PPBIOTEC - Programa de Pós-graduação em Biotecnologia
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Item Identificação de genes envolvidos na tolerância ao alumínio em Saccharomyces cerevisiae.(2022) Ferreira, Ludmila da Conceição; Cruz, Izinara Rosse da; Brandão, Rogélio Lopes; Cunha, Aureliano Claret da; Cruz, Izinara Rosse da; Brandão, Rogélio Lopes; Cunha, Aureliano Claret da; Magalhães, Cíntia Lopes de Brito; Santos, Fernanda GodoyA produção de etanol combustível representa um importante papel na economia de vários países, sendo os Estados Unidos, Brasil e China os maiores produtores mundiais. O bioetanol é um combustível renovável, sendo o biocombustível mais consumido no Brasil. A síntese do etanol é normalmente realizada com a obtenção de uma solução de açúcares, que são fermentados para produzir etanol, sendo este separado por destilação e purificado. A principal rota metabólica envolvida na fermentação alcoólica em leveduras é a glicólise. Diversos fatores fisiológicos podem influenciar no desempenho fermentativo da Saccharomyces cerevisiae, como o estresse osmótico, o estresse ácido, a contaminação bacteriana e a presença de níveis tóxicos de alumínio. Em virtude da fermentação ocorrer em condições ácidas, o alumínio, absorvido pela cana-de-açúcar em solos ácidos, provoca sérios problemas durante a fermentação. As cepas de leveduras industriais diferem bastante em relação à tolerância ao alumínio e, considerando o potencial de aplicação biotecnológica das leveduras, se faz necessário um estudo das bases genéticas envolvidas nesse fenótipo de tolerância. Neste contexto, o objetivo do presente projeto foi identificar no genoma da Saccharomyces cerevisiae genes que possam estar envolvidos na tolerância ao alumínio. Desse modo, localizou-se os genes presentes na região do QTL no cromossomo VI apontados por Mezadri (2018), envolvidos na tolerância ao alumínio em S. cerevisiae e avaliou-se a tolerância ao alumínio por meio de testes de crescimento contendo diferentes concentrações de alumínio. Para verificar se os genes candidatos a estarem envolvidos com a tolerância ao alumínio carregavam variantes genéticas que poderiam estar associadas ao fenótipo de interesse, as sequências de nucleotídeos desses genes foram alinhadas utilizando a ferramenta online Clustal Omega, para visualização e análise do alinhamento múltiplo das sequencias de nucleotídeos utilizou-se o programa Jalview 2 e para visualização das variantes genéticas utilizou-se a ferramenta IGV. Nossos resultados indicaram envolvimento de 18 genes com a tolerância ao alumínio e três tipos variantes genéticas sendo elas sinônima, missense e sem sentido, que permitem estudo de modificação de SNV. Além disso, nossos resultados fornecem dados promissores para melhoramento de cepas industriais para produção de bioetanol.Item Avaliação comparativa do processo auto-fermentativo e bioaumentado de diferentes amostras de bagaços de cana- de-açúcar : identificação da microbiota autóctone e produtos gerados.(2023) Souza, Isabela Morato de; Silva, Silvana de Queiroz; Gurgel, Leandro Vinícius Alves; Silva, Silvana de Queiroz; Guimarães, Valéria Monteze; Zorel, José Augusto; Brandão, Rogélio Lopes; Barreto, Elisa da SilvaO bagaço de cana-de-açúcar (BCA) é um material remanescente da indústria sucroalcooleira considerado fonte renovável, de baixo custo e rico em açúcares. A conversão desta biomassa lignocelulósica em bioprodutos é uma alternativa favorável para amenizar problemas ambientais causados pelo uso excessivo de matéria-prima de origem fóssil, além de contribuir para o conceito de biorrefinaria. Entretanto, devido à sua estrutura recalcitrante, o acesso aos açúcares do biomaterial é um desafio para microrganismos fermentadores. Assim sendo, objetivando alcançar um bioprocesso consolidado, o presente estudo investigou o potencial hidrolítico e fermentativo da microbiota autóctone do BCA bruto durante sua fermentação, bem como a prospecção dos microrganismos presentes na biomassa. Nos ensaios de fermentação foram testadas amostras de BCA de seis usinas (A, B, C, D, E e F) na concentração de 10 g/L, monitoradas por 408 h a 37oC, sob agitação. As cepas cultiváveis foram coletadas no