a ferramenta IGV. Nossos resultados indicaram envolvimento de 18 genes com a tolerância ao alumínio e três tipos variantes genéticas sendo elas sinônima, missense e sem sentido, que permitem estudo de modificação de SNV. Além disso, nossos resultados fornecem dados promissores para melhoramento de cepas industriais para produção de bioetanol.Item Avaliação do potencial biotecnológico de derivados sintéticos de eugenol para o tratamento de Glioblastoma.(2023) Dias, Andreia da Silva; Oliveira, Laser Antônio Machado de; Nogueira, Katiane de Oliveira Pinto Coelho; Oliveira, Laser Antônio Machado de; Magalhães, Cíntia Lopes de Brito; Gazolla, Poliana Aparecida RodriguesAtualmente o câncer é uma das doenças que mais matam no mundo, mesmo com todo o avanço nos métodos de diagnósticos e nos procedimentos quimioterápicos. Associado às mutações que acontecem frequentemente no genoma das células cancerígenas, novos métodos de tratamento frequentemente não obtêm êxito. Com isso, as neoplasias são difíceis de se tratar e em muitas situações os tratamentos não curam essa enfermidade por completo. Dentre as neoplasias que podem acometer o sistema nervoso central encontramos os gliomas, tumores com origem a partir das células da glia. O tipo mais comum de glioma é o glioblastoma (GBM). Especificamente nesta doença, ainda que a ressecção tumoral apresente o melhor resultado possível, onde todo o tumor foi removido, existem células infiltrativas que escapam do procedimento cirúrgico, levando a uma recidiva da doença. Adjuvante à ressecção, o tratamento segue com a quimio e radioterapia, visando apenas a sobrevida que ainda é curta. A maioria dos pacientes diagnosticados com esta neoplasia não sobrevivem por mais do que 15 meses a partir do diagnóstico. Com base nesses resultados não esperançosos dos tratamentos comumente utilizados para o GBM e também pela característica difusa desse tumor, estudos acerca de novos procedimentos terapêuticos devem ser realizados. É sabido que os compostos naturais podem exibir atividade inibindo o crescimento de células cancerígenas, atuar no controle de certas vias de expressão gênicas que estão ligadas à atividade tumoral, assim como também apresentar efeitos antioxidantes, anti-inflamatórios e anti metastáticos. Um grande exemplo de produto natural que apresenta as atividades citadas é o eugenol. Por isso, esses compostos, e também outros fármacos obtidos a partir deles, representam um vasto campo de possibilidades para a obtenção de procedimentos terapêuticos seguros e eficazes. Dessa forma, o presente trabalho teve como objetivo avaliar o potencial biotecnológico de derivados do eugenol como possíveis candidatos a fármacos para o tratamento do glioblastoma. Para isto, utilizamos a linhagem U87MG e realizamos os ensaios in vitro de metabolismo celular (MTT) para triar e selecionar o composto com melhor atividade, migração por meio do ensaio de cicatrização de feridas, proliferação e formação de colônias. Com base nestes experimentos foi possível observar um efeito anti-tumoral do derivado 5V, inibindo todos os parâmetros analisados. Assim, este derivado se mostrou como um candidato promissor para o desenvolvimento de um novo fármaco para o tratamento do glioblastoma.Item Avaliação da atividade do canabidiol sobre o comportamento de camundongos fêmeas C57BL/6 em um modelo de depressão induzida pelo isolamento social.(2023) Pereira, Kenzawin Adliz; Nogueira, Katiane de Oliveira Pinto Coelho; Engel, Daiane Fátima; Oliveira, Laser Antônio Machado de; Nogueira, Katiane de Oliveira Pinto Coelho; Souza, Gabriela Guerra Leal de; Menezes, Cristiane Alves da SilvaO isolamento social (IS) se tornou uma realidade dentro do contexto pandêmico mundial. Um dos efeitos desta vivência pode ser o desenvolvimento do quadro de depressão maior (DM), resultando prejuízos sociais e cognitivos. Antes mesmo deste cenário a doença já era uma das mais prevalentes em todo o mundo atingindo 2,9% dos homens e 5,0% das mulheres. O estresse crônico é um importante fator de risco no aparecimento de vários distúrbios neuropsiquiátricos, incluindo ansiedade e depressão. Neste trabalho objetivamos investigar a relação entre as alterações comportamentais induzidas pelo estresse crônico do IS em camundongos adultos fêmeas e o tratamento com canabidiol (CBD), um fitocanabinoide extraído de plantas do gênero Cannabis que devido a suas propriedades medicinais tem sido considerado para o tratamento de diversas patologias. O CBD pode atuar no sistema nervoso central de diversas formas, incluindo por agonismo ao sistema endocanabinoide. Para avaliar o IS como mecanismo indutor de estresse em modelo animal, isolamos camundongos C57BL/6 fêmeas adultas por 16 semanas, de acordo com protocolo pré-estabelecido na literatura, para avaliar comportamentos semelhantes aos da DM, como a anedonia e prejuízos cognitivos. O modelo de indução da DM foi confirmado pelo teste de preferência pela sacarose e a partir deste resultado os animais foram tratados com CBD 30 mg/Kg, via gavagem e, posteriormente, avaliados nos testes comportamentais de Campo Aberto, Claro/Escuro, Reconhecimento do Novo Objeto e Natação Forçada. Os resultados apontaram o isolamento como um indutor efetivo do comportamento tipo depressivo. O tratamento com o CBD não trouxe prejuízos cognitivos ou motores aos animais, com base nos testes de Campo Aberto e Reconhecimento do Novo Objeto, mas também não pôde ser considerado agente protetor ao estresse agudo com base nos resultados do teste de Natação Forçada. Quanto ao tratamento prolongado com CBD os dados demonstraram efeito ansiogênico em fêmeas agrupadas consideradas saudáveis, sugerindo um possível efeito adverso para o uso do CBD na ausência de traços depressivos. O uso prolongado do CBD pode gerar ansiedade em fêmeas saudáveis, bem como o isolamento pode ser considerado um fator indutor de comportamento tipo-depressivo e ansioso, sem afetar a cognição ou habilidades motoras dos animais testados.Item Caracterização proteômica do extrato da glândula de aranhas do gênero Actinopus.