tempo 96 h e três delas (X, Y e Z) foram selecionadas para serem inoculadas individualmente em ensaios bioaumentados. A caracterização metagenômica do consórcio microbiano foi realizada e para quantificação dos metabólitos obtidos durante a fermentação foi feita a análise da fração líquida, enquanto a fração sólida foi caracterizada a fim de determinar os teores de celulose, hemiceluloses e lignina no início e ao final do ensaio. A microbiota presente nos bagaços no início da fermentação incluiu principalmente organismos do gênero Acetobacter, ao passo que, com 96 h de ensaio houve predominância de bactérias fermentadoras, como Clostridium, Enterobacter e Ruminiclostridium. Ao final do ensaio a abundância de Ruminiclostridium foi expressiva para as amostras analisadas neste momento. Dentre as condições testadas, alcançou-se a remoção de 37% da fração de lignina, 58% de celulose e 44% de hemiceluloses na fermentação do bagaço D por sua microbiota autóctone bioaumentada por Klebsiella pneumoniae (isolado X). Os principais produtos obtidos foram ácido caproico (2,81 g/L em Dy), etanol (2,68 g/L em A), ácido acético (1,15 g/L em D), ácido isobutírico (0,97 g/L em E), metanol (0,97 g/L em A) e ácido propiônico (0,34 g/L em C). Isto demonstra o elevado potencial lignocelulolítico da microbiota autóctone do BCA por acessar e fermentar o próprio substrato, demonstrando a possibilidade de obtenção de bioprodutos de valor agregado através do bioprocesso consolidado.Item Avaliação do potencial biotecnológico de derivados sintéticos de eugenol para o tratamento de Glioblastoma.(2023) Dias, Andreia da Silva; Oliveira, Laser Antônio Machado de; Nogueira, Katiane de Oliveira Pinto Coelho; Oliveira, Laser Antônio Machado de; Magalhães, Cíntia Lopes de Brito; Gazolla, Poliana Aparecida RodriguesAtualmente o câncer é uma das doenças que mais matam no mundo, mesmo com todo o avanço nos métodos de diagnósticos e nos procedimentos quimioterápicos. Associado às mutações que acontecem frequentemente no genoma das células cancerígenas, novos métodos de tratamento frequentemente não obtêm êxito. Com isso, as neoplasias são difíceis de se tratar e em muitas situações os tratamentos não curam essa enfermidade por completo. Dentre as neoplasias que podem acometer o sistema nervoso central encontramos os gliomas, tumores com origem a partir das células da glia. O tipo mais comum de glioma é o glioblastoma (GBM). Especificamente nesta doença, ainda que a ressecção tumoral apresente o melhor resultado possível, onde todo o tumor foi removido, existem células infiltrativas que escapam do procedimento cirúrgico, levando a uma recidiva da doença. Adjuvante à ressecção, o tratamento segue com a quimio e radioterapia, visando apenas a sobrevida que ainda é curta. A maioria dos pacientes diagnosticados com esta neoplasia não sobrevivem por mais do que 15 meses a partir do diagnóstico. Com base nesses resultados não esperançosos dos tratamentos comumente utilizados para o GBM e também pela característica difusa desse tumor, estudos acerca de novos procedimentos terapêuticos devem ser realizados. É sabido que os compostos naturais podem exibir atividade inibindo o crescimento de células cancerígenas, atuar no controle de certas vias de expressão gênicas que estão ligadas à atividade tumoral, assim como também apresentar efeitos antioxidantes, anti-inflamatórios e anti metastáticos. Um grande exemplo de produto natural que apresenta as atividades citadas é o eugenol. Por isso, esses compostos, e também outros fármacos obtidos a partir deles, representam um vasto campo de possibilidades para a obtenção de procedimentos terapêuticos seguros e eficazes. Dessa forma, o presente trabalho teve como objetivo avaliar o potencial biotecnológico de derivados do eugenol como possíveis candidatos a fármacos para o tratamento do glioblastoma. Para isto, utilizamos a linhagem U87MG e realizamos os ensaios in vitro de metabolismo celular (MTT) para triar e selecionar o composto com melhor atividade, migração por meio do ensaio de cicatrização de feridas, proliferação e formação de colônias. Com base nestes experimentos foi possível observar um efeito anti-tumoral do derivado 5V, inibindo todos os parâmetros analisados. Assim, este derivado se mostrou como um candidato promissor para o desenvolvimento de um novo fármaco para o tratamento do glioblastoma.Item Avaliação da atividade do canabidiol sobre o comportamento de camundongos fêmeas C57BL/6 em um modelo de depressão induzida pelo isolamento social.(2023) Pereira, Kenzawin Adliz; Nogueira, Katiane de Oliveira Pinto Coelho; Engel, Daiane Fátima; Oliveira, Laser Antônio Machado de; Nogueira, Katiane de Oliveira Pinto Coelho; Souza, Gabriela Guerra Leal de; Menezes, Cristiane Alves da SilvaO isolamento social (IS) se tornou uma realidade dentro do contexto pandêmico mundial. Um dos efeitos desta vivência pode ser o desenvolvimento do quadro de depressão maior (DM), resultando prejuízos sociais e cognitivos. Antes mesmo deste cenário a doença já era uma das mais prevalentes em todo o mundo atingindo 2,9% dos homens e 5,0% das mulheres. O estresse crônico é um importante fator de risco no aparecimento de vários distúrbios neuropsiquiátricos, incluindo ansiedade e depressão. Neste trabalho objetivamos investigar a relação entre as alterações comportamentais induzidas pelo estresse crônico do IS em camundongos adultos fêmeas e o tratamento com canabidiol (CBD), um fitocanabinoide extraído de plantas do gênero Cannabis que devido a suas propriedades medicinais tem sido considerado para o tratamento de diversas patologias. O CBD pode atuar no sistema nervoso central de diversas formas, incluindo por agonismo ao sistema endocanabinoide. Para avaliar o IS como mecanismo indutor de estresse em modelo animal, isolamos camundongos C57BL/6 fêmeas adultas por 16 semanas, de acordo com protocolo pré-estabelecido na literatura, para avaliar comportamentos semelhantes aos da DM, como a anedonia e prejuízos cognitivos. O modelo de indução da DM foi confirmado pelo teste de preferência pela sacarose e a partir deste resultado os animais foram tratados com CBD 30 mg/Kg, via gavagem e, posteriormente, avaliados nos testes comportamentais de Campo Aberto, Claro/Escuro, Reconhecimento do Novo Objeto e Natação Forçada. Os resultados apontaram o isolamento como um indutor efetivo do comportamento tipo depressivo. O tratamento com o CBD não trouxe prejuízos cognitivos ou motores aos animais, com base nos testes de Campo Aberto e Reconhecimento do Novo Objeto, mas também não pôde ser considerado agente protetor ao estresse agudo com base nos resultados do teste de Natação Forçada. Quanto ao tratamento prolongado com CBD os dados demonstraram efeito ansiogênico em fêmeas agrupadas consideradas saudáveis, sugerindo um possível efeito adverso para o uso do CBD na ausência de traços depressivos. O uso prolongado do CBD pode gerar ansiedade em fêmeas saudáveis, bem como o isolamento pode ser considerado um fator indutor de comportamento tipo-depressivo e ansioso, sem afetar a cognição ou habilidades motoras dos animais testados.Item Caracterização proteômica do extrato da glândula de aranhas do gênero Actinopus.(2021) Fernandes, Frederico Francisco; Borges, William de Castro; Borges, Marcia Helena; Borges, Marcia Helena; Cota, Renata Guerra de Sá; Braga, Thiago VeranoAs aranhas-de-alçapão do gênero Actinopus são sedentárias, passam a maior parte do tempo em suas tocas subterrâneas revestidas por seda e caçam por emboscadas. Estes motivos poderiam explicar o fato destes animais estarem menos presentes em nosso cotidiano, não serem relacionados à acidentes envolvendo humanos e, portanto, não serem considerados de importância médica. Entretanto, aranhas do gênero Actinopus apresentam uma proximidade filogenética com algumas espécies que são consideradas extremamente venenosas, como é o caso da Atrax robustus. Por outro lado, os estudos sobre aranhas do gênero Actinopus são escassos e até a presente data, nenhum é referente ao veneno. Portanto, considerando a ausência de estudos sobre o veneno desse gênero, bem como a sua proximidade com espécies de importância médica, este trabalho teve como objetivo realizar a caracterização proteômica do extrato da glândula de veneno de aranhas do gênero Actinopus. Para isso, alguns exemplares dessa aranha foram coletados na cidade de Rio Claro (SP), suas glândulas foram removidas, maceradas