(2021) Fernandes, Frederico Francisco; Borges, William de Castro; Borges, Marcia Helena; Borges, Marcia Helena; Cota, Renata Guerra de Sá; Braga, Thiago VeranoAs aranhas-de-alçapão do gênero Actinopus são sedentárias, passam a maior parte do tempo em suas tocas subterrâneas revestidas por seda e caçam por emboscadas. Estes motivos poderiam explicar o fato destes animais estarem menos presentes em nosso cotidiano, não serem relacionados à acidentes envolvendo humanos e, portanto, não serem considerados de importância médica. Entretanto, aranhas do gênero Actinopus apresentam uma proximidade filogenética com algumas espécies que são consideradas extremamente venenosas, como é o caso da Atrax robustus. Por outro lado, os estudos sobre aranhas do gênero Actinopus são escassos e até a presente data, nenhum é referente ao veneno. Portanto, considerando a ausência de estudos sobre o veneno desse gênero, bem como a sua proximidade com espécies de importância médica, este trabalho teve como objetivo realizar a caracterização proteômica do extrato da glândula de veneno de aranhas do gênero Actinopus. Para isso, alguns exemplares dessa aranha foram coletados na cidade de Rio Claro (SP), suas glândulas foram removidas, maceradas e sonicadas. A partir daí, esse extrato foi submetido a experimentos de SDS-PAGE unidimensional e nanocromatografia líquida acoplada com espectrometria de massas (LC-ESI- MS/MS). A eletroforese revelou diversas massas amplamente distribuídas ao longo das canaletas do gel e com predominância de componentes de baixa massa molecular. Nossos resultados indicaram a presença de vários peptídeos únicos e homólogos a componentes de venenos de espécies peçonhentas e de importância médica, além de moléculas que demonstram ser promissoras para aplicações biotecnológicas. Os resultados aqui obtidos contribuirão para ampliar o conhecimento a respeito da diversidade dos venenos animais e para identificação de moléculas potencialmente promissoras para o desenvolvimento da ciência e tecnologia.Item Caracterização da atividade antioxidante do fulerol em infecções por Zika virus e Chikungunya virus.(2023) Malta, Wellington Carvalho; Silva, Breno de Mello; Silva, Breno de Mello; Garcia, Camila Carrião Machado; Ferreira, Gustavo PortelaOs arbovírus, Zika virus e Chikungunya virus, são de grande importância na saúde pública, havendo milhares de casos todos os anos. Ambas apresentam risco de epidemias, geram incontáveis gastos à saúde pública, além da possibilidade de desencadear casos graves, levando ao óbito. A febre zika e a febre chikungunya apresentam sintomas característicos de arboviroses como cefaleia, febre, dores pelo corpo, musculares e nas articulações, ambas podem levar a complicações graves. Até o momento não há vacinas ou tratamentos aprovados para estes vírus, tornando necessário o desenvolvimento de terapias alternativas. Já é relatado o aumento de espécies reativas de oxigênio (EROs) durante infecções virais, estudos sugerem que a modulação de vias oxidativas pode estar relacionado à multiplicação viral e infecção de novas células, logo, o controle de EROs e normalização das vias do elemento de resposta antioxidante (ARE), podem ser estratégias no combate à infecção. O fulerol, um nanomaterial derivado do fulereno de carbono C60, com alto poder antioxidante e, capaz de sequestrar EROs, poderia ser uma alternativa. Nesse contexto, este trabalho objetivou caracterizar a atividade antioxidante do fulerol em infecções pelos vírus Zika e Chikungunya. Para tal, avaliou-se a citotoxicidade do composto em células VERO e MRC-5. A atividade antioxidante foi avaliada pelo teste de EROs intracelular através do indutor exógeno, peroxido de hidrogênio (H2O2), e no contexto das infecções pelos vírus supracitados. Avaliou-se também a modulação dos vírus na transcrição da principal via de resposta antioxidante (NRF-2/ARE), e os efeitos do tratamento com fulerol. Os resultados demonstraram que o fulerol não apresentou efeito citotóxico nas concentrações de 6250 a 0,76 nM, o peroxido, utilizado como indutor exógeno, não presentou citotoxicidade nas concentrações de 0,1 a 26,6mM no período do estudo. O fulerol foi capaz de reduzir os níveis de EROs, após indução com 1 e 10mM de peroxido, nas concentrações de 6,25 a 0,781 nM e 25 a 0,195 nM, respectivamente. O composto foi capaz de reduzir os níveis de EROs na infecção por Zika nas concentrações de 12,5 a 0,781 nM, e para o Chikungunya nas concentrações de 6,25 a 0,781 nM, sendo a concentração de 3,125 nM a que apresentou maior capacidade antioxidante em todos os contextos estudados. O fulerol em 3,125 nM foi capaz de normalizar a modulação negativa na atividade transcricional da via NRF-2/ARE causada pelo vírus Zika, porém não foi observado o mesmo efeito para o Chikungunya, dando indícios da diferença dos mecanismos de modulação promovida por cada vírus nessa via. O conjunto dos resultados sugere que o fulerol possui grande capacidade antioxidante e potencial para auxiliar no tratamento contra os vírus Zika e Chikungunya, ou na redução dos efeitos, causados por danos oxidativos, pela infecção.Item Avaliação da neurotoxicidade do peptídeo B-amiloide25-35 e da atividade das formas isolada de canabidiol e full spectrum em culturas de células HT22.(2023) Carmo, Raquel Cruz Ferreira do; Nogueira, Katiane de Oliveira Pinto Coelho; Oliveira, Laser Antônio Machado de; Nogueira, Katiane de Oliveira Pinto Coelho; Ribeiro, Iara Mariana Léllis; Menezes, Tatiana PrataA hipótese da cascata amiloide postula que a agregação do peptídeo beta amiloide (βA) no parênquima cerebral é o primeiro evento de uma cascata neurodegenerativa que culmina com o desenvolvimento da doença de Alzheimer (DA), uma forma de demência amnésia progressiva que causa a interrupção global das funções cognitivas do indivíduo. A neurotoxicidade do peptídeo βA está especialmente relacionada à sequência de aminoácidos 25-35 que corresponde ao peptídeo β-amiloide 25-35 (βA25-35), usado como modelo patomimético da DA em estudos que investigam os diversos eventos patogênicos observados na patologia. Entre as ações neurotóxicas do peptídeo βA25-35 está a produção exacerbada de espécies reativas (ERs), dessa forma, compostos com caráter antioxidantes são alvo de pesquisas na área no intuito de restabelecer o equilíbrio oxidativo interrompido pelo peptídeo. O canabidiol (CBD), fitocanabinoide não psicomimético presente em plantas do gênero Cannabis, possui ação antioxidante e, embora apresente potencial terapêutico, as pesquisas com o CBD ainda são incipientes diante da toxicidade amilóide e da atuação do fitocanabinoide em várias vias neuromoduladoras para além do sistema endocanabinoide. A compreensão das ações neurotóxica do peptídeo βA25-35 é dificultada pela sua complexidade bioquímica in vitro e in vivo, o que acarreta protocolos divergentes na literatura para diferentes tipos celulares. Assim, esse estudo explorou diferentes concentrações, formas de tratamentos e tempos de exposição ao peptídeo βA25-35 e ao CBD, nas formas isolada e full spectrum, em células hipocampais da linhagem HT22 para identificação de padrões de neurotoxicidade e neuroproteção. Foi observado que as concentrações de 5, 10 e 20 μM do peptídeo βA25-35 são neurotóxicas para a referida linhagem celular. Quanto aos CBDs, foi observado que o CBD isolado (CBDiso) na concentração de 10 μM reduz a viabilidade das células, enquanto o full spectrum (CBDful) não reduz a viabilidade das células mesmo na concentração mais alta avaliada, 40 μM. Na concentração de 5 μM, o CBDful mantém o equilíbrio oxidativo das células expostas ao peptídeo βA25-35 10 μM, diferente do observado para o CBDiso na mesma concentração. Na menor concentração avaliada, 1 μM, o pré-tratamento tanto com CBDiso quanto com CBDful não foi capaz de conter as ERs de oxigênio geradas pelo peptídeo βA25-35 5 μM. Os resultados indicam uma delicada associação dose-resposta entre diferentes concentrações de CBD e a neurotoxicidade exibida pelo peptídeoβA25-35 em diferentes concentrações, além disso, foi observado que o CBDful apresenta melhores resultados nas condições exploradas neste estudo.Item Análise proteômica comparativa de amostras de Trypanosoma cruzi pertencentes aos genótipos TcII e TcVI, isoladas de pacientes com doença de Chagas crônica.(2017) Inácio, Luciana de Jesus; Borges, William de Castro; Lana, Marta de; Oliveira, Maykon Tavares de; Borges, William de Castro; Palmisano, Giuseppe; Veloso, Vanja MariaO Trypanosoma cruzi é um parasito da ordem Kinetoplastida, agente etiológico da doença de Chagas (DCh), uma enfermidade de evolução crônica progressiva que afeta os sistemas cardiovascular, gastrointestinal e nervoso do hospedeiro humano. Esse protozoário é um parasito intracelular obrigatório que apresenta quatro estágios evolutivos: formas epimastigotas e tripomastigotas metacíclicas no sistema digestivo do inseto vetor; formas amastigotas (intracelulares) e tripomastigotas sanguíneas que parasitam o hospedeiro mamífero. A espécie está subdividida em seis genótipos distintos ou discret typing units (DTUs), nomeados TcI a TcVI, e TcBat. Vários estudos foram conduzidos visando correlacionar a variabilidade genética do T. cruzi com sua biologia e as manifestações clínicas da DCh, e a proteômica representa uma abordagem interessante para estudar mudanças globais na expressão de proteínas entre os diferentes genótipos. O objetivo deste trabalho foi caracterizar alguns parâmetros biológicos por meio de ensaios in vitro e realizar a análise proteômica quantitativa de amostras de T. cruzi pertencentes aos genótipos TcII e TcVI isoladas de pacientes com doença de Chagas crônica, provenientes do Vale do Jequitinhonha, MG. Para este fim, cada amostra de T. cruzi foi cultivada em meio LIT para determinação da curva de crescimento ao longo de 20 dias. A taxa de metaciclogênese foi avaliada em meio Grace. Células “Vero” foram infectadas com tripomastigotas obtidas da diferenciação em meio Grace para avaliar as taxas de infectividade e de multiplicação intracelular de cada amostra nos tempos de 24, 48 e 72 horas de cultivo. Os proteomas das três amostras de epimastigotas de T. cruzi (1107 – TcII, 229 e 2119 – TcVI; em fase exponencial) foram analisados por nano-UHPLC-MS/MS. Para identificação, quantificação label free e comparação das proteínas, foi utilizado o software PEAKS, versão 8, e a categorização das proteínas foi realizada pelo software Blas2GO versão 4.1. Os resultados obtidos revelaram diferenças significativas entre os genótipos TcII e TcVI. A amostra do genótipo TcII apresentou maior área sob a curva na análise do crescimento em meio LIT, enquanto as taxas de metaciclogênese, infectividade e desenvolvimento intracelular foram maiores nas amostras do grupo genético TcVI. A análise proteômica shotgun permitiu a identificação de 3833 proteínas, dentre as quais 212 exibiram expressão diferencial. Dessas proteínas, a maioria encontrava-se com a expressão aumentada nos isolados do genótipo TcVI. Este trabalho permitiu apontar diferenças biológicas e metabólicas importantes entre os isolados investigados e a identificação de possíveis assinaturas proteicas dos genótipos TcII e TcVI.Item Glioblastoma : avaliação in vitro de novo candidato terapêutico derivado do SRPIN340.(2023) Vieira, Ramony Gonzaga; Oliveira, Laser Antônio Machado de; Nogueira, Katiane de Oliveira Pinto Coelho; Oliveira, Laser Antônio Machado de; Silva, Silvana de Queiroz; Bressan, Gustavo CostaOs gliomas são tumores que afetam células da glia, as quais fazem parte do sistema nervoso e são responsáveis por dar suporte tanto mecânico quanto nutricional para os neurônios. Assim, doenças que afetam essas células podem acarretar uma vasta gama de disfunções ao organismo. Dentre o grupo de doenças denominadas gliomas se destaca o glioblastoma, caracterizado por alto grau de malignidade segundo a Organização Mundial da Saúde (OMS) e prognóstico ruim determinado principalmente por uma curta expectativa de vida e sintomas agressivos. Os tratamentos aplicados atualmente incluem a ressecção cirúrgica seguida de quimioterapia para a qual um dos principais medicamentos utilizados é a Temozolomida (TMZ), e/ou radioterapia. Entretanto, estas intervenções não garantem níveis satisfatórios de sucesso no tratamento, isso se deve principalmente à natureza altamente infiltrava desta neoplasia, que faz com que as células do tecido tumoral infiltrem no tecido saudável adjacente e permaneçam mesmo após a cirurgia. Outro fator que torna árduo o processo terapêutico é a resistência destas células residuais aos tratamentos de quimio e radioterapias subsequentes à execução cirúrgica. Neste cenário de ineficiência medicamentosa em que os pacientes estão sujeitos a uma baixa qualidade de vida exploramos um composto sintético na tentativa de sanar boa parte dos sintomas ocasionadas por esta doença. Tal composto, tratado aqui pelo código SM53, é um composto inspirado no SRPIN340, que por sua vez, é uma molécula que deriva de proteínas quinases com resíduo serina/arginina, sendo conhecida por exibir ação inibitória de proteínas SRPKs, principalmente SRPK1 e SRPK2. Dessa forma, o objetivo deste trabalho pauta a avaliação in vitro do candidato terapêutico SM53, visando maior efetividade contra células de glioblastoma humano, ao passo em que as células não tumorais permaneçam preservadas, evitando assim efeitos adversos ao organismo e garantindo qualidade de vida aos pacientes. Para tanto, os testes foram realizados em linhagem U87MG de glioblastoma humano e o composto foi triado por ensaio de citotoxicidade baseado no MTT. Os subsequentes ensaios realizados incluem, ensaio de proliferação celular, formação de colônia, migração celular e citotoxicidade em células não tumorais. As análises dos resultados apontam um potencial antineoplásico promissor por parte do candidato terapêutico SM53, uma vez que reduziu em cerca de 12% o metabolismo das células de glioblastoma humano da linhagem U87MG. Este resultado foi seguido de 83% de redução da formação de colônias e 64% de redução da 8 migração celular destas células. Acompanhando estes dados, demonstramos também que em linhagens não tumorais (3T3 e J774) o candidato terapêutico SM53 não demonstrou citotoxicidade significativa, indicando seletividade por linhagens tumorais. Isto nos permite que concluir que o composto SM53 é um candidato terapêutico promissor para o tratamento de glioblastoma multiforme.Item Avaliação do efeito da melatonina sobre culturas primárias de neurônios hipocampais submetidos à toxicidade pelo peptídeo β-amiloide25-35.