e sonicadas. A partir daí, esse extrato foi submetido a experimentos de SDS-PAGE unidimensional e nanocromatografia líquida acoplada com espectrometria de massas (LC-ESI- MS/MS). A eletroforese revelou diversas massas amplamente distribuídas ao longo das canaletas do gel e com predominância de componentes de baixa massa molecular. Nossos resultados indicaram a presença de vários peptídeos únicos e homólogos a componentes de venenos de espécies peçonhentas e de importância médica, além de moléculas que demonstram ser promissoras para aplicações biotecnológicas. Os resultados aqui obtidos contribuirão para ampliar o conhecimento a respeito da diversidade dos venenos animais e para identificação de moléculas potencialmente promissoras para o desenvolvimento da ciência e tecnologia.Item Análise de QTL e gênomica comparativa para estudar mecanismos regulatórios da H+ -ATPASE de membrana plasmática de Saccharomyces cerevisiae.(2021) Barbosa, Patrícia Gonçalves Prates; Brandão, Rogélio Lopes; Cunha, Aureliano Claret da; Cruz, Izinara Rosse da; Brandão, Rogélio Lopes; Fietto, Luciano Gomes; Mendes, Tiago Antônio de Oliveira; Andrade, Milton Hércules Guerra de; Silva, Silvana de QueirozA H+ -ATPase é uma proteína presente na membrana citoplasmática de plantas e fungos e desempenha um papel essencial na geração de um gradiente eletroquímico de prótons, importante para a captação de nutrientes e regulação do pH intracelular. A ativação da H + -ATPase da membrana citoplasmática em Saccharomyces cerevisiae induzida por glicose é supostamente atribuída a um sinal de cálcio intracelular correlacionado ao metabolismo do fosfatidilinositol. Em estudos anteriores do nosso grupo de pesquisa, foi observada diferença de fenótipo entre as cepas S. cerevisiae BY4742 arg82Δ e PJ69 arg82Δ através do teste de atividade da H + -ATPase, indicando que o fenótipo de maior ativação da H + -ATPase está relacionado a vários genes. Diante do exposto, o objetivo deste trabalho foi utilizar diferentes abordagens genômicas para identificar novos componentes da regulação induzida por glicose da H + -ATPase. Para isso, foram realizados o sequenciamento do genoma segregante agrupado, mapeamento de QTLs e análises de Bioinformática para identificar o possível motivo da diferença de fenótipo e, ou, novos componentes desta via de transdução de sinal. Uma vez identificadas as variantes na análise de mapeamento de QTL foi desenvolvido o script SNPsInQTLselection.py para identificar as bases genéticas que podem estar envolvidas com o fenótipo de maior atividade da H+ -ATPase. Após a utilização desse script foram identificadas 42 variantes em 33 genes potencialmente envolvidos com o fenótipo de interesse. Para priorização desses genes candidatos foi realizado análise de enriquecimento e interatoma que permitiram identificar 10 genes enriquecidos e envolvidos na via da telomerase e do fosfatidilinositol (STT4, PIK2, UGA2, EST1, MEC3, HEK2, TOP3, PSO2, STO1, FUR4). Cepas do background BY contendo essesrespectivos genes deletados (coleção EUROSCARF) foram utilizadas para teste de fenótipo de acidificação extracelular e sinalização de cálcio induzida por glicose. Por meio desses testes, 4 (UGA2, FUR4, EST1 e STT4) dos 10 genes enriquecidos, apresentaram o fenótipo de maior ativação da H+ -ATPase, fenótipo esse evidenciado nos testes de acidificação extracelular e sinal de cálcio. Destes 4 genes, vale destacar o STT4 visto que, de acordo com a função descrita para esse gene na literatura o fosfatidilinositol-4-fosfato pode exercer um papel na regulação da via de ativação de H + -ATPase, controlando a atividade da fosfolipase C. Tendo em vista uma relação positiva entre atividade da H + - ATPase e desempenho fermentativo, estudos futuros podem ser feitos com os genes/alelos identificados neste trabalho, com aplicação em cepas de leveduras industriais visando a melhoria na eficiência de processos fermentativos. Os genes (UGA2, FUR4, EST1 e STT4) merecem investigação detalhada para verificação do possível envolvimento na via de sinalização da H+ -ATPase. Esse trabalho apresenta pela primeira vez uma estratégia de Bioinformática para identificar genes candidatos quando o resultado do mapeamento de QTL não for significativo.Item Caracterização da atividade antioxidante do fulerol em infecções por Zika virus e Chikungunya virus.