(2023) Nascimento, Rosiene Gomes de Freitas; Nogueira, Katiane de Oliveira Pinto Coelho; Oliveira, Laser Antônio Machado de; Nogueira, Katiane de Oliveira Pinto Coelho; Ribeiro, Iara Mariana Léllis; Gomes, Sílvia de PaulaA Organização Mundial da Saúde reconhece as demências como prioridade global de saúde. A Doença de Alzheimer (DA) é a principal e a mais incapacitante demência que acomete a população idosa. Atualmente há 50 milhões de pessoas diagnosticadas no mundo e, em 2050, serão cerca de 150 milhões de indivíduos com a DA. Histopatologicamente a DA se caracteriza, pela hiperfosforilação intracelular da proteína tau e pela deposição do peptídeo β-amiloide (Aβ), principalmente no hipocampo, região envolvida na localização espacial, formação e consolidação de memórias. O Aβ é neurotóxico e ao se depositar nas placas senis desencadeia diversas alterações funcionais nas células, destacando aqui o aumento de espécies reativas de oxigênio (EROs). A contenção das EROs normalmente é realizada pelo sistema de defesa antioxidante endógeno composto por enzimas e moléculas antioxidantes. A melatonina, apesar de ser um neuro-hormônio envolvido na regulação do sono, também possui função antioxidante e, normalmente encontra-se em baixos níveis nos pacientes com DA. O tratamento da DA se baseia na terapêutica paliativa, visto que os medicamentos existentes não são capazes de conter o desenvolvimento da doença. Assim, o presente estudo avaliou a melatonina como uma alternativa terapêutica frente ao estresse oxidativo desencadeado pelo fragmento 25-35 do peptídeo β-amiloide em culturas primárias de neurônios hipocampais. Foram utilizados embriões de camundongo da linhagem C57BL/6 com 18 dias de desenvolvimento para avaliação do metabolismo celular, produção intracelular de EROs e peroxidação lipídica. O Aβ, na concentração de 10 μM, diminuiu o metabolismo celular, aumentou as EROs e a peroxidação lipídica nos neurônios. A melatonina, nas concentrações de 25 e 50 μM, apresentou efeito neuroprotetor em todos os ensaios, mostrando que no modelo experimental in vitro, tem potencial para se aliar à terapêutica da neurotoxicidade induzida pelo Aβ, contribuindo para novos testes visando tratamentos com potencial antioxidante frente ao estresse oxidativo na DA.Item Análise proteômica dos alvos ligantes de niclosamida em extrato solúvel de Limnoperna fortunei Dunker, 1857.(2023) Nilsen, Luis Henrique Flores; Borges, William de Castro; Andrade, Milton Hércules Guerra de; Borges, William de Castro; Sanson, Ananda Lima; Cabral, Fernanda JankuA espécie Limnoperna fortunei (Dunker, 1857), é um molusco bivalve, conhecido popularmente como mexilhão dourado o qual representa atualmente um sério problema ambiental e econômico. Este trabalho teve como objetivo a caracterização do proteoma solúvel de L. fortunei por meio de cromatografia de afinidade com imobilizante niclosamida para a prospecção de possíveis alvos ligantes desse moluscicida. Para este fim, a niclosamida foi reconstruída no adsorvente em resina de Sepharose 4B. O extrato total do mexilhão dourado, L. fortunei, foi aplicado à coluna de afinidade e após lavagens sucessivas da coluna, as proteínas ligantes foram eluídas com niclosamida/DMSO. Em seguida, procedeu-se com a identificação em larga escala das proteínas eluídas por meio de cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas (LC-MS/MS). A interrogação dos dados espectrais, contra o proteoma predito de L. fortunei, permitiu a identificação de 221 grupos de proteínas. A anotação das proteínas identificadas foi realizada por meio de busca de similaridade, utilizando o algoritmo BLASTp. Dentre as proteínas identificadas destacam-se aquelas pertencentes ao citoesqueleto, como actina beta 1, tubulinas (isoformas alfa e beta), além de proteínas relacionadas ao estresse e imunidade tais como proteínas de choque térmico, sendo elas: HSP90, HSP70 e HSP20 e calreticulin. Os resultados obtidos permitiram agregar conhecimento molecular ao mecanismo de ação da niclosamida bem como apontar novas possibilidades para intervenção no controle da proliferação deste molusco invasor.Item Montagem, anotação e análise comparativa do genoma mitocondrial de formiga cultivadora de fungo Mycetophylax conformis (Mayr, 1884).(2023) Vasconcelos, Helen Romualdo; Cristiano, Maykon Passos; Cardoso, Danon Clemes; Cruz, Izinara Rosse da; Paula, Alexandre Silva de; Travenzoli, Natália MartinsO DNA mitocondrial tem sido usado em estudos de diversos organismos acerca do conhecimento e composição de bancos de dados científicos visando o desenvolvimento de pesquisas em diversas áreas incluindo a biotecnologia. Um dos organismos alvos desse tipo de estudo são as formigas devido interesse em estudos de filogenia, evolução e marcadores moleculares. A espécie de formiga Mycetophylax conformis cultivadora de fungo simbionte basidiomiceto que habita ecossistemas de restinga possui poucos dados na literatura a respeito de seu genoma mitocondrial e potencial biotecnológico. Assim, o estudo propôs conhecer as bases genéticas envolvidas na composição do genoma mitocondrial de M. conformis para o fomento de bancos de dados genéticos. Para tanto realizou-se amostragem e extração do material genético seguido de sequenciamento, montagem e anotação. O genoma mitocondrial montado apresentou tamanho inferior ao de outras espécies de formiga com 14804 pb, sendo 22 genes de RNAs transportadores, 2 genes de RNAs ribossômicos, 13 genes codificadores de proteínas e região controle. Analisando a composição nucleotídica, 79% do mitogenôma é composto por A e T, os valores de ATskew e GCskew foram negativos, revelando assimetrias tendendo para mais bases T do que A e mais bases C do que G. O mitogenoma possui poucos espaços intergênicos e algumas sobreposições. Os genes codificadores de proteínas nad1, nad2 e nad6 envolvidos no Complexo I apresentaram tamanhos pequenos levantando questionamentos sobre sua função. Contudo, os demais genes esperados em um genoma mitocondrial foram encontrados em posições semelhantes à de outras espécies de formiga exceto pelo gene trnW que neste genoma encontra-se na fita negativa. Insights sobre o potencial biotecnológico são abordados no tocante a capacidade de modificação do habitat e sobrevivência em ambientes inóspitos que estas formigas possuem, ressaltando a importância do conhecimento destes organismos no desenvolvimento de estudos biotecnológicos.Item Avaliação da atividade do canabidiol sobre culturas primárias de neurônios hipocampais submetidos ao estresse com o peptídeo β - amiloide 25 - 35.(2023) Salgado, Karen del Carmen Barboza; Nogueira, Katiane de Oliveira Pinto Coelho; Oliveira, Laser Antônio Machado de; Nogueira, Katiane de Oliveira Pinto Coelho; Oliveira, Laser Antônio Machado de; Costa, Daniela Caldeira; Moreira, Fabricio de AraújoO Sistema Nervoso é o principal responsável pelas funções motoras, cognitivas e sensoriais de nosso corpo, contém doenças que podem ser transitórias e neurodegenerativas ou crônicas. Dentre elas, a Doença de Alzheimer (DA), que apresenta como principais marcadores a deposição do peptídeo β-amiloide e a formação de emaranhados neurofibrilares da proteína tau hiperfosforilada. Acredita-se que uma das consequências da deposição dessas proteínas seja a geração em excesso de espécies reativas de oxigênio. O estresse oxidativo gerado desencadeia a oxidação de proteínas, lipídeos, alterações no DNA e culmina com morte celular. A DA possui tratamentos paliativos que ajudam a reduzir e controlar os sintomas, sem tratar a progressão da doença. Uma alternativa terapêutica diante o estresse oxidativo ocasionado seria a utilização de compostos exógenos com características antioxidantes, como o canabidiol (CBD). Assim, o objetivo principal desse trabalho foi avaliar o efeito do CBD sobre culturas primárias de neurônios hipocampais submetidos ao estresse com o peptídeo βamiloide25-35. Neurônios hipocampais de embriões (E18) de camundongos C57BL/6, foram utilizados para o estabelecimento das culturas primárias. Após o estabelecimento das redes neuronais as culturas foram expostas ao peptídeo β-amiloide25-35 e tratadas com o CBD. Os neurônios foram avaliados por meio dos ensaios de metabolismo celular (MTT), mensuração intracelular de EROs e peroxidação lipídica após 24 horas de tratamento. Foi observado que o peptídeo β-amiloide25-35 diminuiu em 24% o metabolismo celular e ocasionou aumento das EROs e consequente peroxidação lipídica. Esse quadro melhorou de forma significativa com o tratamento dos neurônios com o CBD que, ao que tudo indica, atuou de forma eficiente sendo capaz de resgatar as células das injurias ocasionadas pelo peptídeo β-amiloide25-35. Esses resultados apontam para um forte potencial do CBD para atuar na terapia e no desenvolvimento de novos tratamentos para doenças neurodegenerativas, como a DA.Item Avaliação in vitro do efeito de 1,2,3-triazóis para reparação tecidual.(2022) Gomes, Fernanda Oliveira; Oliveira, Laser Antônio Machado de; Nogueira, Katiane de Oliveira Pinto Coelho; Oliveira, Laser Antônio Machado de; Silva, Breno de Mello; Bressan, Gustavo CostaO desenvolvimento biotecnológico da área de engenharia tecidual tem levado à expansão de novas possibilidades de pesquisas. Dentro desse âmbito, o processo reparatório é um mecanismo crucial para restabelecer a integridade do tecido lesionado e resgatar sua função. De forma simplificada, os fibroblastos atuam para restabelecer uma cascata de eventos que contribuem com o processo de reparo tecidual. Por outro lado, os estudos voltados para a melhoria de propriedades físico-químicas de materiais se tornaram o principal interesse nessa área, devido às crescentes aplicações clínicas de diferentes compósitos na reparação tecidual. Os compósitos 1,2,3- triazóis têm sido estudados como uma opção de substrato para cultivo de células, e, dentre as várias possibilidades, a interação direta das células com o substrato é uma variável importante a ser considerada. Tendo em conta esse objetivo, foi realizada uma cultura de fibroblastos 3T3 expostas a dosagens diferentes dos compostos triazólicos. Assim, no presente trabalho, procuramos entender qual é o papel dos compostos triazólicos no contexto da reparação tecidual. Para isso, células de fibroblastos de camundongos foram mantidas em cultura e expostas a concentrações diferentes de compostos 1,2,3- triazóis. A função dos compostos envolvidos no reparo foi avaliada inicialmente pelo ensaio de MTT. A avaliação do metabolismo, curiosamente, demonstrou o aumento da atividade metabólica celular. Posteriormente, a avaliação da viabilidade celular demonstrou, a princípio, uma biocompatibilidade composto-célula, não havendo alterações nesse processo. Desse modo, a avaliação em sequência da migração celular demonstrou um aumento no processo de fechamento da pseudo-ferida, in vitro. Além disso, a proliferação celular também foi mantida. Os compostos mostraram-se promissores agentes para o desenvolvimento de substâncias com propriedades farmacológicas cicatrizantes, já que podem otimizar eventos cruciais envolvidos no reparo tecidual, processo possivelmente relacionado com grupos químicos presentes nos compostos, como a cumarina e a ftalimida. Nossos resultados mostram o potencial biotecnológico de 1,2,3 triazóis para posterior aplicação comercial.Item Ferramentas moleculares aplicadas à caracterização da microbiota vaginal de mulheres no climatério.(2022) Oliveira, Jennefer Aparecida Gonçalves; Cota, Renata Guerra de Sá; Cota, Renata Guerra de Sá; Silva, Silvana de Queiroz; Sorpreso, Isabel Cristina EspositoO climatério é definido como o período na vida da mulher que compreende a transição entre a fase reprodutiva e não reprodutiva, que é acompanhada por diversas mudanças fisiológicas e corporais que impactam tanto na saúde como na qualidade de vida das mulheres. Dentre as alterações que recentemente vem recebendo grande atenção da comunidade científica destaca- se a composição da microbiota vaginal, que parece estar diretamente relacionada a saúde vaginal, de forma que a ocorrência de disbiose parecem explicar, pelo menos em parte quadros de vaginoses, vaginites, infecções sexualmente transmissíveis e câncer cervical. Assim, o objetivo principal deste trabalho foi avaliar a microbiota vaginal de mulheres no climatério e o papel das espécies predominantes na manutenção da comunidade e na saúde da mulher, para atingir isso os objetivos específicos foi construída e caracterizada uma coorte de mulheres no climatério; avaliou-se o gênero Lactobacillus e o Clostridium como marcadores do estado de saúde e doença vaginal; e foi realizada a caracterização a microbiota vaginal utilizando o sequenciamento de nova geração e investigar o potencial probióticos das espécies e seu papel nos quadros de disbiose Foram avaliadas uma coorte de 98 mulheres com idades entre 40 a 65 anos; classificadas em três grupos seguindo os critérios de STRAW+10 (reprodutivo, transição menopausal e pós menopausa). Foram realizadas entrevistas, coleta de sangue e swab de material vaginal. A microbiota foi avaliada por qPCR para os gêneros Lactobacillus e Clostridium. Deste conjunto inicial, foram selecionadas 66 amostras vaginais para análise por sequenciamento metagenômico. Nossos resultados evidenciaram que o grupo reprodutivo (n=20) é o de menor ocorrência de sintomas enquanto a transição menopausal (n=21) apresentou maior frequência e intensidade de sintomas. Vale ressaltar que nas fases transição menopausal (n=21) e pós-menopausa(n=57), os sintomas psicológicos e urogenitais foram classificados como intensos, sendo os sintomas urogenitais de maior ocorrência na pós menopausa. Os resultados das análises de qPCR mostraram que esse método é eficaz para avaliação de disbiose e que gênero Lactobacillus é um bom marcador de saúde vaginal. A partir da abordagem metagenômica de análise da composição da microbiota vaginal, verificamos um predomínio de Lactobacillus iners nas mulheres climatéricas. Em conjunto concluímos que as mulheres climatéricas apresentam grande ocorrência de disbiose, o que pode explicar, pelo menos em parte os sintomas e as “queixas” das mulheres e que o L. iners pode ser considerado um biomarcador de microbiota de transição entre saudável e disbiose.Item Seleção de epítopos lineares, únicos e não glicosilados do vírus SARS-CoV-2 : uma abordagem in silico.