(2023) Malta, Wellington Carvalho; Silva, Breno de Mello; Silva, Breno de Mello; Garcia, Camila Carrião Machado; Ferreira, Gustavo PortelaOs arbovírus, Zika virus e Chikungunya virus, são de grande importância na saúde pública, havendo milhares de casos todos os anos. Ambas apresentam risco de epidemias, geram incontáveis gastos à saúde pública, além da possibilidade de desencadear casos graves, levando ao óbito. A febre zika e a febre chikungunya apresentam sintomas característicos de arboviroses como cefaleia, febre, dores pelo corpo, musculares e nas articulações, ambas podem levar a complicações graves. Até o momento não há vacinas ou tratamentos aprovados para estes vírus, tornando necessário o desenvolvimento de terapias alternativas. Já é relatado o aumento de espécies reativas de oxigênio (EROs) durante infecções virais, estudos sugerem que a modulação de vias oxidativas pode estar relacionado à multiplicação viral e infecção de novas células, logo, o controle de EROs e normalização das vias do elemento de resposta antioxidante (ARE), podem ser estratégias no combate à infecção. O fulerol, um nanomaterial derivado do fulereno de carbono C60, com alto poder antioxidante e, capaz de sequestrar EROs, poderia ser uma alternativa. Nesse contexto, este trabalho objetivou caracterizar a atividade antioxidante do fulerol em infecções pelos vírus Zika e Chikungunya. Para tal, avaliou-se a citotoxicidade do composto em células VERO e MRC-5. A atividade antioxidante foi avaliada pelo teste de EROs intracelular através do indutor exógeno, peroxido de hidrogênio (H2O2), e no contexto das infecções pelos vírus supracitados. Avaliou-se também a modulação dos vírus na transcrição da principal via de resposta antioxidante (NRF-2/ARE), e os efeitos do tratamento com fulerol. Os resultados demonstraram que o fulerol não apresentou efeito citotóxico nas concentrações de 6250 a 0,76 nM, o peroxido, utilizado como indutor exógeno, não presentou citotoxicidade nas concentrações de 0,1 a 26,6mM no período do estudo. O fulerol foi capaz de reduzir os níveis de EROs, após indução com 1 e 10mM de peroxido, nas concentrações de 6,25 a 0,781 nM e 25 a 0,195 nM, respectivamente. O composto foi capaz de reduzir os níveis de EROs na infecção por Zika nas concentrações de 12,5 a 0,781 nM, e para o Chikungunya nas concentrações de 6,25 a 0,781 nM, sendo a concentração de 3,125 nM a que apresentou maior capacidade antioxidante em todos os contextos estudados. O fulerol em 3,125 nM foi capaz de normalizar a modulação negativa na atividade transcricional da via NRF-2/ARE causada pelo vírus Zika, porém não foi observado o mesmo efeito para o Chikungunya, dando indícios da diferença dos mecanismos de modulação promovida por cada vírus nessa via. O conjunto dos resultados sugere que o fulerol possui grande capacidade antioxidante e potencial para auxiliar no tratamento contra os vírus Zika e Chikungunya, ou na redução dos efeitos, causados por danos oxidativos, pela infecção.Item Avaliação da neurotoxicidade do peptídeo B-amiloide25-35 e da atividade das formas isolada de canabidiol e full spectrum em culturas de células HT22.(2023) Carmo, Raquel Cruz Ferreira do; Nogueira, Katiane de Oliveira Pinto Coelho; Oliveira, Laser Antônio Machado de; Nogueira, Katiane de Oliveira Pinto Coelho; Ribeiro, Iara Mariana Léllis; Menezes, Tatiana PrataA hipótese da cascata amiloide postula que a agregação do peptídeo beta amiloide (βA) no parênquima cerebral é o primeiro evento de uma cascata neurodegenerativa que culmina com o desenvolvimento da doença de Alzheimer (DA), uma forma de demência amnésia progressiva que causa a interrupção global das funções cognitivas do indivíduo. A neurotoxicidade do peptídeo βA está especialmente relacionada à sequência de aminoácidos 25-35 que corresponde ao peptídeo β-amiloide 25-35 (βA25-35), usado como modelo patomimético da DA em estudos que investigam os diversos eventos patogênicos observados na patologia. Entre as ações neurotóxicas do peptídeo βA25-35 está a produção exacerbada de espécies reativas (ERs), dessa