(2021) Leite, Túlio César Rodrigues; Silva, Breno de Mello; Gonçalves, Ricardo Lemes; Silva, Breno de Mello; Cruz, Izinara Rosse da; Rodrigues, Rodrigo Araújo LimaA acurácia dos testes diagnósticos empregados no curso da pandemia causada pelo SARS-CoV- 2 é crucial no controle e monitoramento de indivíduos infectados. Os testes que empregam epítopos podem apresentar reatividade cruzada com outros coronavírus circulantes em humanos prejudicando a especificidade. Além disso, muitos deles exigem plataformas de produção onerosas na obtenção dos mesmos. Dessa forma, o objetivo do presente trabalho foi triar epítopos para células B in silico específicos, não-glicosilados e lineares do SARS-CoV-2 de proteínas estruturais e acessórias. Para tanto, foram considerados todos os coronavírus circulantes em humanos SARS-CoV-2, SARS, MERS, OC43, NL63, HKU1, 229E. As proteínas estruturais spike (S), membrana (M), envelope (E) e nucleocapsídeo (N) bem como as acessórias ORF3d, ORF7a e ORF8 foram analisadas. Os servidores IMED e BepiPred 2.0 foram empregados na predição dos epítopos para células B. A previsão de glicosilações dos tipos N e O foi feita nos servidores NetNGlyc 1.0 e NetOGlyc 4.0. A propensão à membrana foi analisada no servidor TMHMM 2.0. Foram excluídos os epítopos menores que seis aminoácidos, com alguma glicosilação predita e que estavam propensos à inserção na membrana interna. A análise de conservância foi feita no IEDB mantendo somente aqueles que apresentaram uma conservância menor que 50%. Todos os epítopos foram confrontados com as variantes de interesse e preocupação em circulação para verificar possíveis mutações presentes nos mesmos. O Discovery Studio e o Pymol foram utilizados na análise estrutural dos epítopos e cálculo de exposição ao solvente. Os resultados mostraram que 855 epítopos foram para células B para as proteínas estruturais S, M, E e N. Aproximadamente 70% (593) dos epítopos preditos correspondem à proteína spike dos coronavírus. Por outro lado, um total de 22 epítopos foram preditos para as proteínas acessórias. As análises de glicosilações dos tipos N e O mostraram que a maioria das glicosilações preditas foi do tipo N e em maior quantidade na proteína spike. A única glicosilação observada para proteínas acessórias foi a glicosilação do tipo N na posição 78 da proteína ORF8. Não foram observadas predições do tipo O para as proteínas acessórias. Após essa etapa, restaram um total de 585 epítopos de proteínas estruturais e 20 de proteínas acessórias. Feita a predição de região transmembrana das proteínas, foram excluídos 1 ou 2 epítopos das proteínas M e E e, no máximo, 3 epítopos para a proteína S de todos os coronavírus. Uma única exclusão na proteína acessória ORF7a após esta etapa. A análise de conservância mostrou que somente cinco epítopos da proteína S do SARS-CoV-2 mostraram similaridade abaixo de 50%. Cinco epítopos da proteína estrutural S e 17 das proteínas acessórias foram mantidos após a etapa final de exclusão de número mínimo de 6 aminoácidos. A área acessível ao solvente variou de 36,74% a 76,32% dos epítopos da proteína S e de 28,8% a 62,5% dos epítopos das proteínas acessórias. As variantes que apresentaram maior número de mutações nos epítopos triados da proteína spike foram a beta, lambda e omicron. Já para os epítopos de proteínas acessórias as variantes alfa, mu, delta, kappa e iota apresentam mutações nos epítopos triados. Todas as mutações apresentadas podem facilmente ser adaptadas em desenhos de clonagem molecular. Portanto, a triagem de epítopos únicos, não glicosilados e lineares de SARS-CoV-2 para células B, in silico, resultou em 5 epítopos para a proteína estrutural S e 17 epítopos para as proteínas acessórias ORF3d (3), ORF7a (7) e ORF8(7). Os epítopos possuem potencial de aplicação em quimeras que cobrem todas as variantes em circulação. Os epítopos triados possuem potencial de aplicação biotecnológica no desenvolvimento de testes específicos e baratos.Item Efeito da adição de rúmen e de esterco bovino na composição microbiana de inóculo anaeróbio, utilizado para a produção de biogás a partir do bagaço de cana-de-açúcar.(2021) Assis, Nathália Vercelli de; Silva, Silvana de Queiroz; Silva, Silvana de Queiroz; Garcia, Camila Carrião Machado; Oliveira Júnior, Ênio Nazaré deA busca por biotecnologias para produção de biogás a partir de fontes renováveis tem sido cada vez maior para garantir um futuro sustentável e redução dos gases do efeito estufa. Os gases metano e hidrogênio, gerados microbiologicamente durante a digestão anaeróbia, podem ser utilizados como biocombustíveis e na geração de energia elétrica e térmica. Uma alternativa para alcançar esse objetivo de interesse global é o uso de bagaço de cana-de-açúcar de segunda geração e esgoto sanitário na digestão. Entretanto, para obter maiores rendimentos nessa produção é importante compreender os micro-organismos no meio e suas funções metabólicas. Dessa forma, é necessário selecionar o melhor inóculo produtor de biogases e definir o consórcio microbiano responsável por tal produção. Neste estudo, foi comparado três diferentes consórcios microbianos de inóculos aplicados em amostras de esgoto sanitário retirado de um biorreator de fluxo ascendente de leito de lodo anaeróbico (UASB). Além disso também foi feita a comparação das funções metabólicas de cada micro-organismo identificado, atribuindo assim o papel microbiano no desempenho da produção de metano. Neste trabalho também foi avaliado a eficiência do tratamento térmico do inóculo, visando a eliminação de arqueias metanogênicas, para posterior produção de hidrogênio; e discutiu-se como esse tratamento afetou o consórcio microbiano nesse inóculo. Assim sendo os inóculos estudados foram nomeados como: UASB, contendo 100% de lodo proveniente de um tratamento anaeróbio de esgoto sanitário; UASB+FM, contendo 50% de lodo do esgoto sanitário e 50% de esterco bovino; UASB+R, contendo 50% de lodo do esgoto sanitário e 50% de rúmen bovino. Resultados prévios revelaram que o biorreator com maior produção de metano foi aquele inoculado com esterco bovino, UASB+FM. De acordo com a identificação microbiana, esse melhor desempenho deuse devido a sintrofia entre as espécies microbianas Clostridium disporicum, Methanobacterium kanagiense, Pseudomonas stutzeri, Anaerobaculum mobile, Anaerobaculum hydrogenifromans, Alcaligenes faecalis, Bacillus acidicola, Soehngenia saccharolytica e membros não identificados do gênero Peptoclostridium. Dentro desse consórcio microbiano se destaca os gêneros exclusivos desse biorreator: Pseudomonas, que é detoxificante e aumentou consideravelmente sua abundância no final da produção de metano; e Bacillus, com sua atividade degradadora de amido e celulose, que apesar da relativa baixa abundância, também aumentou consideravelmente no final do ensaio. Outro destaque se dá a espécie Alcaligenes faecalis, capaz de remover biogás metano do meio e está em menor abundância nessa amostra. Os micro-organismos que estavam ausentes ou pouco abundantes nos inóculos foram: Aminobacterium, Asaccharospora, Bosea, Ensifer, Gemmobacter, Leucobacter, Leuconostoc, Methanoculleus, Mycobacterium, Oscillatoria, Paracoccus, Peptoclostridium, Pleomorphomonas, Pseudoclavibacter, Rhodoblastus, Rummeliibacillus, Sarcina, Shinella, Succiniclasticum, Treponema, Turicibacter e Weissela. Sendo assim, o consórcio do inóculo composto por lodo anaeróbio e esterco bovino proporcionou a melhor decomposição da biomassa lignocelulósica, potencial na degradação de inibidores e na geração de substratos para produção biogás metano. O tratamento térmico realizado no inóculo UASB+FM para produção de hidrogênio foi eficiente na remoção de arqueias como também de espécies que estavam abundantes no meio antes do tratamento: Anaerobaculum, Peptoclostridium, Pseudomonas e Soehngenia. Dentre os gêneros detectados após o tratamento foram: Burkholderia (mais abundante), Rummeliibacillus, Sphingobium, Sphingomonas, Brevundimonas, Ruminofilibacter e Clostridium. Somente o gênero Clostridium foi detectado antes e depois do tratamento, os outros foram detectados somente após o tratamento térmico. Os potenciais gêneros produtores de hidrogênio e detoxificantes nesse consórcio são Burkholderia, Brevundimonas e Clostridium.Item Efeito do exercício físico e do consumo de sacarose na expressão de RNAs não codificadores longos e sirtuínas no tecido cardíaco e suas possíveis implicações biotecnológicas.(2020) Barroso, Yuri Windson Santos; Cota, Renata Guerra de Sá; Barboza, Natália Rocha; Oliveira, Lenice Kappes Becker; Gomes, Matheus de Souza; Cota, Renata Guerra de SáA Organização Mundial da Saúde relata que 01 em cada 04 indivíduos adultos são considerados sedentários, e no mundo totaliza aproximadamente 1,4 bilhões de pessoas nesta condição. Recentemente, vem sendo descrito que uma variedade de RNAs não codificadores longos (lncRNAs) tem um papel importante na gênese de várias doenças metabólicas, entretanto seu papel no desenvolvimento de doenças cardíacas, ainda é pouco compreendido. Os lncRNAs são moléculas de RNAs que possuem um tamanho superior a 200 nucleotídeos. Eles atuam na regulação de mecanismos epigenéticos, pós-transcricionais e pós-traducionais. As sirtuínas (SIRT) são uma família de sete enzimas (1-7) desacetilases dependentes de nicotinamida adenina dinucleotídeo (NAD+ ) reguladoras metabólicas, que executam papeis importantes na regulação da transcrição, na sobrevivência celular, no ritmo circadiano, inflamação e reparo celular. Junto eles são apontados como reguladores chaves na fisiologia e fisiopatologia do sistema cardiovascular. Desde 2008 que nosso grupo de pesquisa vem estudando os efeitos do uso crônico de uma dieta rica em carboidratos simples (DRC) em associação ou não com o treinamento físico de natação no desenvolvimento de doenças metabólicas. Continuando essa linha de pesquisa, a hipótese desse trabalho é que os lncRNAs e as sirtuinas são boas moléculas candidatas a biomarcadores associado ao metabolismo e patologias do tecido cardíaco. A seguinte metodologia foi adotada: utilizou de duas dietas isocalóricas, sendo uma DRCS (33% de leite condensado; 7% de açúcar cristal) e outra normocalórica. Os animais (N=12) foram submetidos ao treinamento aeróbico (65% Pmax) e eutanasiados após 18 semanas de treinamento/sedentário, conforme protocolo CEUA 2016/26. O trabalho teve os seguintes objetivos: (i) analisar o efeito da dieta e interação treinamento/sedentarismo sobre os parâmetros cardiovasculares; (ii) avaliar lesões nas fibras musculares utilizando abordagens morfológicas; (iii) analisar o efeito da dieta e interação treinamento/sedentarismo sobre a expressão dos lncRNAs FTX, HOTAIR, FENDERR,GAS5 e SIRT1 a 7. Os resultados demonstram efeito do treinamento na expressão dos lncRNAs FENDERR,FTX,HOTAIR e GAS5..Com relação as SIRTs, observamos efeito da DRC na expressão de SIRT3, do treinamento na expressão de SIRT4 e do treinamento e da DRC na expressão da SIRT6. Os animais do grupo sedentário, independente da dieta consumida apresentaram processos inflamatório significativo no tecido cardíaco. Os resultados permitem concluir que o treinamento aeróbico de natação reverteu, pelo menos em parte, os danos metabólicos associados ao uso crônico de uma DCS e que novos estudos serão necessários para confirmar o papel de biomarcador epigenético da SIRTs e dos lncRNAs.Item Efeito da contaminação por arsênio sobre a comunidade de bactérias cultiváveis do solo.(2021) Rocha, Lorrana Cachuite Mendes; Garcia, Camila Carrião Machado; Moreira, Leandro Marcio; Garcia, Camila Carrião Machado; Barboza, Natália Rocha; Silva, Silvana de QueirozO Arsênio é um semi-metal amplamente difundido na crosta terrestre associado a outros compostos minerais. Atividades antrópicas, como mineração e agricultura, e naturais como o intemperismo de rochas elevam a quantidade de As no ambiente. Os compostos derivados de As são considerados altamente tóxicos, estando associados ao desenvolvimento de uma série de patologias em resposta à intoxicação aguda e crônica, como doenças de pele e gastrointestinais, e diversos tipos de câncer. Sendo assim, estudar processos que possam nos auxiliar no tratamento de solos e águas contaminadas é de grande importância. Bactérias têm se mostrado microrganismos bastante interessantes para esses processos. Neste trabalho, procuramos avaliar o efeito da contaminação por arsênio sobre a comunidade bacteriana dos solos através de métodos dependentes de cultivo. Inicialmente, bactérias foram isoladas a partir de solo contaminado artificialmente com 55 µg/Kg de Arsenato de Sódio, solo naturalmente contaminado proveniente do quadrilátero ferrífero e solo controle entre 0 e 115 dias após a contaminação. Foram isolados 466 microrganismos e estes selecionados de acordo com suas tolerâncias às doses de 10-15 mM de Arsenato de Sódio e 1-3 mM de Arsenito de Sódio. Os 29 isolados mais tolerantes foram submetidos a crescimento em presença de Manganês (20-70 mM), Ferro (6-15 mM), diferentes valores de pH (4-12) e doses mais elevadas de arsenito (4-15 mM) e arsenato (25-400 mM). Os 10 isolados mais resistentes quanto à tolerância aos metais e principalmente arsenito e arsenato foram novamente selecionados e caracterizados quanto à formação de biofilme, curva de crescimento, tolerância ao peróxido de hidrogênio (10-200 mM) e características morfológicas e de parede celular. Nossos resultados apontam para um conjunto de bactérias com alta resistência a As, prospectadas principalmente do solo tratado com As, e que podem ser utilizadas em atividades de remediação de ambientes contaminados com o semi-metal.Item Avaliação em larga escala do Kit LeishFlow para o diagnóstico sorológico da Leishmaniose Visceral Canina.