forma, compostos com caráter antioxidantes são alvo de pesquisas na área no intuito de restabelecer o equilíbrio oxidativo interrompido pelo peptídeo. O canabidiol (CBD), fitocanabinoide não psicomimético presente em plantas do gênero Cannabis, possui ação antioxidante e, embora apresente potencial terapêutico, as pesquisas com o CBD ainda são incipientes diante da toxicidade amilóide e da atuação do fitocanabinoide em várias vias neuromoduladoras para além do sistema endocanabinoide. A compreensão das ações neurotóxica do peptídeo βA25-35 é dificultada pela sua complexidade bioquímica in vitro e in vivo, o que acarreta protocolos divergentes na literatura para diferentes tipos celulares. Assim, esse estudo explorou diferentes concentrações, formas de tratamentos e tempos de exposição ao peptídeo βA25-35 e ao CBD, nas formas isolada e full spectrum, em células hipocampais da linhagem HT22 para identificação de padrões de neurotoxicidade e neuroproteção. Foi observado que as concentrações de 5, 10 e 20 μM do peptídeo βA25-35 são neurotóxicas para a referida linhagem celular. Quanto aos CBDs, foi observado que o CBD isolado (CBDiso) na concentração de 10 μM reduz a viabilidade das células, enquanto o full spectrum (CBDful) não reduz a viabilidade das células mesmo na concentração mais alta avaliada, 40 μM. Na concentração de 5 μM, o CBDful mantém o equilíbrio oxidativo das células expostas ao peptídeo βA25-35 10 μM, diferente do observado para o CBDiso na mesma concentração. Na menor concentração avaliada, 1 μM, o pré-tratamento tanto com CBDiso quanto com CBDful não foi capaz de conter as ERs de oxigênio geradas pelo peptídeo βA25-35 5 μM. Os resultados indicam uma delicada associação dose-resposta entre diferentes concentrações de CBD e a neurotoxicidade exibida pelo peptídeoβA25-35 em diferentes concentrações, além disso, foi observado que o CBDful apresenta melhores resultados nas condições exploradas neste estudo.Item Análise proteômica comparativa de amostras de Trypanosoma cruzi pertencentes aos genótipos TcII e TcVI, isoladas de pacientes com doença de Chagas crônica.(2017) Inácio, Luciana de Jesus; Borges, William de Castro; Lana, Marta de; Oliveira, Maykon Tavares de; Borges, William de Castro; Palmisano, Giuseppe; Veloso, Vanja MariaO Trypanosoma cruzi é um parasito da ordem Kinetoplastida, agente etiológico da doença de Chagas (DCh), uma enfermidade de evolução crônica progressiva que afeta os sistemas cardiovascular, gastrointestinal e nervoso do hospedeiro humano. Esse protozoário é um parasito intracelular obrigatório que apresenta quatro estágios evolutivos: formas epimastigotas e tripomastigotas metacíclicas no sistema digestivo do inseto vetor; formas amastigotas (intracelulares) e tripomastigotas sanguíneas que parasitam o hospedeiro mamífero. A espécie está subdividida em seis genótipos distintos ou discret typing units (DTUs), nomeados TcI a TcVI, e TcBat. Vários estudos foram conduzidos visando correlacionar a variabilidade genética do T. cruzi com sua biologia e as manifestações clínicas da DCh, e a proteômica representa uma abordagem interessante para estudar mudanças globais na expressão de proteínas entre os diferentes genótipos. O objetivo deste trabalho foi caracterizar alguns parâmetros biológicos por meio de ensaios in vitro e realizar a análise proteômica quantitativa de amostras de T. cruzi pertencentes aos genótipos TcII e TcVI isoladas de pacientes com doença de Chagas crônica, provenientes do Vale do Jequitinhonha, MG. Para este fim, cada amostra de T. cruzi foi cultivada em meio LIT para determinação da curva de crescimento ao longo de 20 dias. A taxa de metaciclogênese foi avaliada em meio Grace. Células “Vero” foram infectadas com tripomastigotas obtidas da diferenciação em meio Grace para avaliar as taxas de infectividade e de multiplicação intracelular de cada amostra nos tempos de 24, 48 e 72 horas de cultivo. Os proteomas das três amostras de epimastigotas de T. cruzi (1107 – TcII, 229 e 2119 – TcVI; em fase exponencial) foram analisados por nano-UHPLC-MS/MS. Para identificação, quantificação label free e comparação das proteínas, foi utilizado o software PEAKS, versão 8, e a categorização das proteínas