(2021) Soares, Nathália Caroline; Soares, Rodrigo Dian de Oliveira Aguiar; Reis, Alexandre Barbosa; Soares, Rodrigo Dian de Oliveira Aguiar; Fraga, Deborah Bittencourt Mothé; Carneiro, MariângelaA Leishmaniose Visceral (LV) é uma zoonose que apresenta grande distribuição mundial e integra o grupo de doenças tropicais negligenciadas da Organização Mundial de Saúde. No Brasil, o cão tem um papel importante na disseminação da LV e o diagnóstico preciso da doença canina é essencial para o controle da enfermidade. Atualmente, o protocolo de diagnóstico conta com dois principais testes, o TR-DPP® e EIE-LVC, que apresentam limitações, entre elas se destacam: reações cruzadas com outros patógenos caninos, baixa sensibilidade na detecção de cães assintomáticos e ocorrência de resultados falso-positivos em animais vacinados. Em consequência dessas limitações, há uma falha na rápida identificação de animais nas áreas endêmicas, comprometendo as medidas de controle. Em busca de melhorias no diagnóstico da doença canina, o uso de técnicas mais sensíveis, como a citometria de fluxo é uma opção, pois apresenta um alto desempenho e melhor detecção de animais com baixo título de anticorpos. Nosso grupo de pesquisa desenvolveu nos últimos anos um protótipo de kit, denominado LeishFlow, para o diagnóstico sorológico por citometria de fluxo da Leishmaniose Visceral Canina (LVC). em que obtivemos bons resultados iniciais. Para aprofundarmos e aprimorarmos o desenvolvimento biotecnológico do Kit LeishFlow, neste estudo produzimos e revalidamos um novo lote do Kit, avaliamos o desempenho do novo kit em larga escala e comparamos a eficácia do emprego do LeishFlow como teste único para o diagnóstico da LVC em paralelo aos testes preconizados pelo Ministério da Saúde (MS). Os testes foram realizados em uma ampla variedade de soros caninos (n = 1.546), estes coletados em uma área de alta endemicidade, desta forma, estabelecemos a concordância entre os testes diagnósticos e a prevalência mais realística da doença com um teste de melhor sensibilidade e especificidade. O uso do Kit LeishFlow sozinho resultou em melhora diagnóstica, ao analisarmos a prevalência da área endêmica estudada observamos que o TR-DPP® e EIE-LVC apresentaram um valor de 18,24%, já o LeishFlow apresentou uma prevalência de 29,43%. Nossos resultados mostram que o LeishFlow tem um alto potencial como teste diagnóstico único, e pode descriminar os animais infectados de não infectados para L. infantum, apresentando um valor de sensibilidade (88,3%) e especificidade (83,7%), quando referenciado pelos testes TR-DPP® e EIE-LVC, e uma concordância de 84,5%. Demonstrou bons resultados ao estratificar animais por sintomatologia, nos cálculos de sensibilidade (95,1%), especificidade (72,1%) e acurácia (85%) dos animais sintomáticos e para animais assintomáticos apresentou sensibilidade de 87,1% e especificidade de 84,7%, e acurácia de 82,3% quando utilizados os testes padrão de referência do MS. O LeishFlow, por ser mais sensível e específico, melhoraria a detecção de animais positivos nas áreas endêmicas, e por ser um teste único, diminuiria os custos operacionais, a rapidez no diagnóstico e assim nas ações de controle, o que torna essa metodologia uma alternativa para o diagnóstico sorológico da LVC. Além disso, mais opções de teste de diagnóstico é essencial para laboratórios privados e serviços veterinários no Brasil, dada a crescente demanda e impacto na saúde pública causado pela LVC.Item Bactérias cultiváveis obtidas a partir de Langsdorffia hypogaea como potenciais controladores biológicos de fungos saprofíticos associados com deterioração de tomate pós-colheita.(2021) Silva, Ana Karla da; Moreira, Leandro Marcio; Sanchez, Angelica Bianchini; Moreira, Leandro Marcio; Garcia, Camila Carrião Machado; Laia, Marcelo Luiz deGrandes quantidades de frutos e vegetais são perdidos por consequência da ação de fungos que os deterioram na fase de pós-colheita. Fatores como cultivo inapropriado, vasto uso de agrotóxicos, armazenamento, manuseio, transporte inadequados e grandes variações de temperatura podem favorecer o aparecimento e a propagação de doenças fúngicas alavancando a fase de deterioração. O tomate, por exemplo, por ser uma hortaliça de alta perecividade, pode incorrer em perdas de até metade da produção na fase pós-colheita. Atualmente, a forma mais comumente utilizada para controle destes microrganismos está na aplicação de fungicidas sintéticos (agrotóxicos), porém, com o agravo de seu uso ser altamente prejudicial à saúde. Diante desse cenário, o controle biológico surge como uma alternativa limpa de controlar microrganismos indesejáveis, por meio da utilização de seus próprios inimigos naturais. Neste trabalho, propomos o controle de espécies fúngicas causadoras de doenças pós-colheita e deterioração de tomates, por meio da utilização de isolados bacterianos cultiváveis obtidos previamente a partir de rizosfera e raízes de Langsdorffia hypogaea, uma planta holoparasita obrigatória. Um total de 36 isolados foram diretamente confrontados com quatro espécies fúngicas bioprospectadas diretamente de tomates, nomeadas como F8", "F11", "F7.2" e "F12". Além disso, os isolados de melhor eficiência nesta etapa, foram posteriormente avaliados quanto a capacidade de autoagregação e produção de biofilme, características fundamentais para fixação em tecido vegetal. Deste total, 33 isolados foram capazes de inibir in vitro o crescimento de F8 com taxas de até 61,27%, enquanto que, para o fungo F11, os 36 isolados apresentaram taxas de inibição positiva, sendo a maior delas 76,81%. O fungo F7.2 se demonstrou o mais difícil de ser contido, 33 isolados bacterianos foram capazes de inibi-lo e a maior taxa alcançada foi 56,04%, entretanto, diferente dos demais, apenas um isolado bacteriano apresentou taxa de inibição superior a 50%. Finalmente, todos os 36 isolados bacterianos foram capazes de inibir o fungo F12 alcançando a maior faixa de inibição, com valores de até 93,83%. Dos 36 isolados testados, 14 melhores passaram para a próxima fase, dentre estes, 8 isolados foram capazes de se autoagregar com taxas baixas de até 20,1%. Os 14 isolados bacterianos, foram capazes de produzir biofilme, 7 deles se enquadraram como produtores moderados, enquanto os 7 demais foram classificados como fortes produtores. Concluímos que bactérias provenientes do solo do QF e da planta Langsdorffia hypogaea são potenciais agentes biocontroladores de fungos deterioradores, entretanto, serão necessários estudos mais aprofundados para verificar a atividade diretamente no fruto.