foi realizada pelo software Blas2GO versão 4.1. Os resultados obtidos revelaram diferenças significativas entre os genótipos TcII e TcVI. A amostra do genótipo TcII apresentou maior área sob a curva na análise do crescimento em meio LIT, enquanto as taxas de metaciclogênese, infectividade e desenvolvimento intracelular foram maiores nas amostras do grupo genético TcVI. A análise proteômica shotgun permitiu a identificação de 3833 proteínas, dentre as quais 212 exibiram expressão diferencial. Dessas proteínas, a maioria encontrava-se com a expressão aumentada nos isolados do genótipo TcVI. Este trabalho permitiu apontar diferenças biológicas e metabólicas importantes entre os isolados investigados e a identificação de possíveis assinaturas proteicas dos genótipos TcII e TcVI.Item Avaliação in silico e in vitro do efeito tripanocida de óleos essenciais e desenvolvimento de sistemas nanoestruturados como alternativa terapêutica da doença de Chagas.(2019) Seibert, Janaína Brandão; Santos, Orlando David Henrique dos; Vieira, Paula Melo de Abreu; Alexander, Cameron; Santos, Orlando David Henrique dos; Vieira, Paula Melo de Abreu; Silva, André Talvani Pedrosa da; Costa, Daniela Caldeira; Coelho, Eduardo Antônio Ferraz; Santos, Silvana Maria ElóiA falta de uma terapêutica tripanocida eficiente, principalmente na fase crônica da doença de Chagas e sem a presença de efeitos adversos intensos impulsiona a pesquisa para o desenvolvimento de novos fármacos. As substâncias produzidas através do metabolismo secundário de plantas podem apresentar diferentes efeitos biológicos e serem utilizadas como princípios ativos no tratamento de doenças. Dessa forma, o objetivo desse trabalho foi caracterizar quimicamente os óleos essenciais extraídos das espécies Cymbopogon densiflorus, Cymbopogon nardus, Melaleuca leucadendron e Microlicia graveolens, bem como avaliar a atividade anti-Trypanosoma cruzi dos fármacos livres e após encapsulamento em sistemas nanoestruturados. A obtenção desses óleos ocorreu a partir da hidrodestilação das partes aéreas, com rendimentos em torno de 0,1 a 2,0% de acordo com a espécie. A caracterização realizada através da cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas permitiu a identificação de mais de 90% dos compostos, com presença majoritária de monoterpenos oxigenados. A partir da análise in silico foi possível prever inicialmente que todos os óleos em estudo apresentariam potencial contra o parasito T. cruzi. No entanto, na avaliação in vitro desta atividade utilizando a cepa Tulahuen, somente o óleo de folhas de C. densiflorus se revelou ativo, a partir de uma CI50 sobre o parasito equivalente a 60 μg/mL (IS= 3,8). No ensaio de permeabilidade de membrana do parasito, concentrações superiores a 30 μg/mL de óleo apresentaram diferenças em relação ao controle. Este resultado foi confirmado através da microscopia eletrônica de transmissão. Além disso, sistemas nanoemulsionados, lipossomais e micelares carregados de óleo essencial e/ou benznidazol foram desenvolvidos e apresentaram tamanho em escala nanométrica (<500 nm). A adição dos princípios ativos favoreceu a homogeneidade de distribuição de tamanho para todas as formulações. Além disso, potencial zeta negativo e um pH ácido também definiram as formulações. A estabilidade dos sistemas foi avaliada e apenas os lipossomas contendo ambos os fármacos foram instáveis. As formulações foram capazes de reproduzir a atividade tripanocida apresentada pelo óleo e benznidazol a partir de concentrações inferiores quando comparadas aos fármacos livres. No entanto, as micelas foram caracterizadas pelos maiores índices de seletividade e um efeito sinérgico foi comprovado quando ambos os fármacos foram encapsulados concomitantemente nessa forma farmacêutica. Sendo assim, os resultados desse trabalho demonstram o óleo essencial de folhas de C. densiflorus como candidato potencial ao tratamento da doença de Chagas, o qual é capaz de eliminar o T. cruzi in vitro a partir de baixas concentrações. Em adição, as formas micelares contendo benznidazol podem ser uma alternativa na quimioterapêutica chagásica tanto na sua forma simples, bem como, em combinação com o óleo essencial de C. densiflorus.